NDP52是一种自噬受体,涉及入侵病原体和受损细胞器的识别和降解。尽管NDP52是在核中首次识别的,并在整个细胞中表达,但迄今为止,NDP52尚无明显的核功能。在这里,我们使用多学科方法来表征NDP52的生化特性和核作用。我们发现,NDP52在文档启动位点具有RNA聚合酶II(RNAPII)的簇,并且其过表达促进了其他转录簇的形成。我们还表明,NDP52的耗竭会影响两个模型哺乳动物细胞中的总体基因表达水平,并且转录抑制作用会影响核中NDP52的空间组织和分子动力学。这将NDP52与依赖性转录中的角色联系起来。此外,我们还表明,NDP52与双链DNA(DSDNA)结合,并具有高度的a(DSDNA),并且这种相互作用会导致体外DNA结构的变化。这与我们的蛋白质组学数据一起表明与核小体重塑蛋白和DNA结构调节剂相互作用富集,这表明NDP52在染色质调节中的可能功能。总的来说,我们在这里发现了NDP52在基因表达和DNA结构调节中的核作用。
每天在基础研究以及临床诊断中使用的多种生物技术技术取决于DNA聚合酶及其内在能力,以使DNA链复制具有惊人的高度有限性的DNA链。对现代分子生物学具有基本重要性的应用,包括聚合酶链反应和DNA测序,如果没有在过去60年中这些酶表征这些酶的进步,则是不可行的。尽管如此,DNA聚合酶仍在增长的施用范围需要鉴定具有量身定制特性的新型酶。在最近的过去,已经开发了针对不同PCR和测序应用优化的DNA聚合酶以及接受多种不自然底物的酶,以合成修饰的核酸的合成和逆转录。
Thermo Scientific™Phusion™高保真DNA聚合酶启用了高性能PCR。自推出以来,Thermo Scientific™Phusion™产品已不断改进,以应对更多的应用和挑战。最新的添加(Thermo Scientific™Phusion™加上DNA聚合酶)适用于许多应用,因为它的高忠诚度,鲁棒性,抑制剂耐受性和通用引物退火。
摘要root-nematode meloidogyne graminicola是水稻生产中经济上重要的害虫。鉴定线虫物种是线虫管理中的重要基础,可以通过提取线虫DNA作为遗传鉴定的早期一步来减少产量损失。这项研究旨在研究基于PCR(聚合酶链反应)和Sanger测序的线虫基因组分析的最佳提取方法和数量。本研究中使用的DNA提取方法是CTAB,SDS和商业试剂盒(Geneaidtm组织/血液DNA迷你试剂盒)。结果表明,三种DNA提取方法可用于基于PCR和Sanger测序的线虫测序,并使用一个线虫,均以第二阶段的少年和一名女性和一名女性,配备了冰期冻结的线虫破坏过程。通过PCR的PCR扩增所有DNA模板,大小为370 bp,而Sanger测序获得了372 bp。
简介 墨西哥利什曼原虫是一种可感染人类的单细胞真核生物,是引起利什曼病的物种之一。由于其毒性较低(引起皮肤利什曼病而非内脏利什曼病)并且能够在适当的无菌培养中容易分化为无鞭毛体形式,它通常被用作分子细胞生物学的模型利什曼原虫物种。我们之前曾描述过表达 Cas9 和 T7 RNA 聚合酶的转基因墨西哥利什曼原虫 MNYC/BZ/62/M379 的生成,该菌株可进行快速反向遗传修饰 1 。由于这不是参考基因组菌株(参考基因组菌株为 MHOM/GT/2001/U1103) 2 并且可能在实验室培养和/或 Cas9 或 T7 表达的选择压力下积累了突变,因此我们对这种广泛使用的菌株的基因组进行了测序,作为设计反向遗传策略的高质量参考。
Catalogue No Description PackSize GEN-TaQ5 GENTaq Taq DNA Polymerase 5U/ul, 500U GEN-RMX-50 GenKit RT-PCR Master Mix kit for cDNA synthesis 50 RXN GEN-TQMX-100 GenKit qPCR Master Mix Kit with SYBRGREEN and ROX 100RXN GEN-TMXG-100 Green Dye PCR Master Mix 100Rxn GEN-PCR-MM-100 PCR主混合套件(2x)(带有100 bp的DNA梯子),每个Gen-PCR-RMM-5-100红色染料PCR主混合(2x),5x100,每个反应每个反应,每个反应,每个gen-Hottaq-3-1000-A HotStart Taq DNA聚合酶(3 U/µL)每个Gen-HotpCr-MM-1x100 diverist Masterivions diverip Master
RNA 聚合酶 (Pol) I 对核糖体 RNA 前体的转录是细胞生长的主要决定因素,并且在许多癌症类型中都观察到了失调。在这里,我们展示了从携带最大亚基上的基因组 GFP 融合的细胞中纯化人类 Pol I,从而可以跨物种进行酶的结构和功能分析。与酵母相反,人类 Pol I 带有单亚基柄,体外转录表明校对活性降低。在接近天然状态下确定人类 Pol I 低温电子显微镜重建可合理化疾病相关突变的影响,并揭示内置于 Pol I 亚基 RPA1 序列中的额外结构域。这个“dock II”结构域类似于无法与 DNA 结合的截短的 HMG 盒,可作为后生动物的下游转录因子结合平台。生化分析、原位建模和 ChIP 数据表明,拓扑异构酶 2a 可通过域被募集到 Pol I,并与包含因子 UBF 的 HMG 盒域协同作用。这些后生动物 Pol I 转录系统的适应性可能允许有效释放在转录泡下游积累的正 DNA 超螺旋。
