蛋白质的来源:带有克隆的T4 DNA连接酶基因的重组大肠杆菌菌株。单位定义:1个单位定义为将100 ng的DNA片段中的50%与粘性末端连接到50 µl 1x 1x DNA连接酶缓冲液后30分钟在23°C分子重量下孵育后所需的50%的DNA片段:55,292 DALTONS质量控制分析:使用2ffliutial serial dilitial doldutial doldiques soge。在1x DNA连接酶反应缓冲液中制作酶批次的稀释液,并添加到含有双束DNA片段和1X DNA连接酶反应缓冲液的20 µL反应中。在23°C下孵育30分钟,停止并在用溴化乙锭染色的1%琼脂糖凝胶上进行分析。蛋白浓度(OD 280)由OD 280吸光度确定。物理纯度,然后进行银色染色检测。通过比较浓缩样品中污染物带的聚集质量与稀释样品中蛋白蛋白蛋白带的质量来评估纯度。单链核酸酶在含有放射性标记的单链DNA底物的50 µL反应中确定,在37°C下孵育4小时4小时。双链外切核酸酶在50 µL反应中确定,该反应含有放射性标记的双链DNA底物和10 µL的酶溶液在37°C下孵育4小时。
大肠杆菌DNA污染单元已测试了N/A N/A 30 30 30 30规范> 99%5,555 U/mg功能功能性功能性NO转化率<10拷贝<10份蛋白质:从表达重组T4 DNA聚合酶基因的大肠杆菌菌株中纯化。单位定义:1个单位定义为将在37°C下30分钟内将10 nmol的DNTP纳入酸性材料的酶量(1)。分子量:103,609 Daltons质量控制分析:使用2倍连续稀释方法测量单位活动。在1倍反应缓冲液中制成酶的稀释液,并将其添加到含有小腿胸腺DNA,1x蓝色缓冲液,3 H-DTTP和100 µM DNTP的50 µL反应中。在37°C下孵育10分钟,浸入冰上,并使用Sambrook和Russell的方法进行分析(Molecular Cloning,V3,2001,pp。A8.25-A8.26)。蛋白浓度(OD 280)由OD 280吸光度确定。
健康志愿者中药物的临床试验剂量发现和安全水平 - 没有安慰剂对照阶段2对患者或设备进行药物或治疗干预的临床试验测试评估疗效和副作用 - 确定治疗剂量3阶段的临床试验测试,对药物,治疗疗法或设备对患者的疗效和设备评估疗效,通常是临床试验的临床试验 - 通常(药物宣传)和药物获得允许出售后的持续技术支持。健康志愿者中药物的临床试验剂量发现和安全水平 - 没有安慰剂对照阶段2对患者或设备进行药物或治疗干预的临床试验测试评估疗效和副作用 - 确定治疗剂量3阶段的临床试验测试,对药物,治疗疗法或设备对患者的疗效和设备评估疗效,通常是临床试验的临床试验 - 通常(药物宣传)和药物获得允许出售后的持续技术支持。
蛋白质的来源:从大肠杆菌的菌株中纯化,该菌株过表达了噬菌体T4的基因32蛋白。分子量:33,506 Daltons质量控制分析:使用带有单链,荧光标记的寡核苷酸标记的凝胶移位测定法测量了单链DNA的DNA结合。Serial dilutions of the enzyme were made in 1X T4 GP32 reaction buffer(50mM Potassium Acetate, 20mM Tris Acetate, 10mM Magnesium Acetate, 1mM DTT pH 7.9) and added to 10 µL reactions containing a 5'-FAM labeled oligonucleotide substrate, and 1X T4 GP32 Reaction Buffer.在37°C下孵育20分钟,将其浸入冰上,并在15%的TBE-TEREA凝胶上耗尽。DNA结合能力被视为在TBE-rea凝胶上寡核苷酸的表观分子量中的带移。蛋白浓度(OD 280)由OD 280吸光度确定。物理纯度,然后进行银色染色检测。通过比较浓缩样品中污染物带的聚集质量与稀释样品中蛋白蛋白蛋白带的质量来评估纯度。
