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IL13RA2 整合的基因工程小鼠模型可使 CAR T 细胞靶向儿童高级别胶质瘤
人类肿瘤样本最初是根据芝加哥 Ann and Robert H. Lurie 儿童医院的机构审查委员会批准的方案（#IRB 2019–3164）获得的。所有样本均已去除身份信息。组织切片用 H&E 染色，并进行 IL13RA2（R&D 抗体，cat AF146）IHC 染色。评分由神经病理学家 (CH) 独立进行。根据阳性标记的肿瘤细胞百分比确定分数；0 表示无阳性，1 表示≤10% 阳性肿瘤细胞，2 表示 10–50% 阳性肿瘤细胞，3 表示≥50% 阳性肿瘤细胞。PTEN 免疫组织化学染色在 Leica Bond Rx 平台 (Leica) 上进行。一抗 PTEN 抗体稀释 1:100（Cell Signaling，#9559）。抗兔二抗购自 Leica。使用 Nanozoomer 2.0HT 全幻灯片扫描仪（Hamamatsu Photonic KK）获取数字幻灯片图像，并使用 NDP.view2 软件（Hamamatsu）进行离线观察。细胞系和细胞培养试剂
二甲双胍和抗癌作用：系统洞察其治疗潜力
随着时间的推移，二甲双胍在治疗肥胖等其他疑难病症方面的优势逐渐显现。二甲双胍发挥抗癌作用的主要机制是通过抑制线粒体呼吸链中的复合物 I，激活腺苷酸活化蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白途径 [14- 16]。另一方面，临床前试验的良好成功与临床研究中不明确的表现形成了鲜明的对比。此外，已经证明二甲双胍可以使肿瘤抑制基因 PTEN 杂合小鼠的肿瘤生长减少 25%，PTEN 会导致多种器官中出现肿瘤 [17]。然而，本研究中使用的二甲双胍剂量是临床环境中典型剂量的 10 倍以上。事实上，这些试验中有很多都是使用超药理剂量的二甲双胍进行的，导致血浆中二甲双胍的浓度比人类所能达到的浓度高出 10 到 100 倍。因此，这些研究得出的结论不可能对人类产生同样的影响 [18, 19]。
细胞遗传学体固体瘤测试
HER2 Amplification (indicate tumour primary) Breast Gastric Endometrial Brain Cancer: Gliomas 1p/19q CDKN2A FISH (IDH Mut) EGFR + PTEN FISH (IDH WT) Sarcoma and Carcinoma FISH ^EWSR1 - EWS-Family Tumours ^FUS – Low Grade Fibromyxoid Sarcoma ^SS18 - 滑膜肉瘤 ^MAML2 - 粘膜表皮类癌 ^ETV6 - 分泌癌 ^CDKN2A（p16） - 恶性间皮瘤
在三阴性乳腺癌细胞中，使用吉非替尼和依维莫司共同靶向 EGFR 和 mTOR
三阴性乳腺癌 (TNBC) 不太可能对激素疗法和抗 HER2 靶向疗法产生反应。TNBC 过度表达 EGFR 并表现出 PI3K/AKT/mTOR 信号通路的组成性激活。我们假设同时阻断 EGFR 和 mTOR 可能是治疗 TNBC 的潜在治疗策略。我们研究了 mTOR 抑制剂依维莫司与 EGFR 酪氨酸激酶抑制剂吉非替尼联合在有或没有 PI3K/AKT/mTOR 信号通路激活突变的 TNBC 细胞中的抗肿瘤活性。我们证明依维莫司和吉非替尼在 PI3K 和 PTEN 突变的 CAL-51 细胞系中诱导协同生长抑制，但在 PTEN 缺陷的 HCC-1937 细胞系中没有诱导协同生长抑制。抗增殖作用与 mTOR 和 P70S6K 磷酸化的协同抑制以及 CAL-51 细胞系中 4E-BP1 活性的显著降低有关。我们还表明，联合疗法显著抑制了该细胞系的细胞周期进程并增加了细胞凋亡。基因和蛋白质表达分析表明，联合治疗后细胞周期调节因子显著下调。总之，这些结果表明，mTOR 和 EGFR 的双重抑制可能是治疗 PI3K 激活突变的 TNBC 的有效方法。
