中国仓鼠卵巢 (CHO) 细胞系广泛应用于生物制药生产。细胞系生成的改进加快了最终生产克隆的速度,但开发新型生物分子、生产力限制和市场需求方面的挑战使得细胞系开发 (CLD) 必须不断改进。虽然细胞生长在 CLD 期间显示出明显的瓶颈,但对 CHO 细胞系生长表型的研究有限。最近的一项研究成功地分离并永生化了一种源自原代肺细胞的新型中国仓鼠细胞系,该细胞系表现出更快的生长速度、稳定的生产力和高水平的生物制药蛋白质生产 1 。值得注意的是,CHL-YN 细胞系的倍增时间缩短至 10.7 小时,而 CHO 细胞系的倍增时间通常为 18.0 至 22.0 小时。在这里,我们旨在进行全面的全基因组敲除 (KO) 筛选,以确定加速 CHO 细胞生长的遗传靶点和途径,揭示与 CHO 细胞生长相关的基本遗传机制。我们建立了一个强大的 CRISPR 能力的 CHO DG44 细胞系,能够在单向导 RNA (sgRNA) 存在的情况下以可预测的方式产生插入/删除 (InDel) 事件。此外,我们测试了使用小型 140 sgRNA 微型文库生成和培养转导文库的方法。我们优化的设置能够实现约 80% 的单拷贝整合,这比最近文献中的过去工作有所改进 2 。此外,我们为影响生长的基因靶标的 CRISPR 核酸酶表达依赖性富集和消耗效率提供了证据。
可以在生物疗法生产过程中保留宿主细胞DNA,这构成了将癌基因和/或其他有问题的遗传物质转移到最终药物中的风险。为了最大程度地降低这种风险,监管机构将允许限制设置在10-100 pg/剂量之间,具体取决于所用的细胞系和给药方案。USP一般章<509>“残留DNA测试”建议将基于探针的DNA定量用作经过验证的方法,用于测试在大肠杆菌(E. coli)或中国仓鼠输卵管(CHO)细胞系中产生的重组治疗产品,以确保更好的敏感性和准确性。
可以在生物疗法生产过程中保留宿主细胞DNA,这构成了将癌基因和/或其他有问题的遗传物质转移到最终药物中的风险。为了最大程度地降低这种风险,监管机构将允许限制设置在10-100 pg/剂量之间,具体取决于所用的细胞系和给药方案。USP一般章<509>“残留DNA测试”建议将基于探针的DNA定量用作经过验证的方法,用于测试在大肠杆菌(E. coli)或中国仓鼠输卵管(CHO)细胞系中产生的重组治疗产品,以确保更好的敏感性和准确性。
摘要 新型冠状病毒——严重急性呼吸综合征冠状病毒 2 (SARS-CoV-2) 于 2019 年 12 月被发现,已导致全球数百万人感染和死亡。接种 SARS-CoV-2 疫苗已被证明可有效遏制病毒传播并减少疾病。这些疫苗的生产和分发以惊人的速度进行,主要是通过使用新型 mRNA 平台。然而,供应链中断和对临床级试剂的高需求阻碍了 mRNA 疫苗的生产和分发,而此时加速疫苗部署至关重要。此外,全球范围内 SARS-CoV-2 变种的出现继续威胁着编码祖先病毒刺突蛋白的疫苗的有效性。在这里,我们报告了使用 GreenLight Biosciences 开发的专有 mRNA 生产工艺开发的 mRNA 疫苗的临床前研究结果。在啮齿动物中评估了两种编码全长非稳定化 SARS-CoV-2 刺突蛋白的 mRNA 疫苗 GLB-COV2-042 和 GLB-COV2-043,分别含有尿苷和假尿苷,以了解它们的免疫原性和对祖先毒株和 Alpha(B.1.1.7)和 Beta(B.1.351)变体的 SARS-CoV-2 攻击的保护作用。在小鼠和仓鼠中,两种疫苗均诱导了强大的刺突特异性结合和中和抗体,在小鼠中,疫苗诱导了显著的 T 细胞反应,具有明显的 Th1 偏向。在仓鼠中,两种疫苗在受到 SARS-CoV-2 攻击后均提供了显著的保护作用,以体重减轻、病毒载量以及肺部和鼻咽中的病毒复制来评估。这些结果支持 GLB-COV2-042 和 GLB-COV2-043 的临床应用开发。
本报告发布于新闻业的动荡时期。存在一个悖论:在观众面对充斥着内容和信息的世界的同时,最熟练、最致力于帮助他们理解这一洪流的行业——一种充满寻求真相和服务公众利益理念的行业——发现自己在多个方面面临巨大压力和攻击。这些挑战众多且日益严重:前所未有的收入损失;大规模的技术中断;全天候新闻周期的仓鼠轮冲动;对新闻质量和权威的质疑。人们感到不安,曾经永恒而牢不可破的东西现在变得岌岌可危。本报告以多种形式讨论了这些问题。但目前,我们希望将它们归结为一个词:影响。
