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在DMDMDX大鼠模型中，对心脏和骨骼肌中微型障碍蛋白基因治疗的肌营养不良蛋白羧基末端结构域的评估
引言 - 肌肉指导的基因疗法迅速引起注意，主要是因为肌肉是易于访问的目标组织，并且也与各种严重的遗传疾病有关。几种血清型的重组腺相关病毒（RAAV）向量的局部和全身传递导致骨骼和心脏肌肉的有效转导非常有效，这在小动物以及人类中都实现了。肌肉是许多肌肉营养不良疾病的基因治疗中的靶组织，也可以被用作生物疗法，以产生全身性疾病的分泌因素。使用RAAV进行肌肉基因转移的当前局限性包括载体尺寸限制，诸如靶向毒性的潜在安全问题以及既有中和的中和抗体的免疫屏障组成，以及针对人类AAV Capsid的CD8 + T细胞反应。
通过阻断吞噬作用，在重复给药后增强AAV-微肌营养物基因疗法
结果：与接受单剂量的小鼠相比，在两种RAAV9-微肺炎剂量后，白细胞的病毒载量显着增加了77倍。重复的基因疗法在肌肉中导致肌肉中的病毒载量较低和微肺炎表达。用两种RAAV9-微生病剂量治疗的小鼠中有63％产生了肌营养不良蛋白的抗体，在用两种RAAV9-微生病剂量和组合疗法治疗的小鼠中，该抗体较少（25％）。同样，接受联合疗法的小鼠中AAV CAPSID特异性抗体水平也降低。与单独的RAAV9-微育蛋白相比，通过质谱，免疫荧光和蛋白质印迹评估的骨骼肌中的微肺炎表达在结合处理的小鼠中的水平明显高。
通过质谱法肌营养不良蛋白和微型脱节蛋白定量骨骼肌中的基因疗法发育duchenne肌肉营养不良
Duchenne肌肉营养不良（DMD）是由DMD基因突变引起的致命性，退化性肌肉疾病，导致严重降低或缺乏蛋白质肌营养不良蛋白。基因治疗策略旨在增加功能性肌营养不良蛋白（微型淋巴蛋白）的表达。准确量化肌营养不良蛋白/微型肺炎蛋白的能力对于评估基因转导水平至关重要。我们证明了一种新型肽免疫缺陷液相色谱 - 串联质谱法（IA-LC-MS/MS）测定法的验证和应用。数据表明，贝克尔肌肉营养不良和DMD组织中的肌营养不良蛋白表达相对于非疾病对照组织的平均值（n = 20）的平均值为4-84.5％（平均32％，n = 20）和0.4 - 24.1％（分别为5％，n = 20）。In a DMD rat model, biceps femoris tissue from dystrophin-de fi cient rats treated with AAV9.hCK.Hopti-Dys3978.spA, an adeno-associated virus vector containing a mini-dystrophin transgene, showed a dose-dependent increase in mini-dystrophin expression at 6 months post-dose, exceeding wildtype dystrophin高剂量的水平。验证数据表明，测定和测定内的精度≤20％（在量化的下限[LLOQ]下极限为≤25％），并且运行内和运行内相对误差在±20％以内（LLOQ时为±25％）。IA-LC-MS/MS准确地量化具有舒适灵敏度的人和临床前物种中的肌营养不良蛋白/微型肌营养素，可立即在临床前/临床试验中应用。
肌营养不良蛋白DP71剪接变体的表达在啮齿动物脑发育期间受到时间调节
摘要肌营养不良蛋白DP71是大脑中Duchenne肌肉营养不良（DMD）基因的主要产物，其在DMD患者和小鼠模型中的丧失会导致认知障碍。dp71表示为一系列蛋白质，该蛋白质是由外显子71至74和78的替代剪接产生的，该蛋白在主DP71D和DP71F组中分类为包含特定C端端的dp71d和DP71F组。但是，尚不清楚每个同工型在大脑发育的不同细胞类型，大脑区域和/或阶段中是否具有特定的作用。在本研究中，我们表征了胎儿（E10.5，E15.5）和产后（P1，P7，P14，P14，P21和P60）小鼠和大鼠脑发育期间DP71同工型的表达。