摘要 PDF 海报
摘要：近端周围神经损伤 (PNI) 需要长距离轴突再生才能实现目标神经支配和运动功能恢复。虽然成熟的周围神经元在受伤后可以缓慢再生受损的轴突，但在慢性失神经支配后，它们往往无法在运动终板上形成功能性突触，导致即使立即进行手术修复也无法完全恢复运动功能。在过去的十年中，人们付出了很多努力来了解受伤后成功轴突再生所需的分子机制。许多再生相关基因 (RAG) 已被确定在轴突再生中起着不可或缺的作用。在这些 RAG 中，已知在受损的视网膜神经节细胞 (RGC) 中同时消融 PTEN 和 SOCS3 可在视神经挤压伤后诱导持续和长距离的轴突再生。尽管基于病毒的基因传递系统近年来作为各种神经退行性疾病的潜在治疗选择得到了迅速发展，但沉默 PTEN 和 SOCS3 等肿瘤抑制基因可能会对致瘤性产生不良影响，从而限制了它们在临床实践中的治疗应用。因此，本研究旨在识别在神经系统损伤后能够诱导强劲轴突再生和功能恢复的生物活性小分子。我们首先从公开的微阵列数据集中识别了 PTEN 和 SOCC3 同时删除的 RGC 中的差异表达基因，并使用该基因表达谱特征查询药物相关基因表达谱数据库 LINCS，以对生物活性小分子进行计算机筛选。使用模式匹配算法，选出 4 种具有高连接得分的生物活性小分子，使用轴突切断的背根神经节 (DRG) 神经元的体外培养进行功能验证。其中，有一种小分子被发现能有效促进体外培养的 DRG 神经元的神经突生长，以及 PNI 小鼠模型中的体内轴突再生。用这种小分子治疗的小鼠在坐骨神经挤压伤后感觉和运动功能均得到了早期恢复。这些小鼠的复合肌肉动作电位 (CMAP) 幅度也显著增大
Trpm8 在人类和小鼠去势抵抗性前列腺腺癌中的表达为基于 TRPM8 的靶向疗法的临床前开发铺平了道路
摘要：转移性前列腺癌 (mPCa) 是美国和欧洲癌症相关死亡的主要原因之一。雄激素剥夺是 mPCa 的一线疗法；然而，不可避免地会出现对治疗的抵抗，并且疾病会发展到无法治愈的去势抵抗阶段。定义新的靶向疗法对于建立创新且更有效的个性化肿瘤治疗方案是必不可少的。我们使用了 PCa 的基因工程小鼠模型和人类样本来表征 TRPM8 阳离子通道在激素幼稚和去势抵抗性肿瘤中的表达。我们发现 Trpm8 表达标记了惰性 (Pten 缺失) 和侵袭性 (Pten/Trp53 双缺失和 TRAMP) 小鼠前列腺腺癌。重要的是，小鼠和人类去势抵抗性 PCa 都保留了 TRPM8 蛋白表达。最后，我们测试了 TRPM8 激动剂 D-3263 与恩杂鲁胺或多西他赛联合使用对侵袭性小鼠 PCa 细胞系活力的影响。我们的数据表明，D-3263 显著增强了恩杂鲁胺和多西他赛在 TRAMP-C1 和 TRAMP-C2 PCa 细胞系中的促凋亡活性。总之，本研究为临床前体内测试 TRPM8 靶向性提供了基础，这是一种实施晚期 PCa 标准治疗疗效的新策略。
请求研究奖学金
