乙型肝炎病毒(HBV)全基因组测序(WGS)目前受到限制,因为许多临床样品的DNA病毒载荷(VL)低于使用当前测序方法产生完整基因组所需的阈值。我们使用基于探针的捕获和瓷砖放大器PCR(Hep-tile)开发了两种泛基因型病毒富集方法,用于HBV WGS。我们使用模拟样品证明了这两种富集方法都是泛基因型(基因型A-J)。使用临床样品,我们证明了HEP-TILE放大成功地放大了最低的HBV VL测试(30 IU/ mL)的完整基因组,并且可以使用纳米孔和Illumina平台对PCR产物进行测序。基于探针的捕获,具有Illumina测序需要VL> 300,000 IU/mL,以生成全长HBV基因组。捕获 - 紫罗兰和Hep-tile-nanopore管道在具有已知DNA序列的模拟样品中具有100%的共识测序精度。一起,这些方案将促进HBV序列数据的产生,从而使HBV分子流行病学的更准确,更具有代表性的描述,对持久性和发病机理进行启示,并增强对感染及其治疗结果的理解。
GPS 是一个三维系统。总精度取决于所有组件的精度。因此,用户必须考虑高度以及已知的水平控制。正高是通过差分水准测量得出的,并参考 NAVD 88 等基准。椭球体高度与参考椭球体相关且垂直于参考椭球体,目前为 1984 年世界大地测量系统 (WGS)。大地水准面高度是正高和椭球体高度之间的差异。
梭状芽胞杆菌艰难梭菌(以前是艰难梭菌)是抗生素 - 腹泻腹泻的常见原因,它会导致严重的死亡率和发病率以及医疗保健系统的高成本[1,2]。在千年开始时,PCR核糖型(RT)027在医疗保健环境中的传播将焦点放在c上。艰难梭菌感染(CDI)作为医生疾病[3]。近年来,已经观察到与社区相关的CDI发生率的升高[4]。C的流行病学研究最常见的方法。艰难梭菌,例如PCR核分型和多焦点序列分型(MLST),仅提供适度的分辨率,不足以进行爆发研究[5]。使用核心基因组MLST(CGMLST)或单核苷酸多态性(SNP)分析来分析由整个基因组测序(WGS)产生的数据[6],并且揭示了医疗保健系统中仅考虑CDI病例的一小部分的传播。这表明无症状的运输或环境源在C的传播中起着重要作用。艰难梭菌[7]。梭状芽胞杆菌艰难梭菌也可以由猪和其他牲畜携带[8],并已成为新生小猪搜查的原因[9]。使用WGS [10,11]中描述了活股和人之间的潜在传播,尤其是RT078被认为具有人畜共患潜力[12]。2011年,这与瑞典南部的一次基于医院的暴发有关[15]。簇,该RT是2009 - 2013年瑞典人类中最常孤立的RT之一[15]。在同一时间,这是瑞典中部多种繁殖农场的小猪中唯一发现的RT [16]。尚未为RT046建立人畜共患关系,并且克隆多样性,农场内随时间变化,或者目前已知与人类分离株的关系。这项研究的目的是检测瑞典养猪场和人类CDI病例之间RT046的传播,并使用WGS研究猪群中的RT046多样性。使用两个CGMLST方案和一项SNP分析进行了多个分析策略。
J.通过食品安全基因组学计划(例如,欧洲食品安全局(EFSA)全基因组序列(WGS)群集)增强国际协调和数据共享,以识别国家之间共享非公共基因的Epistasis(Genepi)数据的技术解决方案;全球微生物标识符(GMI)联络人和FDA国际事务项目,包括亚太经济合作(APEC),德国联邦联邦风险评估研究所(BFR),英国(英国)食品标准局(FSA),哥斯达黎加RICA和巴西国家质量控制质量控制(INCQS)。
合成生物学是一个成长的领域,涉及重新设计生物,以实现有用的目的,以使其具有新的能力。世界各地的研究人员和公司正在利用自然的力量解决医学,制造和农业的问题。wgs是研究和应用结果领域的基础技术,使生物工程师能够使用许多方法,例如基因编辑或合成基因合成,以构建旨在执行高价值功能的微生物中复杂的代谢途径。应用的应用包括活着的药物,培养成分,增强的农业微生物组以及在生物安全计划中的使用。
甲型流感病毒突变率高且具有人畜共患潜力,对公共卫生构成重大挑战。全基因组测序 (WGS) 对于监测和鉴定这些病毒至关重要。通常使用牛津纳米孔技术 (ONT) 和 Illumina 新一代测序平台,其中 ONT 的优势在于其长读取能力、可移植性以及在测序过程中实时访问原始数据的独特能力,使其适合快速应对疫情。本研究通过改进 RT-PCR 试剂盒、引物和纯化方法,并评估高通量处理的自动化,优化了 ONT 连接测序甲型流感全基因组方案。与原始 ONT 方案相比,替代 RT-PCR 试剂盒与替代引物相结合,显著提高了读取深度覆盖率,并减少了短而非靶向的读取。这种改进在聚合酶片段的最小读取深度覆盖率方面尤为明显,而聚合酶片段通常面临实现均匀覆盖率的挑战,在 5' 和 3' 末端显示较高的覆盖率,而在中心区域显示较低的覆盖率。这种针对甲型流感 WGS 的优化方案不仅提高了测序质量和效率,而且适用于所有 NGS 平台,因此对于研究流感适应性和改进监测非常有价值。此外,该方案可以进一步完善和调整以用于其他病原体的测序,从而扩大其在各种病原体监测和应对工作中的实用性。
HiFi 制备试剂盒 96 和工作流程专为 NGS 液体处理自动化而设计。因此,该协议旨在描述 SRE、剪切、文库制备酶促反应和珠子清理,以指导自动化方法开发,或在某些情况下进行手动制备。由于自动化仪器之间存在差异,可能需要进行本文未描述的修改,以使协议适应您的特定仪器。请访问 WGS 页面或联系您当地的支持团队,获取具有 PacBio 合格方法的仪器列表。该协议是使用 Hamilton NGS STAR MOA 系统开发的。
肺癌仍然是癌症相关死亡的主要原因。手术是早期肺癌的最佳选择,辅助治疗的作用仍然有争议。液体活检提供了一种无创的方法来监测癌症负担。血液中循环无细胞肿瘤DNA(CTDNA)的靶向测序已显示出成功的诊断。但是,低肿瘤负担和低阶段疾病的动态演变对于目标面板具有挑战性。我们假设从匹配的肿瘤正常样品中衍生的整个基因组测序(WGS)特定的突变特征可以为监测肺腺癌患者的敏感且特异性的方法提供。
凭借 MiSeq i100 系列,Illumina 继续树立最高标准。系统设计、测序化学和数据分析方面的进步提供了最简单、最快的台式测序和经过验证的准确性。MiSeq i100 系列适用于所有级别的用户,并简化了 NGS 工作流程——从文库准备到数据分析。MiSeq i100 系列可在当天获得各种应用的结果,包括小型全基因组测序 (WGS)、靶向基因测序和基因表达分析,使实验室能够解决传染病、微生物学、肿瘤学等领域的复杂基因组学问题。
