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通过病毒样颗粒（''nanoblades''）在永生和原代细胞中递送Cas9/sgrna核糖核蛋白复合物
Philippe E Mangeot，Laura Guiguettaz，Thibault J M Sohier，Emiliano P Ricci。通过病毒样颗粒（“纳米薄片”）在永生和原代细胞中递送Cas9/sgrna核糖核蛋白复合物。可视化实验杂志：Jove，2021，169，10.3791/62245。hal-04892096
小分子调控的 sgRNA 能够通过 Cas9 控制大肠杆菌中的基因组编辑
CRISPR-Cas9 已为广泛应用的基因编辑带来了巨大进步。为了进一步发挥 Cas9 的效用，人们一直在努力实现对其核酸酶活性的时间控制。虽然不同的方法都侧重于调节哺乳动物细胞中的 CRISPR 干扰或编辑，但所有报道的方法都无法控制细菌中的核酸酶活性。在这里，我们开发了 RNA 接头，将茶碱和 3-甲基黄嘌呤 (3MX) 结合适体与 sgRNA 结合起来，从而实现大肠杆菌中的小分子依赖性编辑。这些可激活的向导 RNA 能够实现对体内基因编辑的时间和转录后控制。此外，它们还减少了因基因组切割而导致的宿主细胞死亡，这是 CRISPR 介导的细菌重组的主要限制。
GMP sgRNA 合成服务
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在CRISPR/CAS9应用的单个分析中，SGRNA和Cas9 mRNA的高分辨率表征
RNA疫苗和CRISPR（簇簇的定期间隔短的短粒子重复重复序列）制造商通常会挑战制造商，以准确表征和量化不同尺寸的RNA分子，杂质和降解的RNA物种，以及疫苗或个性化药物产品中的降解RNA物种。1,2为了帮助克服这些挑战，在本技术说明中，我们提出了一种基于分析套件的解决方案，用于表征最终产品中的RNA完整性和RNA片段化。使用多毛细管电泳平台，我们展示了有效且延时的工作流程，以评估潜在的mRNA疫苗和CRISPR试剂的各种关键质量属性（CQA）（图1）。对于CRISPR/CAS9基因编辑系统的主要产物的纯度含量获得了出色的可重复性，CV <2％。这些结果证明了RNA 9000纯度和完整性套件在50至9,000个碱基范围内将单链RNA产物分离的能力。
非洲绿猴（African Green Monkey）全基因组CRISPR sgRNA ...
目的基因 sgRNA 数目： 64853 ；阴性对照 sgRNA 数目： 2000 ； sgRNA 大小： 20bp
cGMP sgRNA：用于基因和细胞治疗中优化基因编辑的样品杂质鉴定和评估的战略方法
为了进一步确定最终产品中各杂质的最大可容忍残留水平，且不增加脱靶编辑，我们分别以差异比例将脱靶风险最高的杂质A02U和U17A添加到FLP中。我们利用这些样本在原代T细胞中进行CRISPR基因编辑，并用Sanger测序评估每个样本在OT1位点（这两个杂质样本中脱靶率最高的位点）的编辑效率（图1）。结果显示，杂质A02U的残留水平为50%，杂质U17A的残留水平为10%会导致脱靶编辑显著增加。当杂质水平低于4%时，本例中观察到的脱靶效应最小。
GenScript eSpCas9 mRNA(m1Ψ)-TRAC sgRNA-ALC0315 LNP
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具有或不带骨的免疫检查点抑制剂 -
在近年来，已将定期间隔间隔的短篇小学重复（CRISPR）/ CRISPR相关蛋白9（CAS9）技术聚集为快速发展的工具，以提供改变目标序列表达和功能的可能性。CRISPR/CAS9工具目前正在用于治疗无数的人类疾病，从遗传疾病和感染到癌症。初步报告表明，CRISPR技术可能会对Duchenne肌肉营养不良（DMD），囊性纤维病（CF），β-thal核病，亨廷顿的疾病（HD）等产生重大影响。尽管如此，高目标效应的高率可能会阻碍其在诊所中的应用。因此，最近的研究集中在新的策略上的发现，以改善这些脱靶效应，从而导致人类，动物，原核生物以及植物的高限制和准确性。同时，有明确的证据表明，具有较高效率的特定SGRNA的设计至关重要。相应地，阐明有助于确定SGRNA效率的主参数是先决条件。在此，我们将提供有关CRISPR技术治疗人类疾病的治疗应用的概述。更重要的是，我们将讨论涉及CRISPR/CAS9技术中SGRNA效率的有效影响参数（例如SGRNA结构和特征），并具有对人类和动物研究的特殊浓度。