使用LAMP技术测量RobstԭԧDNA聚合酶的DNA链位移。使用细菌gDNA作为模板在等温对照下进行测定。将诸如模板,底漆,bu剂和放大器的方法等浓度进行操作。在UV LightAōer琼脂糖凝胶电泳下可视化灯产物。对酶的酶含量进行了12个月的储存测试,并发现该酶是稳定的。
单位定义:TAQ DNA聚合酶的一个单位定义为将10 nmol的脱氧核糖核苷酸纳入DE-81的多核苷酸分数,在70°C下在DE-81上吸附到多核苷酸级分中,在以下测定条件下测量:67 mm tris-Hcl 8.8(pH 8.8 at 25°C) 2-甲醇,50 mM NaCl,0.1 mg/ml BSA,0.75 mM活性小腿胸腺DNA,每个DNTP的0.2 mM,0.4 MBQ/ml [3 H] -DTTP。
蛋白浓度(OD 280)由OD 280吸光度确定。物理纯度,然后进行银色染色检测。通过比较浓缩样品中污染物带的聚集质量与稀释样品中蛋白蛋白蛋白带的质量来评估纯度。单链核酸酶在含有放射性标记的单链DNA底物的50 µL反应中确定,在37°C下孵育4小时4小时。双链外切核酸酶在50 µL反应中确定,该反应含有放射性标记的双链DNA底物和10 µL的酶溶液在37°C下孵育4小时。双链核酸内切酶在50 µL反应中确定,该反应含有0.5 µg质粒DNA和10 µL的酶溶液在37°C下孵育4小时。e.coli 16S rDNA污染使用5 µL R含量的酶溶液的样品变性并在Taqman QPCR测定中筛选,以使用污染的大肠杆菌基因组DNA,使用寡核苷酸引物污染了与16S rRNA locus相对应的寡核苷酸引物。提供:25mm Tris-HCl,1mm DTT,0.1mm EDTA,50%甘油(25°C时pH 7.4)。提供:10倍蓝色缓冲区(B0110):500mm NaCl,100mm Tris-HCl,100mm MGCL 2,10mm DTT(25 c)pH 7.9 pH 7.9)。用法说明:5´-overhang(1)
建议的存储和稳定性长期存储在-20°C。在标签上陈述了-20°C时的产品到期。选项:在+4°C下存储长达6个月。质量控制TAQ DNA聚合酶的污染活性测试,没有核酸内切酶活性的痕迹,缺口活性或核酸外切酶活性。单位定义一个单位定义为在标准测定条件下,在72°C下,在30分钟内将10 nmol的DNTP纳入酸性dntP的聚合酶量。协议该协议是确保使用TAQ DNA聚合酶时确保最佳PCR的指南。最佳反应条件,例如孵育时间,温度和模板DNA量可能会有所不同,必须单独确定。1。解冻10x缓冲液,DNTP混合和底漆溶液。必须完全解冻溶液(一些缓冲液需要达到室温)并在使用前彻底混合以避免局部盐浓度。将所有组件放在冰上。聚合酶在甘油中提供,不需要解冻。始终将其保持在-20°C。2。与用于DNA制备或产品分析的区域中建立了反应混合物。始终在冰上工作。
蛋白质的来源:一种重组大肠杆菌菌株,携带来自嗜热有机体Thermus aquaticus YT-1的TAQ DNA聚合酶基因。单位定义:1个单位定义为将在75°C的30分钟内将10 nmol的DNTP纳入酸 - 不溶性材料的酶。分子量:93,910 Daltons质量控制分析:使用2倍连续稀释方法测量单位活动。在1X反应缓冲液中制成酶的稀释液,并将其添加到含有小腿胸腺DNA,25 mM TAPS(pH 9.3),50 mM KCl,2.0mm MGCL2,1 mM DTT,3H-DTTP和100 µm DNTP的50 µL反应中。 在75°C下孵育10分钟,浸入冰上,并使用Sambrook和Russell的方法进行分析(Molecular Cloning,V3,2001,pp。 A8.25-A8.26)。 蛋白浓度(OD 280)由OD 280吸光度确定。 通过浓缩和稀释酶溶液的SDS-PAGE评估物理纯度,然后进行银色染色检测。 通过比较浓缩样品中污染物带的聚集质量与稀释样品中蛋白蛋白蛋白带的质量来评估纯度。 