我们通过RT-PCR和在全脑和不同大脑结构中的样品中的RT-PCR和克隆测定方法很好地量化了几个DP71转录本的表达。检测到以下DP71转录本：DP71D，DP71D ∆71，DP71D ∆74，DP71D ∆71,74，DP71D ∆71d ∆71-74，DP71F，DP71F，DP71F，DP71F，DP71F ∆71，DP71F ∆1F ∆1F ∆1FΔ74，dpp0071,71,71,71,71,71,007,71,00f ∆71,了Δ71-74。我们发现DP71F同工型是在E10.5（> 80％）中表达的主要转录物，而其表达则逐渐降低并被DP71D组的同工型从E15.5到产后和成年年龄所代替。第三代纳米孔测序证实了这一主要发现。此外，我们发现特定DP71同工型的表达水平随产后阶段和大脑结构的函数而变化。我们的结果表明，DP71同工型在胚胎和产后脑发育过程中具有不同的和互补的作用，很可能参与了不同细胞类型的各种成熟过程。
自愿性轮运行补充了微肌性基因疗法，以改善MDX小鼠的肌肉功能
我们检验了以下假设：自愿性轮毂运行将补充微型肌营养物基因治疗以改善幼体MDX小鼠的肌肉功能，这是Duchenne肌肉营养不良的模型。MDX小鼠在7周时注射了单剂量的AAV9-CK8-微畸形或媒介物为三组：MDXRGT（RUN，Gene Therapy），MDXGT（无运行，基因治疗，基因治疗）或MDX（无运行，无基因治疗）。野生型（WT）小鼠被分配给WTR（RUN）和WT（无运行）组。wtrand mdxrgtperformed自愿车轮运行21周；其余的组是笼子活跃的。在治疗的小鼠的心脏和肢体肌肉中，微肺炎的强大表达出现。mdxrgt与mdxgt小鼠的股四头肌中的微肌营养物增加增加，但在脱粒率中的水平降低。与所有组相比，MDX最终跑步机疲劳时间都降低，MDXGT的改善，MDXRGT中的最高。MDXRGT和WTR的每周跑步距离（km）和最终胎面疲劳时间都相似。明显地，MDXRGT diaphragm diaphragm power仅挽救了WT的60％，这表明跑步的负面影响。然而，MDXRGT隔膜中的纤维类型分布的计量变化可能表明适应了贸易能力的耐力。与基线相比，MDXGT和MDXRGT与所有其他组相对于基线值在体内最大底层扭矩相对于基线值较大。 在MDXGT动物中，红色四四稻的线粒体呼吸速率显着改善，但是在MDXRGT组中观察到了最大的生物能有益。 与微滞后蛋白在体内最大底层扭矩相对于基线值较大。在MDXGT动物中，红色四四稻的线粒体呼吸速率显着改善，但是在MDXRGT组中观察到了最大的生物能有益。与微滞后蛋白其他评估显示，相对于WT，MDXGT和MDXRGT肌肉的完全功能恢复部分。这些数据表明，在年轻的MDX小鼠中，自愿性车轮和微肌营养物基因治疗相结合，改善了全身性能，影响肌肉的功能差异，减轻了能量的定性，但也揭示了一些有害的运动作用。
评估道路灰尘上的重金属污染
已转介（2020-2023）致为Oujda穆罕默德VI大学医院的医学遗传学实验室，以涉嫌可疑性疾病，并使用PCR-多重技术对DMD基因的遗传研究证实。总共招募了15名患者。他们的诊断平均年龄为7.3岁，平均症状发作年龄为3.37岁。血缘关系估计为46.66％，其中13.33％的家族形式。所有患者均具有DMD表型；小牛肥大存在于86.66％的病例中，阳性符号符号，所有患者的CK水平升高。使用PCR多路复用技术对DMD基因进行分析表明，80％的缺失位于基因的中心区域，外显子50是最常被删除的。80％的患者有缺失破坏了阅读框，并且在这些情况下，摩纳哥规则解释了基因型/表型相关性。DMD基因的分子分析对于准确诊断，适当的遗传咨询和改善患者护理至关重要。PCR-Multiplex技术在公共卫生系统中仍然是一个很好的一线策略，其成本/收益率良好，可以通过分析最常见的删除外显子来检测大型删除。肌营养不良是在我们的实践中要求遗传分析的经常原因。多重PCR是一种简单，快速，无创和成本效益的工具，使我们能够在摩洛哥东部对这种病理的分子描述。
