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纳米孔测序作为一个可扩展的，具有成本效益的平台，用于分析临床T细胞疗法后多克隆矢量整合位点
基因修饰细胞中载体整合位点的抽象背景分析可以提供有关克隆性和对附近基因的潜在生物学影响的关键信息。当前的短阅读下一代测序方法需要专门的仪器和大批量运行。方法，我们使用纳米孔测序分析了由γ逆转录病毒载体转导的T细胞的矢量积分位点，SFG.ICASP9.2A。δCD19。DNA限制酶，用两个6个切割者NCOI和BSPHI消化；以及通过逆PCR或盒式连接PCR扩增的侧翼基因组DNA。嵌套PCR和条形码后，在牛津纳米孔平台上测序了扩增子。读取被过滤以质量，修剪和对齐。自定义工具的开发用于群集读取并合并重叠簇。结果逆PCR和盒式连接PCR都可以成功扩增侧翼基因组DNA，盒式连接PCR显示出较小的偏差。480万原始读数分为12,186个集群和6410个克隆。3'长末端重复（LTR） - 基因组连接可以在5-核苷酸跨度内解决大多数簇，并且在一个核苷酸跨度内，用于≥5个读取的簇。插入位点的染色体分布及其对接近转录起始位点的区域的偏爱与先前的γ逆转录病毒载体整合体的报告一致，该报告通过短阅读的下一代测序分析。结论我们的研究表明，使用纳米孔测序来绘制多克隆矢量积分位点是可行的。该测定是可扩展的，需要最低资本，这共同实现了具有成本效益和及时的分析。需要进一步的细化来减少扩增偏置并改善单核苷酸分辨率。
第一个人类剂量升级试验，以评估抗魔法TCR-转基因T细胞疗法的临床安全性和功效，以复发和难治性实体瘤
该试验的摘要基本原理尽管在癌症免疫疗法中使用工程的T细胞已大大推进了血液学恶性肿瘤的治疗，但在治疗实体瘤的治疗方面达到有意义的临床反应仍然具有挑战性。我们研究了人类白细胞抗原A*02：01阳性黑色素瘤相关抗原A1（MAGEA1）的阳性阳性患者 - 阳性的阳性患者 - 阳性阳性抗原A1（MAGEA1） - 阳性晚期实体瘤，在人类白细胞抗原A*02：01阳性患者中，我们研究了IMA202的安全性和耐受性。试验设计2+2试验设计是一种基于最大可接受的剂量限制性毒性（DLT）25％的算法设计，样本量由算法设计驱动，最多16名患者。ima202由表达T细胞受体（TCR）的自体遗传改性的细胞毒性CD8 + T细胞组成，该细胞特异于MAGEA1衍生的九种氨基酸肽。合格的患者进行了白细胞术，分离了T细胞，用慢病毒载体携带MageA1特异性TCR和淋巴结凝集（Fludarabine/Cyclophophamide）转导的T细胞，并注入中位数为1.4×10 9的特定T细胞（范围为0.086×10 9-2.57×9-2.57-2.2.57-2.2.57×9-2.57×9-2.57-2.2.57;IMA202的安全性未观察到DLT。 最常见的3-4级不良事件是细胞质减少症，即中性粒细胞减少症（81.3％），淋巴细胞减少症（75.0％），贫血（50.0％），血小板减少症（50.0.0％）和白细胞减少症（25.0％）。 13例患者经历了细胞因子释放综合征，包括一个3级事件。 在两名患者中观察到了与免疫效应细胞相关的神经毒性综合征，两者均为1级。IMA202的安全性未观察到DLT。最常见的3-4级不良事件是细胞质减少症，即中性粒细胞减少症（81.3％），淋巴细胞减少症（75.0％），贫血（50.0％），血小板减少症（50.0.0％）和白细胞减少症（25.0％）。13例患者经历了细胞因子释放综合征，包括一个3级事件。在两名患者中观察到了与免疫效应细胞相关的神经毒性综合征，两者均为1级。IMA202在16例患者中的疗效，11名（68.8％）患者的疾病稳定（SD）是其最佳总体反应（实体瘤的反应评估标准V.1.1）。五名患者在靶病变中最初的肿瘤收缩，一名患有SD的患者持续
