检测DNA甲基化的常见方法使用硫酸盐或酶将未甲基化的C转换为在测序数据中读取为T。这导致核苷酸多样性低的文库很难对齐。亚硫酸盐治疗损害DNA的恶劣条件,在基因组数据中留下了很大的差距。Illumina 5基本化学直接以简单的单步直接将5MC转换为t,该步骤非启示DNA并保留了库复杂性。
ALDH7A1 缺乏症是一种常染色体隐性癫痫性脑病,通常在出生后几周至几个月内出现。这种疾病通常对一般抗惊厥药物治疗没有反应,但对吡哆醇(维生素 B 6 的一种形式)补充剂有反应。ALDH7A1 的致病变异编码赖氨酸分解代谢途径中的 α -氨基己二酸半醛 (α-AASA) 脱氢酶,导致 α-AASA 及其环状形式 Δ 1-哌啶-6-羧酸 (P6C) 积累,并与之保持平衡(图 1)。1 P6C 与吡哆醛 5 0 -磷酸 (PLP) 形成复合物,后者是唯一一种可作为酶辅因子的 B 6 维生素单体,通过 Knoevenagel 缩合导致其失活。1 这导致生物可利用的 PLP 耗尽,而 PLP 是其作为辅因子进行各种反应所必需的,其中许多反应涉及神经递质代谢,并导致癫痫表型。尽管吡哆醇治疗对癫痫发作有反应,但长期神经认知功能障碍在高达 75% 的患者中会出现一定程度的发育迟缓,通常与早期治疗无关。2 除了补充吡哆醇外,限制赖氨酸和补充精氨酸的饮食也有助于降低 α -AASA/P6C 的神经毒性水平,但已显示出一些希望。3 ALDH7A1 还可以通过亚硫酸盐氧化酶 (SUOX) 或钼辅因子缺乏 (MoCD) 中积累亚硫酸盐来抑制,从而引起继发性 ALDH7A1 缺乏症。4-6
全基因组测序和分析 - 基于 Illumina Rhabdoid (RT) Illumina 基因组板的文库构建(350-450bp 插入大小):将 96 孔格式的 2ug 基因组 DNA 通过 Covaris E210 超声处理 30 秒进行碎裂,使用 20% 的“占空比”和 5 的“强度”。双端测序文库是按照 BC 癌症机构基因组科学中心 96 孔基因组 ~350bp-450bp 插入 Illumina 文库构建协议在 Biomek FX 机器人(Beckman-Coulter,美国)上准备的。简单来说,DNA在96孔微量滴定板中用Ampure XP SPRI 珠子纯化(每60uL DNA 40-45uL 珠子),在单一反应中分别用T4 DNA聚合酶、Klenow DNA聚合酶和T4多核苷酸激酶进行末端修复和磷酸化,然后用Ampure XP SPRI 珠子进行清理,并用Klenow片段(3'到5'外显子减去)进行3' A加尾。用Ampure XP SPRI 珠子清理后,进行picogreen定量以确定下一步接头连接反应中使用的Illumina PE接头的数量。使用 Ampure XP SPRI 珠子纯化接头连接产物,然后使用 Illumina 的 PE 索引引物组,用 Phusion DNA 聚合酶(美国赛默飞世尔科技公司)进行 PCR 扩增,循环条件为:98˚C 30 秒,然后 6 个循环,98˚C 15 秒,62˚C 30 秒,72˚C 30 秒,最后在 72˚C 延伸 5 分钟。使用 Ampure XP SPRI 珠子纯化 PCR 产物,并使用高灵敏度分析(美国珀金埃尔默公司)用 Caliper LabChip GX 检查 DNA 样本。所需大小范围的 PCR 产物经过凝胶纯化(在内部定制机器人中使用 8% PAGE 或 1.5% Metaphor 琼脂糖),并使用 Agilent DNA 1000 系列 II 检测和 Quant-iT dsDNA HS 检测试剂盒使用 Qubit 荧光计(Invitrogen)评估和量化 DNA 质量,然后稀释至 8nM。在使用 v3 化学法在 Illumina HiSeq 2000/2500 平台上生成 100bp 配对末端读数之前,通过 Quant-iT dsDNA HS 检测确认最终浓度。全基因组亚硫酸盐-Seq 文库构建和测序:使用 1-5 mg Qubit(Life Technologies,加利福尼亚州卡尔斯巴德)定量基因组 DNA 进行文库构建,如所述(Gascard 等人,2015 年)。