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第5号令和4年6月2日- 防卫省・自卫队
2022 年 6 月 2 日——这样做的人将成为合同相对人。 3 受试者等。受试者。自动体外除颤器垫片和其他 2 件物品。规格。请参阅随附的报价单。数量。[请参阅随附的报价单。交货日期（履行期限）。请参阅附表。
利用 3D 体外模型解锁神经功能
1 罗马第一大学生理学和药理学系，00185 罗马，意大利；chiara.dantoni@uniroma1.it (CD)；lorenza.mautone@uniroma1.it (LM)；tondo.1855708@studenti.uniroma1.it (LT)；paola.bezzi@uniroma1.it (PB) 2 意大利理工学院（IIT）生命纳米和神经科学中心，00161 罗马，意大利；caterina.sanchini@iit.it (CS)；greta.grassmann@iit.it (GG)； gianluca.cidonio@iit.it（GC） 3 罗马第一大学“Alessandro Rossi Fanelli”生物化学科学系，00185 罗马，意大利 4 洛桑大学基础神经科学系，1011 洛桑，瑞士 5 D-Tails srl，00165 罗马，意大利 * 通信地址：federica.cordella@uniroma1.it（FC）；silvia.diangelantonio@uniroma1.it（SDA）† 这些作者对这项工作做出了同等贡献。
在体外评估聚乙胺的纳米插曲 -
有效的基因疗法依赖于有效的基因递送系统。病毒基因递送在转移和表达外部基因方面表现出色。但是，它们的免疫力和大规模生产的困难限制了其临床应用。相比之下，由于免疫原性较小，对大规模生产的便利性，基于纳米颗粒的基因递送系统的注意力越来越多。然而，与病毒系统相比，它们的转染效率差仍然是一个重要的障碍。在主题研究中，我们研究了在HEK293T，CALU-3，CALU-6细胞系和原代人骨髓间充质干细胞（MSC）中，我们调查了PEI涂层石墨烯氧化物的转染效率。氧化石墨烯的高表面比和良好的生物相容性使其成为基因递送系统的吸引力。但是，在水性环境中氧化石墨烯的低分散性是需要征服的第一个障碍。为此，我们通过在pH值为7的pH值中超声超声来增强水中氧化石墨烯在水中的分散性和稳定性。然后，将氧化石墨烯与分支PEI（25 kDa）偶联以具有局部电荷，从而使其能够将其凝结为具有天然负潜能的核酸。我们合成的纳米载体（GO-PEI）的生理化学特性由DLS，FT-IR和AFM确定。多聚体中使用的质粒包含GFP基因，从而使我们能够通过荧光显微镜和流式细胞体 - 尝试验证转染效率。虽然GO-PEI载体在转染HEK293T细胞方面高效，但MSC和Calu-3细胞的转移效率明显低。我们假设这些细胞中GO-PEI转染效率较低的主要原因是由于其较高的毒性。尽管如此，考虑到氧化石墨烯在药物输送中的各种优势以及其在生物医学中的光学和电气应用，我们建议用更具生物相容性材料功能化氧化氧化烯，以增强其作为这些细胞类型中基因载体的潜力。
桉树生态酶的体外抗菌活性（...
背景：桉树（Melaleuca leucadendra）因其生物活性萜类化合物（包括 1,8-桉油素）而具有抗菌潜力。这种化合物能够抑制大肠杆菌的生长，大肠杆菌是一种导致多种传染病的细菌。利用发酵的生态酶法操作简单，不需要复杂的材料。目的：本研究旨在评估桉树生态酶对大肠杆菌的抗菌活性。材料与方法：本研究中使用的 M. leucadendra 来自印度尼西亚拉蒙岸的 Candisari 村，大肠杆菌来自实验室分离株。通过观察 Muller-Hinton 琼脂上的孔扩散试验中的抑菌圈来测量抗菌活性，以氯霉素为阳性对照，蒸馏水为阴性对照。培养期为24小时，温度为36°C。结果：阳性对照周围的抑菌圈为25.94±1.1mm。在10%至100%浓度范围内，阴性对照和桉树环保酶溶液周围均未观察到抑菌圈（0mm）。但环保酶周围观察到一个更清晰的抑菌圈。环保酶无法抑制大肠杆菌的生长可能与多种因素有关，包括成分、加工方法、酸度和细菌抗性。结论：桉树环保酶在任何测试浓度下对大肠杆菌均未表现出足够的抗菌活性。
体外诱导辅助人的训练有素的免疫力...