拥挤的药物可在提高速度和效率的可选努力中使用了粘性拥挤剂,例如聚乙烯甘油(PEG),以增加底物的局部浓度并推动反应前进。但是,这种拥挤的代理可能会增加变异性或对于自动分配系统而言很难使用。此外,在克隆反应中使用拥挤剂需要在转换之前进行纯化步骤,这增加了动手的时间和处理。我们研究了在0%,2.5%和5%PEG 8000的情况下,各个连接酶对CFDNA底物的疗效。我们引用了电文件图的痕迹以识别3个连续的峰:底物,底物 + 1个适配器和底物 + 2个双侧适配器。如图5所示,扭曲工程的T4 DNA连接酶可以将大部分底物转换为所需的双连接峰独立于拥挤剂输入。
蛋白质的来源:从大肠杆菌的菌株中纯化,该菌株过表达了噬菌体T4的基因32蛋白。分子量:33,506 Daltons质量控制分析:使用带有单链,荧光标记的寡核苷酸标记的凝胶移位测定法测量了单链DNA的DNA结合。Serial dilutions of the enzyme were made in 1X T4 GP32 reaction buffer(50mM Potassium Acetate, 20mM Tris Acetate, 10mM Magnesium Acetate, 1mM DTT pH 7.9) and added to 10 µL reactions containing a 5'-FAM labeled oligonucleotide substrate, and 1X T4 GP32 Reaction Buffer.在37°C下孵育20分钟,将其浸入冰上,并在15%的TBE-TEREA凝胶上耗尽。DNA结合能力被视为在TBE-rea凝胶上寡核苷酸的表观分子量中的带移。蛋白浓度(OD 280)由OD 280吸光度确定。物理纯度,然后进行银色染色检测。通过比较浓缩样品中污染物带的聚集质量与稀释样品中蛋白蛋白蛋白带的质量来评估纯度。
单位浓度酶的一个单位催化[32ppi]的1 nmol在37°C的20分钟内将1 nmol的[32ppi]转化为Norit-desorbable形式(Weiss单位)。
冻干有几个优点,包括室温运输和存储,延长的保质期以及样品体积的灵活性提高。为了与冻干兼容,酶的制剂必须不含甘油,并包括专门的冻干 - 脱落,可在混合物暴露于各种冻干条件下,包括冷冻,温度升高,真空和脱水。理想的冻干配方应以冷冻干燥的格式稳定酶,并允许非常快速的酶制剂补液和重新激活,而不会影响其在补液后的性能。
匹配将凝胶放在舞台上的位置。选择“开始扫描”。完成扫描后,打开多列软件并打开图像。选择文件 - 导出并将图像保存为“灰色的原始图像”和“ color.tiff”的“原始图像”。关闭两个程序(选择返回,然后关闭FLA-7001程序)。除去凝胶,并用水和乙醇擦拭植物,仅用kimcare湿巾擦拭。将舞台返回其封面和注销计算机。4)存储缓冲液含有高浓度的甘油,因此添加了总存储缓冲
参与者纳入标准1。在组织学和/或细胞学上确认的SCCHN 2。 div>18岁或以上3。局部晚期和/或复发性头颈癌,有或没有转移性疾病(不包括脑转移),没有标准疗法保留或合适4。 div> div>关于先前的治疗,至少一个月前,患者可能已经接受了先前的全身治疗,包括铂化学疗法。在发生转移性疾病的情况下,允许最近的短期姑息放疗对非目标部位5.那些拒绝姑息治疗的人可能有资格参加。但是,必须彻底探索他们不选择姑息治疗的原因6。至少可以通过RECIST V1.1 CT或MRI扫描标准在入学后四周内测量一个现场区域靶病变,并且可容纳肿瘤内注射7。东部合作肿瘤学表现状态为0-2 8。通过心电图和超声心动图(Echo)或多门控育(MUGA)扫描评估的正常心脏功能。左心室射血分数必须> 50%。评估必须在入学人数的四个星期内进行9。血液学结果在入学后的7天内结果:中性粒细胞> 1.5 x 109/l,血小板> 100 x 109/l,血红蛋白> 9g/dl,inr <1.5 10。生物化学在入学后的7天内结果:10.1。血清肌酐<1.5正常10.2的上限。胆红素<1.25倍正常10.3。女性患者必须是绝经后(闭经12个月),手术无菌或alt/ ast <2.5倍正常的上限(如果存在的肝转移,正常的上限<5倍)11。 div>