* PA中的其他氨基酸取代,在参考文献1(Omoto S等,2018)和#2(Hashimoto T等,2020年)中研究了Baloxavir易感性没有变化的其他氨基酸取代。通过基于细胞培养的测定法评估(焦点,斑块或屈服分析,高含量成像中和(提示)和ViroDot分析)。EC 50倍变化。b细胞,细胞培养;临床试验;小鼠,鼠标模型; RG,反向遗传学; SUR,监视研究; BXA,在Baloxavir压力下选出的取代;不,Baloxavir不使用。c e23g(T0831)。通过表型测定测试了带有E23G的RG病毒。d对应于A36V A型A型PA中的A36V。 E对应于A型A型PA中的E119D。参考文献1。Omoto S,Speranzini V,Hashimoto T,Noshi T,Yamaguchi H,Kawai M,Kawaguchi K,Uehara T,Shishido T,Naito A,Naito A,Cusack S.2018。通过核酸内切酶抑制剂Baloxavir maroxil诱导的流感病毒变体的表征。SCI REP 8:9633。2。Hashimoto T,Baba K,Inoue K,Okane M,Hata S,Shishido T,Naito A,Wildum S,Omoto S.2020。在Baloxavir Marboxil的临床试验中检测到的流感病毒的三聚体RNA聚合酶复合物中氨基酸取代的全面评估。流感其他呼吸病毒DOI:10.1111/irv.12821。3。ince WL,Smith FB,O'Rear JJ,Thomson M.2020。J Infect DIS 222:957-961。 4。 2018。J Infect DIS 222:957-961。4。2018。治疗 - 伴随流感病毒聚合酶酸性取代率与Balosavir Maroxavir Marboxil试验中的i38中的i38中的酸性取代相关。Noshi T, Kitano M, Taniguchi K, Yamamoto A, Omoto S, Baba K, Hashimoto T, Ishida K, Kushima Y, Hattori K, Kawai M, Yoshida R, Kobayashi M, Yoshinaga T, Sato A, 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van Bakel H, Tokita A, Hagiwara H, Izumida N,Kuroki H,Nishino T,Wada N,Koga M,Adachi E,Jubishi D,木谷H,Kawaoka Y.流感A的变体降低了对日本患者分离的Baloxavir敏感性的变体,并通过呼吸道液滴进行拟合。NAT微生物5:27-33。 Takashita E, Kawakami C, Morita H, Ogawa R, Fujisaki S, Shirakura M, Miura H, Nakamura K, Kishida N, Kuwahara T, Mitamura K, Abe T, Ichikawa M, Yamazaki M, Watanabe S, Odagiri T, On Behalf Of The Influenza VirusNAT微生物5:27-33。Takashita E, Kawakami C, Morita H, Ogawa R, Fujisaki S, Shirakura M, Miura H, Nakamura K, Kishida N, Kuwahara T, Mitamura K, Abe T, Ichikawa M, Yamazaki M, Watanabe S, Odagiri T, On Behalf Of The Influenza Virus
描述TAQ DNA聚合酶是一种从热毛虫中分离出来的热稳定酶。酶在5´-> 3´方向上催化互补DNA链的合成,还具有5´-> 3´外丝酶活性。在扩增DNA片段时,TAQ聚合酶在3'结束腺苷悬垂的情况下增加。这可以用于克隆PCR生成的DNA片段。酶的优势是其高加工性[1000个碱基对(BPS)的扩增需要<1分钟]。 酶的缺点是它缺乏3´-> 5´EXONCOLLEASE校对活动,这说明了误差率很高(大约有1个错误至10 5-10 6基本BPS)。 该酶的主要用法是在诊断分析中用于扩增高达5000 bps的DNA片段。酶的优势是其高加工性[1000个碱基对(BPS)的扩增需要<1分钟]。酶的缺点是它缺乏3´-> 5´EXONCOLLEASE校对活动,这说明了误差率很高(大约有1个错误至10 5-10 6基本BPS)。该酶的主要用法是在诊断分析中用于扩增高达5000 bps的DNA片段。