为了追踪亚硫酸盐转化的效率,将 1 ng 未甲基化的 lambda DNA (Promega) 掺入使用 Qubit 荧光法定量的 1 µg 基因组 DNA 中,并排列在 96 孔微量滴定板中。使用 Covaris 超声处理将 DNA 剪切至 300 bp 的目标大小,并使用 DNA 连接酶和 dNTP 在 30o C 下对片段进行末端修复 30 分钟。使用 2:1 AMPure XP 珠子与样品比例纯化修复后的 DNA,并在 40 µL 洗脱缓冲液中洗脱以准备 A 尾;这涉及使用 Klenow 片段和 dATP 将腺苷添加到 DNA 片段的 3' 端,然后在 37o C 下孵育 30 分钟。用磁珠清理反应后,将胞嘧啶甲基化双端接头(5'-AmCAmCTmCTTTmCmCmCTAmCAmCGAmCGmCTmCTTmCmCGATmCT-3' 和 3'-GAGmCmCGTAAGGAmCGAmCTTGGmCGAGAAGGmCTAG-5')在 30oC 下连接到 DNA 20 分钟,并纯化接头两侧的 DNA 片段珠。在亚硫酸盐转化之前,用 10 个 PCR 循环扩增一份文库片段,并在 Agilent Bioanalyzer 高灵敏度 DNA 芯片上进行大小测定。扩增子的长度在 200-700 bp 之间。使用 EZ Methylation-Gold 试剂盒(Zymo Research)按照制造商的方案实现甲基化接头连接的 DNA 片段的亚硫酸盐转化。五次循环
通过短肽桥与Murnac残基交叉连接的N-乙酰葡萄糖和N-乙酰基氨基酸(MURNAC)的多个单位网络。真菌CWS(FCW)由几层原纤维组成。组成因物种而异,但是它们主要组成(1→3)/(1→6) - 𝛽 -glucan,(1→3) - 𝛼 -glucan,几丁质和糖蛋白。它由80-90%的糖蛋白,脂质和其他次要成分组成。酵母CWS由(1→3)/(1→6)-Glucan,甘露蛋白和几丁质组成。红色藻类含有带有亚硫酸盐残基的星系杂聚物以及甲基化的糖,甘露糖,阿拉伯糖和核糖等次要成分。但是,基本的构建块是醛酸3- o-(α-d-
图 3 为在含有 HEDP 的亚硫酸盐金溶液中, 恒电流密度为 5 mA ∙ cm -2 , 沉积时间为 1 min、5 min、10 min 和 20 min 时镀层的形貌与外观(HAuCl 4 ∙ 4H 2 O 0.01 mol ∙ L -1 , Na 2 SO 3 0.24 mol ∙ L -1 , HEDP 0.05 mol ∙ L -1 , 添加剂 0.1 mL ∙ L -1 )。沉积时间 1 min 和 5 min 时镀层颗粒细小致密(图 3a、图 3b), 外观光亮(图 3f 上部)。沉积 10 min 时, 颗粒呈现金字塔形貌(图 3c)。当沉积时间延长至15和20分钟时,涂层形貌没有发生明显变化(图3d,图3e),涂层外观仍然保持暗亮状态(图3f下部)。当沉积20分钟时,涂层呈暗亮金色
DNA 胞嘧啶甲基化是一种表观遗传机制,参与调节植物对生物和非生物胁迫的反应,其改变能力随胞嘧啶出现的序列环境(CpG、CHG、CHH,其中 H = 腺嘌呤、胸腺嘧啶、胞嘧啶)而变化。模型植物物种中的 DNA 甲基化定量通常通过全基因组亚硫酸盐测序(WGBS)进行,这需要高质量的参考基因组。精简代表性亚硫酸盐测序 (RRBS) 是一种经济有效的潜在替代方案,适用于基因组资源有限且实验设计规模大的生态研究。在本研究中,我们首次全面比较了 RRBS 和 WGBS 的输出,以表征 DNA 甲基化对给定环境因素的反应变化。具体而言,我们使用 epiGBS(最近优化的 RRBS)和 WGBS 来评估 Populus nigra cv. 无性系中昆虫和人工食草后的整体和序列特异性差异甲基化。 'italica'。我们发现,在两种食草处理中的任何一种之后,CHH 中的全局甲基化百分比都会增加,并且只有 epiGBS 检测到这种转变具有统计学意义。至于食草引起的位点特异性差异甲基化(epiGBS 中的胞嘧啶和 WGBS 中的区域),两种技术都表明昆虫和人工食草引起的反应具有特异性,并且 CpG 中的低甲基化和 CHH 中的高甲基化频率更高。当存在于 CpG 和 CHG 中时,甲基化变化主要发现在基因体和基因间区域,而在 CHH 环境中则发现在转座因子和基因间区域。因此,epiGBS 成功地表征了伦巴第杨对食草反应的全局全基因组甲基化变化。我们的研究结果支持 epiGBS 在旨在探索非模型植物物种对多种环境因素反应的表观遗传变化的大型实验设计中特别有用。
