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pplus aav助手提高产量和质量海报
利用RAAV作为治疗转基因交付的病毒载体仍需要提高产量和特异性，以提高较低的矢量剂量，从而提高制造成本，并提高患者的安全性。为此，我们的研究重点是开发新型技术，以确保使用瞬态转染的高产RAAV颗粒制造，并增强RAAV矢量的特征，这些功能对包装材料的整体规模和交付的特异性作用。在这里，我们介绍了设计新的辅助质粒（Phelpers）的最先进方法，目的是提高从悬浮培养物获得的病毒粒子的感染率（TU/mL）和质量（完全|空比）。我们借此机会利用了我们的专有DNA组装方法技术，以探索在合成质粒中模块化组装的多种遗传特征的协同作用。比较几种版本的合理设计的Phelpers的生物学活性，这使我们确定了在每个经过测试的生物生产条件下都能超过现有的辅助质粒的最佳构型。我们在DNA质粒设计和组装方面的专业知识以及RAAV生产的可扩展转染解决方案使我们有可能提高基因治疗产品的生产率和特异性。
工业微生物学
IV形态和细菌的精细结构形态 - 大小和形状；安排。 细菌细胞的结构 - 胶囊，鞭毛，运动，fimbrae或pili；趋化性；细胞壁质膜；介质；细胞质：核糖体；核苷，质粒；细胞质夹杂物（颗粒，脂质颗粒，糖原，硫颗粒，磁体，磁体，气囊泡，气体液泡），孢子和囊肿，氰基细菌，藻类，algae，algae，fungi，真菌，病毒的细胞结构IV形态和细菌的精细结构形态 - 大小和形状；安排。细菌细胞的结构 - 胶囊，鞭毛，运动，fimbrae或pili；趋化性；细胞壁质膜；介质；细胞质：核糖体；核苷，质粒；细胞质夹杂物（颗粒，脂质颗粒，糖原，硫颗粒，磁体，磁体，气囊泡，气体液泡），孢子和囊肿，氰基细菌，藻类，algae，algae，fungi，真菌，病毒的细胞结构
Temple University CRIS/CAS9生物安全指南
病毒输送，CAS9和GRNA是否会在单个转移载体/质粒或单独的转移载体/质粒上一起传递（因为它可以赋予更大的安全性）？使用相同病毒载体交付Cas9和GRNA的情况，如果有可能使一个或多个人类肿瘤抑制基因失活的话，可能会给实验室工人带来额外的风险。请考虑因这种风险而意外暴露的任何潜在风险，并证明您的实验设计是合理的。
RAAV制造的一种新颖的合成DNA替代品
图1：ANJ-DNA生产Raav。anj-DNA旨在编码辅助构建体和RAAV生产所需的repcap以及利益基因（GOI）。有趣的是，我们的GOI旨在具有模仿AAV2 ITR的发夹结构，因此可以复制并将其包装到Raav中，而无需额外的侧翼序列。可以定制这三个构造以编码任何必需的GOI或优化的助手序列。ANJ-DNA也可以与其他质粒或包装细胞系组合使用，以进行AAV产生。
有效地从cubriadus nantongensis x1t中的有机磷杀虫剂降解基因opdb通过红色系统
摘要：Cupriavidus Nantongensis X1 T是Cupriavidus属的一种菌株，可以降解八种有机磷杀虫剂（OPS）。Cupriavidus物种中的常规遗传操作是耗时，难以控制的。簇状的定期间隔短的短滴虫重复（CRISPR）/相关蛋白9（CAS9）系统已成为用于原核生物和真核生物的基因组编辑的强大工具，这是由于其简单，效率和准确性。在这里，我们将CRISPR/ CAS9与红色系统相结合，以在X1 T菌株中执行无缝的遗传操纵。构建了两个质粒，PACASN和PDCRH。 PACASN质粒含有CAS9核酸酶和红色重组酶，PDCRH质粒包含X1 T菌株中有机磷的水解酶（OPDB）的双单引导RNA（SGRNA）。 对于基因编辑，将两个质粒转移到X1 T菌株中，并在其中发生了遗传重组的突变菌株，从而导致OPDB的靶向缺失。 同源重组的发生率超过30％。 生物降解实验表明，OPDB基因负责有机磷杀虫剂的分解代谢。 这项研究是第一个使用CRISPR/ CAS9系统来靶向Cupriavidus属的基因靶向的，它进一步了解了我们对X1 T菌株中有机磷杀虫剂降解过程的理解。构建了两个质粒，PACASN和PDCRH。PACASN质粒含有CAS9核酸酶和红色重组酶，PDCRH质粒包含X1 T菌株中有机磷的水解酶（OPDB）的双单引导RNA（SGRNA）。对于基因编辑，将两个质粒转移到X1 T菌株中，并在其中发生了遗传重组的突变菌株，从而导致OPDB的靶向缺失。同源重组的发生率超过30％。生物降解实验表明，OPDB基因负责有机磷杀虫剂的分解代谢。这项研究是第一个使用CRISPR/ CAS9系统来靶向Cupriavidus属的基因靶向的，它进一步了解了我们对X1 T菌株中有机磷杀虫剂降解过程的理解。