文学[1] Reiterer M.,Rajan M.,Gómez-Banoy N.,Lau J. D.,Gomez-Escobar L. G.,Ma L.,Gilani A.等。急性共卷-19中的高血糖症的特征是SARS-COV-2的抑制性和脂肪组织感染性。细胞代谢卷。33(no。11):pp。2174 - 2188.E5 2021。doi:10.1016/j.cmet.2021.09.009 [2] Zickler M.,Stanelle-Bertram S.,Ehret S.,Heinrich F.,Lange P.,Schaumburg B.,Kouassi N. M.等。在仓鼠和人类中,脂肪组织中的SARS-COV-2复制器官和全身脂质代谢。细胞代谢2022
1。不得将货物暴露于实验动物以外的动物中,不得在任何植物,人类或环境中使用。实验室有机体是豚鼠,仓鼠,小鼠,大鼠,兔子或微生物,在实验室或动物屋条件下包含。2。微生物或传染剂不得与根据本许可进口的材料有意培养或隔离。3。不得将任何微生物或传染剂(包括衍生物)(包括衍生物)用于合成具有复制能力的微生物或传染性剂的合成。4。必须在最小的单独包装单元上标记货物的最终使用条件。或最小的单独包装单元必须伴随着说明最终使用条件的文档。必须将本文档提供给商品的最终用户。
引言“ prion”一词首先是由斯坦利·普鲁瑟纳(Stanley Prusiner)于1982年创造的,以描述“蛋白质感染性颗粒”,导致各种致命和可传播的神经退行性疾病,包括scrapie,Creutzfeldt - Creutzfeldt - Jakob病(Jakob病)和Kuru(CJD)和Kuru(Prusiner,1982年)。他们的作用机理让人想起约翰·格里菲斯(John Griffith)在1967年概述的“仅蛋白质”假设中所描述的,声称存在负责刮刀的自我复制蛋白质(Griffith,1967)。一种独特的蛋白质,指定为prion蛋白(PRP),是从crapie感染的仓鼠大脑中纯化的,该仓鼠大脑对有限的蛋白酶K消化有抵抗力(Bolton等,1982; McKinley等,1983; Prusiner等,1982; Prusiner等,1982,1982,1983)。值得注意的是,PRP的浓度与感染性prion的滴度成正比,这表明PRP代表了prion的主要组成部分。基于PRP的部分序列(Prusiner等,1984),将编码该蛋白质的基因克隆在冰草感染和未感染的动物中(Oesch等,1985)。意想不到的发现PRP是由宿主基因组编码的,这表明Prion由正常细胞蛋白的改良病理形式组成。正常细胞prion蛋白(PRP C)和病理刮擦prion蛋白(PRP SC)共享相同的氨基酸序列,但主要差异在其构象和相关的生物化学特性上,例如蛋白酶抗性和溶解度(Barry等,1986; Basler等,1986; Meyer et al。,poster)(Barry等,1986; Basler等,1986; Meyer et al。)现在已广为人知的是,从PRP C到PRP SC
达贝泊汀α是一种促红细胞生成蛋白,通过重组DNA技术在中国仓鼠卵巢细胞中产生。它是一种165个氨基酸的蛋白质,与重组人促红细胞生成素的不同之处在于它含有五个N-连接寡糖链,而重组人促红细胞生成素含有三个链。两个额外的N-糖基化位点是由促红细胞生成素肽骨架中的氨基酸取代引起的。达贝泊汀α通过与内源性促红细胞生成素相同的机制刺激红细胞生成。通常在开始使用达贝泊汀α治疗后两到六周才会观察到血红蛋白水平升高。
我们的饮食必须遵循非常均衡的饮食!我们不应该吃宠物店里常见的食物,而应该吃专门为仓鼠准备的食物、水果、蔬菜、绿色蔬菜、精选谷物和脱水/干燥的黄粉虫(一种处于幼虫阶段的甲虫)。我们还可以在互联网上轻松找到更多有关我们的饮食的信息,所有看似难以获得的食物,例如我们自己的饲料和谷物混合物,都可以在网上商店购买。此外,这些是最好的选择,因为宠物店的工业混合物质量不佳,并且含有不适合啮齿动物的食物,例如生玉米和花生以及含有调味剂、人工色素和过量糖和盐的食物,这些食物会损害我们的肝脏和肾脏。注意:我们喜欢吃我们的食物!