Gulbenkian分子医学研究所（GIMM）在“ T-Cell急性淋巴细胞性白血病中有针对性的年代疗法”的项目下，呼吁一项研究奖学金，并获得了基金会的资助支持/ mct通过国家基金（PIDDAC）。科学领域：癌症学，癌症。奖学金获得者 /入学要求：任何满足要参加非学位学位课程（与工作计划有关的领域）所必需条件的国家，外国和无国籍候选人。被认为是“非学术学位课程”，这些课程是在3月24日的第4款第4条NR 74/2006第4条第3款中提到的课程，只要它们是当前版本的，只要它们是在高等教育机构和至少一个R＆D之间的合作和合作的一项R＆D之间的合作。工作计划和目标：我们先前证明了PI3K-AKT信号的构型激活发生在大多数T-ALL患者中，并且经常因CK2介导的PTEN转移后PTEN失活而经常发生，PTEN是该途径的主要负面调节剂。ck2是一种高度多效激酶，也显示出通过磷酸化BMAL1和PER2来调节昼夜节律分子钟（CMC）。这种串扰的存在使我们假设PI3K-AKT途径过度激活可能以T-All细胞的昼夜节律波动。我们的初步数据支持此概念：PI3K-AKT信号传导以昼夜节律的方式振荡，以不同的T-ALL细胞系（Molt4，HPB-All等）振荡。申请人必须持有以下要求： - 生物医学研究中的MSC学位持有人，重点是肥大学； - 先前在信号转导途径方面的专业知识（高度重视）； - 先前在主要样品以及粘附和悬浮细胞系的细胞培养中经验（强制性）； - 以前的分子生物学技术经验（DNA和RNA提取，QPCR，RT-PCR，Western blot）（强制性）； - 在病毒上清液的生产和处理方面的经验（高度重视）； - 流式细胞仪的先前经验（强制性）； - 以前的殖民地管理经验（高度重视）； - 以前具有实用体内测定的经验（强制性）； - 高责任感，组织和方法； - 积极的个性； - 能够独立工作，也可以具有团队精神； - 对英语的出色知识，包括口语和书面知识。重要的是，我们发现在MOLT4细胞中三种不同的体外药物给药方案之间，对PI3K特异性抑制剂（BKM-120/buparlisib）的敏感性显着差异。
2024; 20（9）：3302-3316。 doi：10.7150/ijbs.96116研究论文ITGA5-PTEN信号传导调节纹状体突触强度和运动配位
背景：帕金森氏病（PD）的特征是底虫nigra pars compacta中多巴胺能神经元的丧失，导致运动和认知功能障碍。PD中突触改变的分子机制仍然难以捉摸，重点是ITGA5在突触完整性和运动配位中的作用，而Tat-Itga5旨在抑制PTEN活性。方法：这项研究利用MPTP诱导的PD动物模型来研究Itga5在纹状体中的表达和作用。技术包括定量PCR，蛋白质印迹，免疫染色，CRISPR-CASRX介导的敲低，电生理测定，行为测试和质谱法。结果：在MPTP诱导的PD模型中，ITGA5表达显着降低。在这些模型中，观察到树突状脊柱密度显着降低，并且观察到纹状体GABA神经元中较薄的棘突的转移，表明突触整合受损。敲低Itga5导致树突分支减少，蘑菇刺减少，棘突增加，改变了突触结构。 电生理分析揭示了动作电位和自发兴奋性突触后电流的变化，表明突触传播改变。 运动行为评估表明，ITGA5缺乏导致良好的运动控制和协调损害。 此外，发现ITGA5与PTEN相互作用，影响AKT信号对于突触发育和运动配位至关重要。 结论：研究表明，ITGA5在维持PD中的突触完整性和运动协调方面起着关键作用。敲低Itga5导致树突分支减少，蘑菇刺减少，棘突增加，改变了突触结构。电生理分析揭示了动作电位和自发兴奋性突触后电流的变化，表明突触传播改变。运动行为评估表明，ITGA5缺乏导致良好的运动控制和协调损害。此外，发现ITGA5与PTEN相互作用，影响AKT信号对于突触发育和运动配位至关重要。结论：研究表明，ITGA5在维持PD中的突触完整性和运动协调方面起着关键作用。ITGA5-PTEN-AKT途径代表了解决PD中突触和运动功能障碍的潜在治疗靶标。