胞嘧啶甲基化是原核和真核生物的天然基础修饰,包括通过甲基转移酶酶将甲基添加到胞质嘧啶环的第五碳位置中(1)。在原核生物中,DNA甲基化提供了一种方法,可以通过限制性核酸内切酶保护宿主DNA免受消化的影响,这些核酸内切酶旨在消除外源DNA。DNA甲基化在基因表达的调节/控制中的较高真核生物中的功能(2)。哺乳动物中的大多数DNA甲基化发生在5'-CPG-3'二核苷酸中,尽管确实存在其他模式。发现哺乳动物基因组中所有5'-CpG-3'二核苷酸的所有5'-CpG-3'二核苷酸被发现是甲基化的,而剩下的20%的二十%的二十%二十分位于启动子或最初的基因外显子内。已经证明异常DNA甲基化是癌症中普遍存在的现象,可能是肿瘤发生期间发生的最早变化之一(3)。DNA甲基化也已显示在基因印记,胚胎发育,X染色体基因沉默和细胞周期调节中起着核心作用。能够有效,准确地检测和量化DNA甲基化的能力对于研究癌症,基因表达,遗传疾病以及生物学的许多其他重要方面至关重要。迄今为止,已经开发了许多方法来检测/量化DNA甲基化,包括:高性能毛细管电泳(4)和甲基化敏感的任意启动PCR(5)。但是,当今使用的最常见技术仍然依赖于亚硫酸盐转化率(6)。用硫酸硫酸氢盐处理DNA化学将非甲基化的胞嘧啶修饰为尿嘧啶,甲基化的胞嘧啶保持不变。转换后,可以使用所需的下游应用确定DNA的甲基化曲线。为了进行单个基因座分析,在亚硫酸盐转化率(即Bisulfite PCR)之后,通常会扩增感兴趣的区域,然后对pyrosequencing®进行测序或处理。甲基化检测的最新进展还允许使用包括基于阵列的方法在内的技术,减少表示甲基甲基甲基化(RRBS)和整个基因组Bisulfite测序(7)。
海报会议和赞助商的展览和认可;协调员:Keerthana Kirupakaran(例如06&08),带有茶 /咖啡海报ID标题 /作者P1低位级粉煤灰地理聚合物的干缩质:外部条件和粘合剂组成的作用 /粘合剂组成的作用 / Mude Hanumananaik* Bhadury*,Keerthana Kirupakaran,Ravindra Gettu P3 P3协同使用稻壳和甘蔗渣甘蔗:一种可持续的农业垃圾灰烬的方法Chauhan*,Manu Santhanam P5通过实验研究 / Souvik Biswas*,Piyali sengupta P6使用CFRP BARS / SRUTHI KOTTAYAN*P7 VALORDIAMIIIM在侧面安装的技术上,对腐蚀加固的混凝土拱形桥的地震性能评估对加强RC梁的数值研究,对腐蚀的钢筋混凝土拱桥进行地震性能评估。亚硫酸盐水泥 / bipina thaivalappil*,Piyush Chaunsali P8对覆盖有生物膜的钢筋混凝土的阴极保护的调查,用于应用浮动海上风力涡轮机(FOWTS) / DEEKSHA MARGAPURAM*等。
摘要。至关重要的是要了解哪些电势分解反应开始以及随后形成的分解膜中存在哪些化学物质,例如固体电解质相(SEI)。在此,引入了一种新的Operando实验方法,以通过使用硬X射线光电子光谱(HAXPES)来研究此类反应。这种方法可以检查在薄金属膜下方形成的SEI(例如6 nm镍),该膜在具有硫化物的基于硫化物的LI 6 PS 5 Cl固体电解质的电化学电池中充当工作电极。电解质还原反应已经开始为1.75 V(vs。li + /li)并导致相当大的li 2 s形成,尤其是在1.5 - 1.0 V的电压范围内。观察到SEI的异质 /分层微结构(例如,优先的Li 2 O和Li 2 O和Li 2 S在当前收集器附近)。还观察到了侧反应的可逆性,因为在2-4 V电势窗口中分解了Li 2 O和Li 2 S,产生了氧化的硫种类,亚硫酸盐和硫酸盐。