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定性研究
急性风湿热 (ARF) 是一种对上呼吸道、皮肤或粘膜的化脓性链球菌 (A 组链球菌) 感染的自身免疫反应后的疾病 (1) 。如果不及时治疗，ARF 会影响心脏瓣膜，导致风湿性心脏病 (RHD) (2) 。这种可预防的并发症仍然是一个重大的公共卫生问题。2019 年，全球 RHD 发病率和患病率估计分别分别为 280 万和 4050 万，导致 30 多万人死亡和 1070 万伤残调整生命年 (3) 。尽管全球死亡率和伤残调整生命年趋势有所下降，但大洋洲、南亚和撒哈拉以南非洲的中低收入国家以及发达国家的贫困人群中 RHD 的负担仍然高得令人担忧；例如澳大利亚的原住民和移民人口（4-6）。
2020 年诺贝尔化学奖
研究人员需要修改细胞中的基因才能了解生命的内部运作，这项工作曾经非常耗时，有时甚至不可能完成。细胞基因组就像一本数千卷的巨型百科全书，因此定位特定基因并重写其代码比大海捞针还要困难。然而，多亏了基因剪刀 CRISPR/Cas9，现在只需几周时间就能改变基因代码。正如科学界常常出现的情况一样，这些基因剪刀的发现是出乎意料的。Emmanuelle Charpentier 在研究一种致病细菌化脓性链球菌时发现了一种以前未知的分子 tracrRNA，而这种分子原来是细菌古老的免疫系统 CRISPR/Cas 的重要组成部分。
crispr/cas9系统∗
经常说，世界上最伟大的战斗是微生物之一。的确，如果我们考虑微生物采用的攻击者使用的策略，这并不夸张。这样的战争是噬菌体（病毒）对细菌的攻击。细菌针对入侵病毒采用的一种重要策略是利用群集的定期间隔短的短质体重复序列（CRISPR）和CRISPR相关的核酸酶（CAS），通常称为CRISPR-CAS系统。crispr可在50％的现代细菌和90％的古细菌基因组中发现[1]。Charpentier的尖端研究工作，他曾在维也纳大学工作，后来在瑞典进行微生物研究的Umeå研究，导致发现了CRISPR系统中必不可少的组成部分，RNA分子是一种必不可少的组成部分，这是一种
组合 CRISPR 筛选的比较优化
组合 CRISPR 技术已成为一种变革性方法，可系统地探测冗余基因对的遗传相互作用和依赖性。然而，不同的功能基因组工具在多路复用 sgRNA 方面的表现差异很大。在这里，我们生成并基准测试了十个不同的组合 CRISPR 文库，这些文库以同源物对为目标，以优化双基因敲除筛选。评估了由双化脓性链球菌 Cas9 (spCas9)、正交 spCas9 和金黄色葡萄球菌 (saCas9) 以及 Acidaminococcus 的增强型 Cas12a 组成的文库。我们证明了来自 spCas9 的替代 tracrRNA 序列的组合始终表现出优越的效应大小和 sgRNA 之间的位置平衡，这是一种强大的组合方法来分析多个基因的遗传相互作用。
cas9兔子mab
CRISPR相关蛋白9（CAS9）是RNA引导的DNA核酸酶，是Pyogenes链球菌CRIS-CRISPR-antivirAniviral免疫系统的组成部分，可提供针对外肌小体遗传材料的适应性免疫。CRISPR抗病毒作用的机制涉及三个步骤：（i）宿主细菌获取外国DNA； （ii）CRISPR RNA（CRRNA）的合成和成熟，然后形成RNA-CAS核酸酶 - 蛋白质复合物； （iii）通过宿主细菌获取外源DNA；该络合物识别出外源DNA，并通过CAS核酸酶活性通过裂解而定向干扰。II型CRISPR/CAS抗病毒免疫系统为精确的基因组编辑提供了强大的工具，并具有特定调节基因和治疗应用的潜力。必须在细胞中引入或表达CAS9蛋白和引导RNA（包括CRRNA和反式激活CRRNA（tracroRNA）之间的融合）。导向RNA的5'末端的20个核苷酸序列将Cas9引导到特定的DNA靶位点。因此，可以“编程” Cas9以在体外以及细胞和生物中切割各种DNA位点。CRISPR/CAS9基因组编辑工具已用于包括小鼠和人类细胞在内的许多生物中。研究表明，CRISPR可用于在啮齿动物和灵长类动物胚胎干细胞中产生突变等位基因或报告基因。
增强同源性定向修复以实现高效……
已证明，慢病毒载体基因治疗 X 连锁慢性肉芽肿病 (X-CGD) 是一种可行的方法，但随机载体整合和转导细胞中外源启动子的蛋白质产生低于正常水平，其长期安全性和有效性仍然令人担忧。之前一种基于基因组编辑的方法使用化脓性链球菌 Cas9 mRNA 和寡脱氧核苷酸供体来修复基因突变，显示出恢复生理性蛋白质表达的能力，但在静止的 CD34 1 造血细胞中缺乏足够的效率来进行临床转化。在这里，我们报告 p53 结合蛋白 1 (53BP1) 的瞬时抑制显著增加（2.3 倍）长期同源性定向修复，从而实现高效（与健康供体对照受试者相比为 80% gp91 phox 1 细胞）的 X-CGD CD34 1 细胞的长期校正。 （《血液》2021；137(19):2598-2608）
SLC30A8 基因座的多种遗传变异影响局部超级增强子活性并影响胰腺 β 细胞的存活和功能
缩写：3C，染色体构象捕获；4C，环状染色体构象捕获；ATAC-seq，使用测序检测转座酶可及染色质；Cas9，来自化脓性链球菌的内切酶；CHIP-seq，染色质免疫沉淀和 DNA 测序；CRISPR，成簇的规律间隔的短回文重复序列；CTCF，CCCTC 结合因子；EXT1，外骨化素糖基转移酶 1；GSIS，葡萄糖刺激的胰岛素分泌；GWAS，全基因组关联研究；MED30，RNA 聚合酶 II 转录亚基 30 的介质；pcHi-C，启动子捕获 Hi-C；R，调控区；RAD21，双链断裂修复蛋白 rad21 同源物；SLC30A8，溶质载体家族 30 成员 8；SNP，单核苷酸多态性； T2D，2 型糖尿病；TAD，拓扑关联结构域；UTP23，UTP23 小亚基加工体成分。
Monarch®RNA清理套件
使用Monarch RNA清洁套件（NEB＃T2040）或竞争对手试剂盒（根据制造商的建议）清理了Engen®SgrNA合成试剂盒（NEB＃E3322）的六种不同的SGRNA合成反应（NEB＃E3322）（NEB＃E3322），并在50μL的50μLNutece-Free Free Water中进行了体重。SGRNA产量是根据由Trinean Dropsense™16进行测量的结果A260计算的。君主RNA清理套件产生的SGRNA产生与其他市售RNA清理套件一致的。清理后，通过LC-MS测量残留核苷酸（NTP），并报告为面积为NTPS百分比（RATP+RCTP+RGTP+RUTP）/SGRNA百分比。NEB Monarch RNA清理套件始终优于其他市售的RNA清洁套件，从而从SGRNA合成反应中去除残留的NTP。