细胞和基因治疗产品的效力测试
效力是定义生物学活性的生物药物产品的关键质量属性之一。效力测试预计将反映药物产物的作用机理（MOA），理想情况下，结果应与临床反应相关。可以使用多种测定格式，包括体外测定和体内模型，但是，为了及时释放临床研究或商业用途的产品，需要定量，经过验证的体外测定。强大的效力测定也是可比性研究，过程验证和稳定性测试的基础。细胞和基因治疗产物（CGT，也称为晚期治疗药物，ATMP）是生物药物的一部分，具有核酸，病毒载体，可行的细胞和组织作为起始材料。对于这种复杂的产品，效力测试通常具有挑战性，可能需要组合解决产品多种功能机制的方法。对于细胞，生存力和细胞表型是重要的属性，但仅仅是不足以解决效力。此外，如果细胞被病毒载体转导，效力可能与转基因的表达有关，但也将取决于靶细胞和细胞中转基因的转导效率/拷贝数。基因组编辑（GE）以及其他细胞操作会导致细胞的特征和活性发生多种变化，应通过效力测试来以某种方式捕获。非临床研究/模型可以为效力测试提供宝贵的支持，尤其是在可比性测试中。然而，有时缺乏合适的效力数据可能导致需要桥接临床疗效数据来解决效力测试的问题，例如，不同临床批次的可比性尚不清楚。在本文中，讨论了效力测试的挑战，以及用于不同CGT/ATMP的测定法的示例，以及针对欧盟和美国之间差异的可用指南。
癌症免疫疗法学会（SITC）的共识定义，用于免疫检查点抑制剂相关的免疫相关事件（IRAES）术语
抽象背景黑色素瘤是一种免疫敏感疾病，如免疫检查点阻滞（ICB）的活性所证明，但许多患者将不反应或复发。最近，肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）疗法已显示出ICB衰竭后黑色素瘤治疗的有希望的功效，表明细胞疗法的潜力。然而，由于转移了大量表型多样的T细胞，因此TIL处理伴随着制造局限性，产品异质性以及毒性问题。为了克服上述局限性，我们提出了一种受控的收养细胞治疗方法，其中T细胞由靶向SAR和黑色素瘤相关抗原的双特异性抗体（BIAB）选择性激活的合成激动受体（SAR）。方法是人类和鼠类SAR构建体的生成并转导到原代T细胞中。该方法在表达黑色素瘤相关抗原酪氨酸酶相关蛋白1（Tyrp1）和黑色素瘤相关软骨素硫酸盐蛋白聚糖（MCSP）（MCSP）（CSPG4）的鼠，人类和患者来源的癌症模型中得到了验证。sar t细胞。结果MCSP和Tyrp1表达在接受治疗和未经治疗的黑色素瘤的患者的样品中保守，支持其用作黑色素瘤靶标抗原。结论SAR T细胞 - 绝经方法提供了特定和条件T细胞激活在所有测试模型中，靶细胞和抗TYRP1×抗SAR或抗MCSP×抗SAR BIAB诱导的条件抗原依赖性激活，SAR T细胞的增殖和靶向肿瘤细胞裂解。在体内，抗肿瘤活性和长期生存是由SAR T细胞和BIAB在合成性肿瘤模型中的共同给药介导的，并在包括患者衍生的异种移植模型在内的几种异种移植模型中进一步验证。
造血干细胞同源基因编辑的进展与障碍
