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光学显微镜中的亚微米线宽计量
低至 366 nm 汞线），可以对低至约 0.3 Ilm 的线宽进行光学测量（对于 366 nm 的 f/1 光学元件，艾里斑直径为 0.45 Ilm）。但是，要达到如此窄的线宽，必须对图像中的衍射效应进行建模，并制定一个有意义的标准，确定图像轮廓上的哪个点对应于线的边缘。随着特征高度变得大于大约四分之一波长，并且纵横比（特征高度/宽度）接近并大于 1，这种建模变得越来越困难。这种困难部分是数学上的（例如，不能使用标量理论将特征视为平面，并且对于小线宽和大纵横比，相邻边缘的衍射效应会相互作用）。困难的部分原因还在于，随着特征高度的增加和边缘几何形状与理想垂直形状的偏离，衍射效应变得更加明显，并从边缘进一步传播。事实上，对于大纵横比和非垂直壁，“线宽”的定义本身就有多种解释。
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∗ 通讯作者。电话：0034 915 616 800 电子邮件地址：jvmarcos@gmail.com (J. Victor Marcos)、urielrnv@uxmcc2.iimas.unam.mx (Rodrigo Nava)、gabriel@optica.csic.es (Gabriel Crist´obal)、rafa@optica.csic.es (Rafael Redondo)、 boris@servidor.unam.mx (Boris Escalante-Ram´ırez)、Gloria.Bueno@uclm.es (Gloria Bueno)、Oscar.Deniz@uclm.es (´ Oscar D´eniz)、avgonzalez@externas.jccm.es (Amelia Gonz´alez-Porto)、cpardo@farm.ucm.es (Cristina Pardo)、 francois.chung@inspiralia.com（弗朗索瓦·钟）， tomas.rodriguez@inspiralia.com（汤姆·罗德里格斯）
显微镜中的机器学习 - 见解，机会和挑战
机器学习（ML）正在将图像处理和分析的领域从艰苦的任务自动化转变为对视觉模式的开放式探索。这对图像驱动的生命科学研究，尤其是显微镜具有显着意义。在这篇评论中，我们关注与从用户的角度应用基于ML的管道用于显微镜数据集相关的机会和挑战。我们研究了不同数据特征的重要性 - 数量，可传递性和内容 - 以及如何确定要使用的ML模型以及它们的输出。在细胞生物学问题和应用的背景下，我们进一步讨论了ML公用事业范围，即数据策展，探索，预测和解释，以及它们在显微镜的背景下所带来的并转化为什么。最后，我们探讨了显微镜中与ML相关的挑战，常见的人工制品和风险。基于其他领域的见解，我们建议如何在显微镜中减轻这些陷阱。
斑马鱼胚胎显微注射 - NET
此方案是使用已停产的 Cas9 蛋白版本 (Alt-R Sp Cas9 Nuclease 3NLS) 开发的。目前可用的产品 (Alt-R Cas9 Nuclease V3) 具有改进的 NLS，应以相同的体积和浓度直接替换到此方案中。IDT 建议使用 Alt-R™ Sp Cas9 Nuclease V3 与 Alt-R CRISPR-Cas9 crRNA 和 tracrRNA 结合使用，以生成核糖核蛋白编辑复合物，从而在大多数目标位点上实现高编辑效率。查看 Alt-R CRISPR-Cas9 用户指南，了解如何将核糖核蛋白转染哺乳动物细胞系（可在 www.idtdna.com/CRISPR 上找到）。
导电原子力显微镜中的MoiréFringes
moir e物理学在表征功能材料和物理特性的工程中起着重要作用，从应变驱动的运输现象到超导性。在这里，我们报告了在模型铁电ER（MN，TI）O 3上获得的导电原子力显微镜（CAFM）中Moir E条纹的观察。通过进行系统的研究，对关键实验参数对诸如扫描角度和像素密度等新兴的Moir e Fringes的影响，我们证明，观察到的条纹由于应用的栅格扫描和样本互动性的叠加而产生，并将测量的调节型对电导率进行分类，从而在扫描的Moir e vistanning scanning Moir e效应中分类。我们的发现对于CAFM对Moir E工程材料中当地运输现象的研究至关重要，这为将外在的和固有的Moir E效应区分开提供了一般指南。此外，这些实验提供了一种可能提高灵敏度的途径，通过通过更长期的MOIR E模式在空间分辨率限制下探测电导量的变化来推动局部运输测量的分辨率限制。
复杂结构中单细胞的激光捕获显微切割...
激光捕获显微切割 (LCM) 是一种用于从组织切片中选择和获取细胞簇的新方法。一旦捕获，DNA、RNA 或蛋白质就可以轻松地从分离的细胞中提取出来，并通过常规 PCR、逆转录 (RT)-PCR 或聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分析，包括蛋白质酶谱分析特定的大分子变化。在 LCM 中，附着在刚性支撑物上的热塑性聚合物涂层 [乙烯醋酸乙烯酯 (EVA)] 与组织切片接触。近红外激光脉冲精确激活微观选择的细胞簇上的 EVA 聚合物，然后将其结合到目标区域。从组织切片上移除 EVA 及其支撑物可获取选定的细胞聚集体以进行分子分析。这种使用平面转移 EVA 薄膜的初始 NIH LCM 方法最近已商业化，并已被证明是一种有效的常规显微切割技术，可用于许多实验室的后续大分子分析 -
nectin-4/CD137肿瘤靶向免疫细胞的显微注射
图2：Nectin-4/CD137 TICA BT7480导致肿瘤免疫微环境和表达MC38肿瘤模型的肿瘤免疫微环境和抗肿瘤活性。（a）HUCD137 C57BL/6小鼠的MC38-Nectin-4肿瘤生长，每周或每周两次给予BT7480剂量（n = 6/cohort;*p <0.5，*** <0.001，**** <0.001，**** p <0.0001 p <0.0001 p <0.0001 p <0.0001 p <0.0001 p <0.0001 p <0.0001与Turkey的混合效应分析，Turkey的测试后，第0-15天）。（b）肿瘤的纳米造影分析显示了BT7480从24H到144H的影响，以及144H时抗CD137激动剂抗体对细胞毒性细胞和巨噬细胞含量的影响。（c）BT7480在24小时时引起的转录变化。灰色圆圈代表所有测量的转录本，水上圆圈确定了属于“细胞因子和趋化因子信号传导”基因的转录本。请注意，Y轴表示已调整后的（Benjamini-Yekutieli）p值。
在FTIR显微镜中使用的热电冷却MCT（TEC-MCT）
图4。使用LN2-MCTA和15x15微米光圈从层压板，反射模式下的区域图。b1是背景点，蓝色十字毛指示所示的光谱起源（来自尼龙+聚丙烯层）。每个光谱是一个单个扫描，光谱分辨率设置为8 cm -1。图像是与尼龙光谱相关的曲线（红色高，蓝色低）。