单链核酸酶在含有放射性标记的单链DNA底物的50 µL反应中确定,在37°C下孵育4小时4小时。 双链外切核酸酶在50 µL反应中确定,该反应含有放射性标记的双链DNA底物和10 µL的酶溶液在37°C下孵育4小时。 双链核酸内切酶在50 µL反应中确定,该反应含有0.5 µg质粒DNA和10 µL的酶溶液在37°C下孵育4小时。在1X反应缓冲液中制成酶的稀释液,并将其添加到含有小腿胸腺DNA,25 mM TAPS(pH 9.3),50 mM KCl,2.0mm MGCL2,1 mM DTT,3H-DTTP和100 µm DNTP的50 µL反应中。在75°C下孵育10分钟,浸入冰上,并使用Sambrook和Russell的方法进行分析(Molecular Cloning,V3,2001,pp。A8.25-A8.26)。蛋白浓度(OD 280)由OD 280吸光度确定。物理纯度,然后进行银色染色检测。通过比较浓缩样品中污染物带的聚集质量与稀释样品中蛋白蛋白蛋白带的质量来评估纯度。单链核酸酶在含有放射性标记的单链DNA底物的50 µL反应中确定,在37°C下孵育4小时4小时。双链外切核酸酶在50 µL反应中确定,该反应含有放射性标记的双链DNA底物和10 µL的酶溶液在37°C下孵育4小时。双链核酸内切酶在50 µL反应中确定,该反应含有0.5 µg质粒DNA和10 µL的酶溶液在37°C下孵育4小时。
循环条件说明 • 重组 Taq DNA 聚合酶是大多数 PCR 应用的首选酶。• 酶的半衰期在 95°C 下为 >40 分钟。• Taq DNA 聚合酶在 PCR 中的错误率为每循环每核苷酸 2.2x10 -5 个错误;准确度(错误率的倒数)即发生错误之前插入的正确核苷酸的平均数量为 4.5x10 -4(根据 中描述的改进方法确定)。• Taq DNA 聚合酶接受修饰核苷酸(例如生物素、地高辛、荧光标记的核苷酸)作为 DNA 合成的底物。• PCR 循环数取决于反应混合物中的模板 DNA 量和 PCR 产物的预期产量。对于大多数 PCR 反应,25-35 个循环通常已足够。少量起始模板可能需要 40 个循环。防止污染的指南
* 提供的两种反应缓冲液均可与 TaqNova DNA 聚合酶一起使用。对于需要高特异性的应用,建议将 10x TaqNova KCl 缓冲液作为首选方法。对于需要高灵敏度和扩增效率的应用(例如扩增多个 DNA 片段),建议使用 10x TaqNova (NH4,) 2SO2 缓冲液。可以评估这两种缓冲液以确定最适合特定应用的缓冲液。
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* 初始变性时间取决于扩增区域内的 GC 含量和 DNA 模板类型。对于非复杂模板,例如质粒 DNA 或 cDNA,建议 1-2 分钟的初始变性步骤。对于更复杂的模板,例如真核基因组 DNA,建议使用更高的温度(98°C)并需要更长的初始变性步骤(3-5 分钟)。
特性 ALzyme-HSTaq 是一种重组耐热酶,在 dNTP 和引物存在下可催化 5'→3' 单链基质 DNA 合成。它具有 5'→3' 外切酶活性,但没有校正活性。ALzyme-HSTaq 可有效扩增长达 5 bp 的 DNA 片段。特定突变使该酶对血液、土壤、植物组织等中所含的某些抑制剂具有抗性。此外,ALzyme-HSTaq 具有脱氧核苷酸转移酶活性,因此相当一部分扩增的 DNA 分子在 3' 端带有突出的脱氧腺苷 (dA) 残基。热启动技术。该酶在 PCR 混合物混合条件下无活性,在初始变性步骤后被激活。ALzyme-HSTaq 浓度为 5 单位/µl。 100 微升酶(ZHSTaq-100)含有 500 单位,500 微升(ZHSTaq-500)含有 2500 单位。ALzyme-HSTaq-B 反应缓冲液为 ALzyme-HSTaq DNA 聚合酶提供最佳条件。