基因修饰或插入最初于 20 世纪 70 年代初提出作为治疗遗传性疾病的方法 [ 1 ]。造血干细胞 (HSC) 是基因治疗的首选目标，因为它们能够维持终生造血，从而能够持久缓解一系列疾病。目前，遗传性血液疾病的基因治疗方法主要包括从患有潜在遗传缺陷的个体中提取造血干细胞和祖细胞 (HSPC)，并在体外进行基因修饰后进行过继转移（图 1 a）。数十年来在临床上进行的同种异体 HSPC 移植为这种新方法的治疗转化提供了路线图。在自体移植基因修饰的 HSPC 时，可以避免同种异体反应性并发症并降低预处理方案的复杂性，与同种异体 HSPC 移植相比，它们具有显著优势。使用基于 γ 逆转录病毒载体的基因递送载体的临床试验最初于 20 世纪 90 年代获得批准，但仅检测到少量校正细胞，并且未观察到潜在缺陷的表型校正。重新关注优化体外转导条件和增加预处理方案以利于转导细胞的植入，导致在原发性免疫缺陷患者中首次获得明确的临床成功[2-4]。然而，随后报告称接受治疗的患者中载体介导的原癌基因插入激活导致恶性肿瘤[5-7]，这鼓励了主要基于 HIV-1 慢病毒亚家族逆转录病毒的替代载体设计的开发（图 1b）。慢病毒载体的独特成分促进其在非分裂的 HSPC 内的核易位，进一步增强这些细胞的转导。这些载体中 3′-LTR 启动子和增强子元件的消除也提供了一个关键的自失活 (SIN) 安全特性，以减轻对可能与内源性 HIV 颗粒重组或载体整合基因组位点附近原癌基因意外激活的担忧。然而，对于这些 SIN 载体，转基因表达的效率高度依赖于添加
PD-1下调通过保留细胞记忆表型并减少疲惫来提高CAR-T细胞抗肿瘤效率
抽象的背景尽管在管理复发或难治性多发性骨髓瘤（RRMM）患者方面靶向B细胞成熟抗原（BCMA）的嵌合抗原受体T细胞（CAR-T）的结果令人鼓舞，但Cart-T细胞的治疗副作用和功能障碍限制了这种有望的方法的效率和临床应用。在这项研究中，我们将靶向PD-1的短发夹RNA盒纳入了具有OX-40共刺激结构域的BCMA车。在暴露于单个或重复的抗原刺激下，评估了转导的PD-1 KD CAR-T细胞的表面CAR表达，T细胞增殖，细胞毒性，细胞因子产生和亚群。在RRMM患者的I期临床试验中最初观察到安全性和功效。与亲本BCMA CAR-T细胞相比，PD-1 KD BCMA CAR-T细胞疗法显示，T细胞疲劳减少，体外记忆T细胞的百分比增加。在PD-1 KD BCMA CAR-T组中，还观察到体内更好的抗肿瘤活性。在七名RRMM患者的CAR-T细胞疗法的I期临床试验中，最初在所有七名患者中观察到安全性和功效，其中包括至少1名患者（4/7，57.1％），其中1例至少有1名患者和四名患者（4/7，57.1％），具有高风险的细胞遗传学。总回应率为85.7％（6/7）。四名患者有严格的完全反应（SCR），一名患者患有CR，一名患者有部分反应，一名患者患有稳定的疾病。的安全性，其发生率是轻度至中度细胞因子释放综合征，并且没有神经毒性的发生。结论我们的研究表明了独立于抗原特异性的CAR-T细胞的设计概念，并提供了提高CAR-T细胞疗法功效的替代方法。
RE：支持Elpida Therapeutics对Crim应用的上诉CLN2-15607
审查委员会的科学成员指出的一个主要批评，似乎是驾驶得分，围绕怀疑主义，临床前数据由于中枢神经系统内传输的细胞数量有限，因此临床前数据对患者有所帮助。例如，针对解决基本原理的标准，响应包括：“小鼠，大鼠和NHP的矢量生物分布表明，10,000中的1个中的1000元中有100个单元中的1个中的1个可能会表达矫正的转基因。so，将未校正99％至99.99％的中枢神经系统神经元。”