用KRASG12D或KRASG12V突变的AMHR2-CRE小鼠中妇科肿瘤发展的差异
不同的KRAS变体如何影响体内肿瘤的启动和进展。我们假设KRAS G12D或KRAS G12V突变启动肿瘤形成的能力取决于上下文。AMHR2-CRE小鼠在组织中发育到输卵管，子宫和卵巢中的组织中表达CRE重组酶。我们使用这些小鼠来有条件地表达KRAS G12V/ +或KRAS G12D/ +突变。具有基因型AMHR2-CRE PTEN（FL/ FL）KRAS G12D/ +（G12D小鼠）的小鼠具有异常的卵泡结构，并在18周内开发了低级浆液卵巢癌，其渗透率为100％。相比之下，具有基因型AMHR2-CRE PTEN（FL/ FL）KRAS G12V/ +（G12V小鼠）的小鼠具有正常的卵泡结构，其中约90％的子宫肿瘤具有类似于平滑肌瘤和Leiomyosarcomarcoma的组织学特征多样的组织学特征。颗粒细胞肿瘤也在G12V小鼠中发展。 使用RNA测序和反相蛋白阵列分析鉴定出G12D和G12V小鼠子宫组织中细胞信号途径的差异。 我们发现CTNNB1，IL1A，IL1B，TNF，TGFB1，APP和IL6在G12V小鼠中的活性高于G12D小鼠。 这些小鼠模型将有助于研究由KRAS G12V/ +或KRAS G12D/ +突变驱动的信号传导途径的差异，以帮助开发针对特定的KRAS突变变体的靶向疗法。 由KRAS G12V/ +突变驱动的我们的平滑肌瘤模型也将有助于解密从平滑肌瘤到平滑肌肉瘤的恶性发展。颗粒细胞肿瘤也在G12V小鼠中发展。使用RNA测序和反相蛋白阵列分析鉴定出G12D和G12V小鼠子宫组织中细胞信号途径的差异。我们发现CTNNB1，IL1A，IL1B，TNF，TGFB1，APP和IL6在G12V小鼠中的活性高于G12D小鼠。这些小鼠模型将有助于研究由KRAS G12V/ +或KRAS G12D/ +突变驱动的信号传导途径的差异，以帮助开发针对特定的KRAS突变变体的靶向疗法。由KRAS G12V/ +突变驱动的我们的平滑肌瘤模型也将有助于解密从平滑肌瘤到平滑肌肉瘤的恶性发展。
从旧到新——重新利用药物来靶向癌症中的线粒体能量代谢
许多肿瘤的特征是 OXPHOS 水平低。然而，这种病理的原因在不同的癌症类型中有所不同。一些肿瘤携带线粒体 DNA 编码复合物 I 亚基（例如肾嗜酸细胞瘤）或核编码复合物 II 亚基（例如嗜铬细胞瘤和副神经节瘤）的致病突变；其他肿瘤则显示所有 OXPHOS 复合物减少，线粒体 DNA 拷贝数减少；还有一些肿瘤的线粒体质量较低 [9–13]。在许多情况下，这种下调的遗传原因仍然难以捉摸。许多肿瘤均显示 OXPHOS 水平均匀降低，例如嗜酸细胞瘤、神经母细胞瘤、肾细胞癌和星形细胞脑瘤 [10,11,14]。然而，只有一小部分癌和黑色素瘤缺乏 OXPHOS，其他肿瘤仍保留有功能性 OXPHOS 系统 [15–20]。某些癌症亚型的 OXPHOS 依赖性受基因改变和/或肿瘤微环境的影响。例如，肺癌中 KRAS 驱动的三羧酸 (TCA) 循环中葡萄糖的贡献比正常肺组织高 [21]。此外，肺癌中经常检测到 SWI/SNF 染色质复合物成分（包括 SMARCA4）的改变。SMARCA4 突变的肿瘤以 OXPHOS 和呼吸能力增强为特征，因此对 OXPHOS 抑制敏感 [22]。与磷酸酶和张力蛋白同源物 (PTEN) 野生型前列腺癌细胞相比，PTEN 缺陷细胞的线粒体通过复合物 V 消耗 ATP，而不是产生 ATP，这导致体外对复合物 I 抑制的基因型特异性敏感性 [23]。