PCR技术(聚合酶链反应)允许您在几个小时内指数增加DNA(DNA片段)。实施原理很简单,部分模仿了自然的DNA重复或复制。在PCR时,将双链DNA螺旋加热至94°C,这确保了链断开放至2(互补)单链DNA分子。使用引物(短DNA片段作为DNA合成的起点),DNA - 聚合酶和正确的构建块为每个链创建了一个新的互补链。底漆在断裂的DNA链上寻找它们的互补部分。DNA - 聚合酶酶将使用添加的构建块从引物的两条链的互补部分组成。现在有两条双DNA链。这两条链在随后的周期后和另一个循环之后给出了四个链,...以这种方式合成并复制了由两个引物定义的特定DNA区域(由两个引物定义)。
注:同源臂位于敲入位点上游和下游约 500–1,000 bp 处。图 1 C 为 SIN3A 示例的供体载体示意图。为选取基因组区域作为同源臂,我们使用 Primer-BLAST ( https://www.ncbi.nlm.nih.gov/tools/primer-blast/ ) 设计了两对引物,分别位于 SIN3A 终止密码子上游 500–1,000 bp 处和下游 500–1,000 bp 处。也可以使用其他程序设计引物。正向和反向引物之间的区域用作同源臂。我们选择 SIN3A 终止密码子上游 501 bp 序列作为左同源臂(图 2 A 和 2B 中的 SIN3A 左),并选择 SIN3A 终止密码子下游 612 bp 序列作为右同源臂(图 2 A 和 2B 中的 SIN3A 右)。
对于使用 CRISPR 技术的敲除富集实验,设计步骤中选择的 gRNA 和 Invitrogen™ TrueTag™ 供体引物将自动包含在内。该工具还将添加 TrueTag Knockout Enrichment Donor DNA Kit,其中包含所需的供体模板、PCR 试剂和清理试剂盒,以生成可用于转染的供体 DNA。还包括 Invitrogen™ TrueTag™ 验证引物,用于进行连接分析,以确保供体模板正确插入。
HBB,β-珠蛋白基因; HBSS,镰状细胞突变的纯合子; HCT,造血细胞移植; RBC,红细胞; SCD,镰状细胞疾病; Voe,Vaso-Occlusive活动。 1。 Kato GJ等人。 nat Rev dis Primers 2018; 4:18010。 2。 Williams TN等人。 Annu Rev Genomics Hum Genet 2018; 19:113–147。 3。 Platt OS等。 NEJM 1 994; 330:1639–44。 4。 镰状细胞疾病。 可用:https://www.thelancet.com/pb-assets/lancet/gbd/summaries/diseases/sickle-cell-disorders.pdf。 2023年6月访问。 5。 Wastnedge E等。 J Glob Health 2018; 8(2):021103。 6。 镰状细胞疾病。 可用:https://www.nhlbi.nih.gov/health/sickle-cell-disease。 2023年6月访问。 3HBB,β-珠蛋白基因; HBSS,镰状细胞突变的纯合子; HCT,造血细胞移植; RBC,红细胞; SCD,镰状细胞疾病; Voe,Vaso-Occlusive活动。1。Kato GJ等人。 nat Rev dis Primers 2018; 4:18010。 2。 Williams TN等人。 Annu Rev Genomics Hum Genet 2018; 19:113–147。 3。 Platt OS等。 NEJM 1 994; 330:1639–44。 4。 镰状细胞疾病。 可用:https://www.thelancet.com/pb-assets/lancet/gbd/summaries/diseases/sickle-cell-disorders.pdf。 2023年6月访问。 5。 Wastnedge E等。 J Glob Health 2018; 8(2):021103。 6。 镰状细胞疾病。 可用:https://www.nhlbi.nih.gov/health/sickle-cell-disease。 2023年6月访问。 3Kato GJ等人。nat Rev dis Primers 2018; 4:18010。2。Williams TN等人。Annu Rev Genomics Hum Genet 2018; 19:113–147。 3。 Platt OS等。 NEJM 1 994; 330:1639–44。 4。 镰状细胞疾病。 