建立科罗拉多tick壁虱发烧病毒的反向遗传学系统
具有12个分割的双链RNA基因组的Colorado Tick热病毒（CTFV）是一种致病性arbovirus，可引起人类严重疾病。然而，在分析复制机制和致病性的分析中几乎没有取得进展。这种病毒学约束是由于缺乏CTFV的反向遗传学系统。因此，我们旨在建立系统。最初，在各种细胞系中研究了CTFV复制的功效。CTFV在许多来自不同宿主和器官的细胞类型中生长。随后，用编码编码12个CTFV基因段中每个链的质粒，编码所有CTFV蛋白的表达质粒和vercinia vercinia病毒RNA-RNA粘贴酶转染了稳定表达T7 RNA聚酶的BHK-T7细胞。转染后，将细胞与Vero或HeLa细胞共培养。使用该系统，我们营救了带有肽标记的病毒蛋白的单种植体和重组病毒。此外，还建立了使用表达T7 RNA聚合酶的Expi293F细胞的改进系统，从而使重组报告基因CTFV的产生。总而言之，这些用于CTFV的反向遗传学系统将极大地归因于了解病毒复制机制，发病机理和传染性，最终促进了有理处理和候选疫苗的发展。
方案 使用 CRISPR/Cas9 在马克斯克鲁维酵母中进行无标记基因敲除和敲低的方案
人们对食品和工业酵母马克斯克鲁维酵母的菌株工程越来越感兴趣，不同的研究小组已经描述并使用了许多 CRISPR/Cas9 系统。我们开发的方法允许使用细胞的内源性 DNA 修复机制非常快速有效地灭活靶基因。我们使用的菌株和质粒是免费提供的，在这里我们提供了一套集成的方案，可以轻松灭活基因并将 DNA 片段精确整合到基因组中，例如用于启动子替换、等位基因交换或引入点突变。这些方案使用 Cas9/gRNA 表达质粒 pUCC001 和 Golden Gate 组装来对靶向序列进行分子克隆。提供了一组全基因组的靶向序列。在野生型菌株或缺乏非同源末端连接 (NHEJ) DNA 修复的菌株中使用这些质粒，第一组方案解释了如何在精确目标处引入插入/缺失（NHEJ 介导）或精确缺失（同源性依赖性修复 (HDR) 介导）。第二组方案描述了如何交换启动子或编码序列以产生重编程基因。这些方法不需要使用显性或营养缺陷型标记基因，因此产生的菌株不含标记。这些方案已在多个 K. marxianus 菌株中进行了测试，非常简单，可以在任何分子生物学实验室中进行，无需专门的设备。
加州大学圣克鲁斯分校
生长素诱导降解 (AID) 系统已成为一种强大的工具，可有条件地消耗多种生物体和细胞类型的蛋白质。在这里，我们描述了一种工具包，用于增强秀丽隐杆线虫中 AID 系统的使用。我们已经生成了一组单拷贝、组织特异性（生殖系、肠道、神经元、肌肉、咽喉、皮下组织、接缝细胞、锚细胞）和全体细胞 TIR1 表达菌株，这些菌株携带共表达的蓝色荧光报告基因，以便在实验中使用红色和绿色通道。这些转基因被插入常用的、特征明确的基因座中。我们证实，我们的 TIR1 表达菌株对几种核和细胞质 AID 标记的内源性底物产生了预期的消耗表型。我们还构建了一组质粒，用于构建修复模板，以通过 CRISPR/Cas9 介导的基因组编辑生成荧光蛋白::AID 融合。这些质粒与秀丽隐杆线虫群体中常用的基因组编辑方法（Gibson 或 SapTrap 组装质粒修复模板或 PCR 衍生的线性修复模板）兼容。这些试剂将共同补充现有的 TIR1 菌株，并促进快速和高通量的基因荧光蛋白::AID 标记。这组新的 TIR1 表达菌株和模块化、高效的克隆载体可作为直接组装 CRISPR/Cas9 修复模板的平台，用于条件性蛋白质消耗。
SDGI全球大学（SGU）
单元1分子生物学和遗传工程DNA复制，转录和翻译，限制酶，连接酶和分子克隆，PCR，PCR，凝胶电泳和Southern印迹，基因编辑技术（CRISPR- CAS9），质粒，载体，载体和可选标记。生物过程工程和应用发酵过程和生物反应器，下游加工，生物技术的工业应用（农业，药品，环境）。重组DNA技术克隆载体，基因库和cDNA合成，重组蛋白的表达，生物的遗传操纵。
靶向trem2-tyrobp跨膜结合的药物筛查
Tyrobp TMD在膜上旋转蓝色。从T18和T25控制质粒获得的颜色背景来自偶然的细胞质结合。b）与空质粒相比，相对强度的中值，四分位数和范围值。在不同配置下对X-GAL滴的半定量分析（T18/T25 N = 99; ZIP :: T18/ZIP :: T25 N = 81; TREM2TMD :: T18/Tyrobp TMD :: T25 :: T25 N = 57）。25