细胞介导的外显子跳过在新的小鼠肌肉营养不良的新小鼠模型中，肌营养不良蛋白的表达和肌肉功能
细胞治疗肌营养不良症的成功率有限，这主要是由于供体细胞的植入不良，尤其是在疾病晚期阶段的纤维性肌肉。我们开发了一种细胞介导的外显子跳过，该外显子跳过，利用了肌纤维的多核性质，以通过U7小型核RNA进行跳过肿瘤基因的51外显子的外显子，以实现居民的dysentent dys-营养性核的交叉校正。我们观察到，遗传校正的人DMD肌原性细胞（但不是WT细胞）的共同培养，其营养不良的对应物的比例为1:10或1:30，导致肌营养不良蛋白在一个水平上产生的水平比简单稀释预测的高几个水平。这是由于U7 SnRNA扩散到邻近营养不良的居民核。当移植到带有外显子51突变的NSG-MDX-δ51MITE中时，遗传校正的人肌生成细胞在治疗范围内会产生比WT细胞高得多的肌营养不良蛋白的水平，并且即使仅3-5％的急诊量也会导致势能恢复。这种肌营养不良蛋白的水平是迈向细胞疗法临床效率的重要一步。
Levicept 宣布新型神经营养因子 3 抑制剂 LEVI-04 用于治疗患者的 II 期试验取得积极结果
NIHR 利兹生物医学研究中心主任兼首席研究员 Philip Conaghan 医学博士表示：“这些结果确实非常出色，具有临床意义。安全有效的疼痛管理对于关节炎至关重要，现有的治疗方法受到副作用、成瘾性和疗效不佳的限制。在这次试验中，LEVI-04 已证明可以安全利用神经营养因子 3 抑制剂的镇痛特性，并为数百万急需治疗的患者提供重要的新治疗选择。如果 III 期试验能够复制这些结果，LEVI-04 将代表骨关节炎治疗的重大突破，并在其他疼痛适应症方面具有巨大潜力。”
BOB ICB 关于乳腺癌患者促性腺激素释放激素类似物 (GnRHa) 的指导原则
抑制女性绝经前和围绝经期乳腺癌患者的卵巢功能以及抑制男性乳腺癌患者的睾丸功能可以改善患者的预后。对于接受过根治性手术且复发风险较高的绝经前女性患者，增加 5 年的卵巢抑制治疗可降低雌激素受体 (ER) 阳性乳腺癌复发的风险。这必须与该患者群体的副作用风险增加相平衡。对于无法耐受或有他莫昔芬禁忌症的患者，性腺抑制允许使用芳香化酶抑制剂。芳香化酶抑制剂会刺激性腺功能，因此它们只能与性腺抑制疗法联合使用，用于女性绝经前或围绝经期患者。对于男性患者，如果未进行性腺抑制治疗，则接受芳香化酶抑制剂治疗的结果比我们预期的更差，因此美国临床肿瘤学会男性乳腺癌指南建议男性在接受芳香化酶抑制剂治疗的同时，增加性腺抑制治疗。使用芳香化酶抑制剂或氟维司群（通常与 CDK4/6 抑制剂如ribociclib 一起使用）抑制性腺功能是治疗 ER 阳性转移性乳腺癌的标准治疗方法。研究还表明，如果绝经前女性患者（ER 阳性或 ER 阴性乳腺癌）希望保留卵巢功能，则在化疗期间抑制卵巢功能也是有益的，这已被证明有助于骨骼健康和保留这类患者的生育能力。患有 ER 阴性疾病且复发风险较高的绝经前女性患者可以从暂时的卵巢抑制中受益，以方便使用辅助双膦酸盐，这可降低绝经后患者乳腺癌复发的风险。作用方式
微育蛋白基因治疗的潜在局限性对Duchenne肌肉营养不良
为表达截短肌营养不良蛋白分子（微滞后蛋白）的高剂量腺相关病毒（AAV）的临床试验正在进行Duchenne肌肉营养不良（DMD）。在严重的DMD小鼠模型中，使用与临床试验相当的AAV剂量相当的AAV剂量，我们使用4种微型肌营养蛋白构建体（在临床试验中进行了3个和最大临床结构的变体）检查了该策略的效率和功效。我们在横纹肌肉中获得了高水平的微肺炎表达，其心脏表达比骨骼肌高约10倍。显着，尽管不完整，但观察到骨骼肌疾病的纠正。令人惊讶的是，2种微肺蛋白发生了心脏病的致命加速。有害的心脏作用似乎是由心肌细胞膜上微置换蛋白和乌特罗蛋白之间的可变竞争（取决于微肺炎设计和表达水平）引起的。也可能对蛋白质降解的过载也有贡献。这些观察结果对于目前正在用AAV-微肌营养蛋白治疗的患者的意义尚不清楚，因为在DMD心脏中达到的表达水平尚不清楚。然而，这些发现表明，微隔膜治疗需要避免心脏中过高的表达水平过高，并且应在这些患者中仔细监测心脏功能。