该结论是基于量化rnascope数据的图（原位杂交以可视化表达的转基因mRNA），其中定量指标为“％正面”，而不是根据Y轴标签正确解释这些数据为“％正区域”，而是错误地将数据解释为转导的细胞的百分比。在组织切片中RNA的原位染色（RNASCOPOPOPO）似乎是细胞内定位的点状焦点，并且不填充细胞体积，因此即使总细胞的很大一部分总细胞表达了转基因，“％阳性面积”的原始定量始终是一个较低的数量。此RNASCOPE数据旨在确认转基因的表达，并提供转导空间分布的一般定性可视化，不应用作转导的细胞数量的度量。从大鼠和NHP提供的生物分布数据显示约10％的接收矢量DNA的细胞是对靶向细胞数量的更准确和定量的度量。CIRM应用中的所有临床前数据都从我们的同行评审出版物中获取（Chen X等，JCI，2023）。我的总体意义是，对临床前数据的这种误解使审稿人对整个计划的看法蒙蔽了致命的缺陷，从而导致了低分和拒绝的决定。如果对临床前数据的正确理解对应用程序进行了审查，我相信可以给予该程序的强大优点，从而更加考虑，从而导致不同的审查结果。
人胎盘中合成肌细胞细胞谱系发育的关键调节剂
背景。胎盘是一种瞬态器官，在怀孕期间形成以支持胎儿发育并调节影响慢性疾病风险的环境线索的暴露。胎盘在许多方面支持胎儿发育，包括促进营养和氧气交换，去除有害废物产品，产生关键的激素（例如人类绒毛膜促性腺激素）以及提供免疫保护。这些功能在很大程度上是由被称为合胞素细胞和额外滋养细胞细胞的终末分化的滋养细胞执行的。尽管合成肌细胞细胞和跨性滋养细胞细胞的重要性，但仍不清楚它们如何专门支持最佳胎儿发育。目标。使用功能方法丧失来确定合成肌细胞细胞谱系发育的转录调节因子。方法。候选转录因子（TBX3，VGLL3和ATF3）使用慢病毒介导的短发蛋白RNA（SHTBX3，SHTBX3，SHVGLL3或SHATF3）使用胞质衍生的人滋养细胞干细胞中击倒。将非特异性shRNA（SHCONTROL）用作对照。转导后，使用紫霉素选择细胞，并分别通过RT-QPCR和Western印迹在转录本和蛋白质水平上确认敲低效率。通过功能和转录组评估评估了转录因子敲低对滋养细胞干细胞分化为合成型肉芽细胞的影响。结果。结论。未来的方向。与用SHControl转导的细胞相比，SHTBX3和SHVGLL3的转导在合成型细胞细胞分化后导致形态异常。 可以使用滋养细胞干细胞中的功能方法丧失来评估候选转录调节剂对合成细胞细胞谱系发育的关键贡献。 初步结果表明，TBX3和VGLL3对于建立合成型细胞细胞谱系至关重要。 然而，需要更深入的表征来识别TBX3和VGLL3调节合成细胞成分的发育的分子机制。 未来的研究将包括完成剩余的候选转录因子，ATF3，全基因组评估（例如ATAC-SEQ）的shRNA敲低，以及所有SHRNA转换的其他功能输出，例如人类绒毛膜促性腺激素的产生。在合成型细胞细胞分化后导致形态异常。可以使用滋养细胞干细胞中的功能方法丧失来评估候选转录调节剂对合成细胞细胞谱系发育的关键贡献。初步结果表明，TBX3和VGLL3对于建立合成型细胞细胞谱系至关重要。然而，需要更深入的表征来识别TBX3和VGLL3调节合成细胞成分的发育的分子机制。未来的研究将包括完成剩余的候选转录因子，ATF3，全基因组评估（例如ATAC-SEQ）的shRNA敲低，以及所有SHRNA转换的其他功能输出，例如人类绒毛膜促性腺激素的产生。
RSPO3介导的代谢肝分离化调节小鼠的全身葡萄糖代谢和体重 特定染色体的非整倍性对缺乏纺锤体检查点蛋白BUB3 的细胞有益 dolosigranulum pigrum：有希望的鼻益生菌候选 对气候变化适应的性别关系和东非家庭的气候变化的决策：定性系统评价 哺乳动物病毒的细胞受体 使用机器学习阐明精神疾病与累犯之间的关系：一项回顾性研究 用量子计算机优化mRNA密码子