可用:https://www.thelancet.com/pb-assets/lancet/gbd/summaries/diseases/sickle-cell-disorders.pdf。 2023年6月访问。 5。 Wastnedge E等。 J Glob Health 2018; 8(2):021103。 6。 镰状细胞疾病。 可用:https://www.nhlbi.nih.gov/health/sickle-cell-disease。 2023年6月访问。 3Annu Rev Genomics Hum Genet 2018; 19:113–147。3。Platt OS等。NEJM 1 994; 330:1639–44。4。镰状细胞疾病。可用:https://www.thelancet.com/pb-assets/lancet/gbd/summaries/diseases/sickle-cell-disorders.pdf。2023年6月访问。5。Wastnedge E等。J Glob Health 2018; 8(2):021103。6。镰状细胞疾病。可用:https://www.nhlbi.nih.gov/health/sickle-cell-disease。2023年6月访问。3
摘要。Zulfahmi,Pertiwi SA,Rosmaina,Elfianis R,Gulnar Z,Zhaxybay T,Bekzat M,Zhaparkulova G.2023。使用RAPD标记物的四种Matoa品种(Pometia pinnata forst&Forst)的母树的分子鉴定。生物多样性24:1524-1529。Pekanbaru City有四个Matoa(Pometia pinnata Forst&Forst)品种,即红色马托阿,黄色马托阿,绿色马托阿和黑色马托阿,但尚无MATOA品种遗传变异的知识。这项研究的目的是使用随机扩增的多态性DNA(RAPD)标记来评估MATOA品种之间的遗传变异,并确定特定标记以区分Matoa品种。最初筛选了18个引物,并使用RAPD标记用十二个引物分析了四个Matoa品种。这项研究的结果发现,十二个选择的RAPD引物产生了39个片段,片段尺寸范围为200至1500 bp。碎片多态性的百分比为80.41%,表明MATOA品种的遗传变异很高。这项研究中MATOA的高遗传变异是由于该领域的Matoa品种之间的交叉授粉引起的。11个引物可以用特定带区分四个Matoa品种。育种者和农民可以利用获得独特的带,以选择父母的基础,以改善Matoa,品种或克隆保护,发现托儿所中幼苗纯度的遗传,并验证将要种植的幼苗的独创性。
图4。砷矿甲基转移酶(ARSM)基因在鳟鱼湖,钢铁湖和基拉尼湖的周围DNA中检测到了PCR,使用靶向该基因保守区域的退化引物。从三个南部海湾声音湖中收集了植物,砷湖:鳟鱼湖(<1 ppb),钢铁湖(〜2 ppb)和基拉尼湖(〜20 ppb)。DNA以不同的浓度在聚合酶链反应(PCR)中用作模板,以不同的浓度:1 ng/ul,2 ng/ul和4 ng/ul。用两个引物对之一进行 PCR:与16S rRNA或ARSM基因互补。琼脂糖凝胶电泳。该图显示了用荧光染料,分子量(MW)梯子和可变标签可视化的凝胶。16S rRNA引物预计将导致111个碱基对(BP)的PCR产物,并且ARSM引物(MF1和MR2)预计将导致302至346 bp之间的PCR产物。
环氧涂层由于多种原因被广泛使用:对化学物质的高电阻,对各种底物的出色粘附,韧性,高电阻,高温和低温下的耐用性,可治愈时低收缩,柔韧性,柔韧性以及可以倒入或不形成赛季的易变的便利性[1 -5]。These properties make them eligible for use in various applications such as protective coatings (for appliance, automotive primers, pipes) [6], encapsulation of electrical and electronic devices, adhesives, bonding materials for dental uses, replacement of welding and riveting in aircraft and automobiles, composites materials in space industry, printed circuitry, pressure vessels and pipes, and construction uses such as flooring,铺路和机场跑道维修[1,7]。