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增强型 CRISPR-Cas9 矫正杜氏肌营养不良症......
杜氏肌营养不良症 (DMD) 是一种由肌营养不良蛋白基因 ( DMD ) 突变引起的致命神经肌肉疾病。之前，我们应用 CRISPR-Cas9 介导的“单切”基因组编辑来纠正 DMD 动物模型中的多种基因突变。然而，有效的体内基因组编辑需要高剂量的腺相关病毒 (AAV)，这给临床应用带来了挑战。在本研究中，我们将 Cas9 核酸酶包装在单链 AAV (ssAAV) 中，将 CRISPR 单向导 RNA 包装在自互补 AAV (scAAV) 中，并将这种双 AAV 系统递送到 DMD 小鼠模型中。有效基因组编辑所需的 scAAV 剂量至少比 ssAAV 低 20 倍。接受全身治疗的小鼠显示肌营养不良蛋白表达恢复，肌肉收缩力改善。这些发现表明，使用 scAAV 系统可以显著提高 CRISPR-Cas9 介导的基因组编辑的效率。这代表着基因组编辑在 DMD 治疗转化方面取得了重要进展。
技术概述：使用SMRTBELL PREP套件3.0
Compatible with single - stranded AAV (ssAAV ) and self - complementary AAV (scAAV ) • AAV DNA sample extraction is performed using third - party methods• Multiplexing is performed using SMRTbell barcoded adapter plate 3.0 (102 - 009- 200)• A total of 1 μg of pooled AAV DNA is required for SMRTbell library preparation.每个单个AAV样本的输入DNA需求取决于多重水平，并且范围从
补充材料
图 S2。反式配对切口方法导致人类 HSPC 中的 HDR 效率低下。(A) 使用 CRISPR/Cas9、单切口或反式配对切口方法在 HEK293T 细胞中将 T2A-mCherry 插入人类 B2M 基因座的靶向策略。使用没有 (pDonor) 或有 2 个靶序列 (TS) (pDonor-Nick 2) 的供体质粒。靶向 B2M 的常见 sgRNA 以红色表示。使用所示方法靶向 B2M 基因座六天后，对 mCherry + HEK293T 细胞的百分比进行 FACS 分析。图表总结了通过 FACS 测量的 mCherry + (HDR) HEK293T 细胞的频率。(B) 使用 CRISPR/Cas9、单切口或反式配对切口方法在人类 HSPC 中将 T2A- mCherry 插入人类 B2M 基因座。使用单链 (ss) AAV 和不含 (scAAV) 或含 2 个 TS 的自互补 (sc) AAV (scAAV-Nick 2 ) 作为供体模板。FACS 分析显示靶向三天后 mCherry + HSPC 的频率。条形图显示 HDR (mCherry + ) 效率。数据显示为四次独立实验的平均值 ± SD。
静脉注射BBB-PENETRANT，MAPT- ...
阿尔茨海默氏病（AD）是一种致命的神经退行性疾病，在美国和全球范围内影响600万患者。预计到2050年，患者人数将增加一倍，以及万亿美元的经济负担。因此，迫切需要开发一种安全有效的药物来治疗AD。人脑中Tau病理学的进展和传播与AD的认知下降息息相关。AD的潜在治疗方法是降低中枢神经系统（CNS）中的Tau蛋白水平。抗义寡核苷酸（ASO）已显示可降低tau表达和tau病理。但是，这种方法需要通过室内或鞘内给药重复对ASO进行施用。在这里，我们证明了单一的静脉内（IV）给药血脑屏障（BBB） - 二烯酸酯 - 自我平均腺相关病毒（SCAAV）基因治疗可降低表达人tau的tauopathy小鼠模型的CN中Tau的表达。
AAV 介导的青光眼和葡萄膜炎基因疗法
缩写：AAV：腺相关病毒；ABCA1：ATP 结合盒转运蛋白 A1；ACE2：血管紧张素转换酶 2；ANXA1：膜联蛋白 A1；Bcl-2：B 细胞白血病/淋巴瘤 2；Bcl-xL：超大 B 细胞淋巴瘤；BDNF：脑源性神经营养因子；Brn3b：脑特异性同源框/POU 结构域蛋白 3b；C3：C3 胞外酶转移酶；CNV：脉络膜新生血管；CS：皮质类固醇；EAU：实验性自身免疫性葡萄膜炎；ECM：细胞外基质；EIU：内毒素诱导的葡萄膜炎；HLA：人类白细胞抗原；hSyn：人类突触蛋白 1 启动子；IL-1 β：白细胞介素 1 β；IOP：眼压； IRBP：光感受器间类视黄酸结合蛋白；MAC：膜攻击复合物；MAX：MYC 相关蛋白 X；MCP-1：单核细胞趋化蛋白-1；MMP：基质金属蛋白酶；Nabs：中和抗体；NF- κ B：核因子 κ B；NHP：非人类灵长类动物；NIU：非传染性葡萄膜炎；Nrf2：核因子红细胞2相关因子2；Pgk：磷酸甘油激酶；RGC：视网膜神经节细胞；RPE：视网膜色素上皮；scAAV：自互补 AAV；sCD59：可溶性 CD59；SOD2：超氧化物歧化酶 2；Tg-MYOC Y437H：具有肌动蛋白 Y437H 突变的转基因小鼠；TLR：Toll 样受体；TM：小梁网； TrkB：原肌球蛋白相关受体激酶-B；VEGF：血管内皮生长因子