肝脏的独特建筑由肝叶组成，将代谢的肝特征分为两个不同的区域，即围围和周围区域，其空间特征广泛定义为代谢齐射。r-spondin3（rspo3），一种促进Wnt信号通路的生物活性蛋白，调节尤其是在肝中心静脉周围的代谢特征。然而，由RSPO3/WNT信号通路调节的肝代谢分区的功能影响，对全身代谢稳态的理解仍然很差。在这项研究中，我们通过使用鼠模型分析了肝脏中RSPO3的局部功能以及肝RSPO3在人体其他器官上的远程作用。RSPO3表达分析表明，RSPO3表达模式在鼠肝脏中被空间控制，使其位于腹膜区域并在进食后收敛，这些过程的动力学在肥胖症中受到干扰。我们发现，病毒介导的肥胖肝组织中RSPO3的诱导可改善胰岛素抵抗，并通过恢复减弱的器官胰岛素敏感性，减少脂肪组织增大并逆转过度刺激的适应性热量烯二还是SIS来防止体重增加。肝迷走神经的修饰抑制了源自肝RSPO3诱导的这些远程作用，向脂肪组织和骨骼肌降低，这表明信号是通过由传入的迷走神经和富有效应的症状神经来传递的。此外，非神经元间的通信上调上调肌肉脂质利用是部分原因是肥胖症中脂肪肝发育和骨骼肌质量降低的改善。相反，通过CRE-LoXP介导的重组系统抑制肝RSPO3由于葡萄糖不耐症和胰岛素抵抗而加剧糖尿病，从而促进脂肪肝发育并降低骨骼肌质量，从而导致肥胖。总的来说，我们的研究结果表明，肝RSPO3的调节有助于通过新鉴定的器官间通信机制维持全身性葡萄糖代谢和身体组成。
Kymriah，INN-tisagenlecleucel - 欧洲药品管理局
此药品需要接受额外监测。这将可以快速识别新的安全信息。请医疗保健专业人员报告任何疑似不良反应。有关如何报告不良反应，请参见 4.8 节。 1. 药品名称 Kymriah 1.2 × 10 6 – 6 × 10 8 细胞分散液，用于输注 2. 定性和定量成分 2.1 一般描述 Kymriah (tisagenlecleucel) 是一种经过基因改造的基于自体细胞的产品，含有使用慢病毒载体体外转导的 T 细胞，该慢病毒载体表达抗 CD19 嵌合抗原受体 (CAR)，包含鼠抗 CD19 单链可变片段 (scFv)，通过人 CD8 铰链和跨膜区连接到人 4-1BB (CD137) 共刺激结构域和 CD3-zeta 信号结构域的细胞内信号链。 2.2 定性和定量组成 Kymriah 的每个患者专用输液袋均含有批次依赖性浓度的 tisagenlecleucel，这些自体 T 细胞经过基因改造，可表达抗 CD19 嵌合抗原受体（CAR 阳性活 T 细胞）。该药品包装在一个或多个输液袋中，总共含有 1.2 × 10 6 至 6 × 10 8 个 CAR 阳性活 T 细胞分散在冷冻保存液中。不同患者批次的细胞组成和最终细胞数量各不相同。除了 T 细胞外，还可能存在自然杀伤 (NK) 细胞。每个输液袋含有 10-30 mL 或 30-50 mL 细胞分散液。药品的定量信息（包括要使用的输液袋数量（见第 6 节））在用于治疗的药品随附的批次特定文件中提供。已知作用的辅料 本药品每毫升含 2.43 毫克钠，每剂量含 24.3 至 121.5 毫克钠。每袋每毫升含 11 毫克葡聚糖 40 和 82.5 毫克二甲基亚砜 (DMSO)。有关辅料的完整列表，请参阅第 6.1 节。 3. 药物形式 输液分散液 无色至微黄色分散液