6。第7天或更高版本：ELISA评估细胞因子水平。按照制造商的说明执行ELISA。上清液中细胞因子的浓度通常高于商业试剂盒的检测极限，因此需要在制造商指定的稀释缓冲液中稀释样品。对于R＆D Duoset Elisa试剂盒，从单核细胞中稀释的稀释剂培训了用B -glucan或bcg训练并在第6天用LPS添加的稀释剂为10 3 –20 3 TNF A和25 3 –100 3 - 100 3稀释3 –100 3以检测IL -6。每个刺激需要优化稀释液，并且在实验室，批次刺激和供体之间可能有所不同。The appropriate controls for the assay are the following: - Non-trained, non-rechallenged cells: No detectable cytokine production - Trained, non-rechallenged cells: No detectable cytokine production - Non-trained, rechallenged cells: High cytokine production - Trained, rechallenged cells: Very high cytokine production
在体外神经元发育形态的半自动定量评估
成熟的神经元表现出其轴突和树突（统称为神经突）的广泛树皮化，以与相邻细胞形成功能连接并接收感觉信号。独特的神经元结构被认为会引起神经元的计算能力（Cuntz，Borst，＆Segev，2007; Ferrante，Migliore和Ascoli，＆Ascoli，2013; Kanari等人。，2018年； Van Elburg＆van Ooyen，2010年； Zomorrodi，Ferecsk´o，Kov´acs，Kréoger和Timofeev，2010年）。In addition, morphological differences between neuronal cell types are thought to result in their functional differences ( Khalil, Farhat, & Dl otko , 2021 ; Krichmar, Nasuto, Scorcioni, Washington, & Ascoli , 2002 ; Mainen & Sejnowski , 1996 ; Schaefer, Larkum, Sakmann, & Roth , 2003 ; Vetter, Roth, & h ausser，2001年）。在体外原发性神经元中这种关键结构的发展过程中，几种形态学变化已被归类为不同的阶段，这些阶段可以定性地描述（Dotti，Sullivan，＆Banker，1988； Powell，Rivas，Rodriguez-Boulan，＆Hatten，＆Hatten，＆Hatten，1997; Tahirovic＆Bradke＆Bradke，2009年）。
优化体外RNA干扰测定法，以降低
2.8 Relative Transcript Abundance measured by Quantitative reverse transcription polymerase chain reaction (qRT-PCR): ................................................................................ 26
腺相关的定量体外效力测定...
临床级矢量批次的效力评估对于支持与腺相关病毒（AAV）媒介的释放至关重要，这对于将来的营销授权是必需的。我们已经开发并验证了基于细胞的定量效力测定法，该测定法检测了AAV8-H-H UGT1A1载体的转基因表达和活性，该载体目前正在临床评估中，用于治疗Crigler-Najjar综合征。在体外评估了AAV8-H UGT1A1的效力。在人肝癌7（HUH7）细胞转导后，通过通过胆红素共结合测定法对转基因阳性细胞进行了转基因阳性细胞。将各种AAV8-HUGT1A1批次的体外效力与体内的效力进行了比较。在AAV8-H UGT1A1转导后，表达UGT1A1的细胞的定量显示了线性剂量响应的相对（r 2 = 0.98），具有足够的内内和日期可重复的可重复性（coviation of Variation [CV] = 11.0％和22.0％和22.0％和22.6％，按照一致，胆红素的偶联显示了线性剂量反应关系（r 2 = 0.99），在低剂量范围内具有足够的日期内和日期可重复性（CV = 15.7％和19.7％）。两者在体外效能分析都可靠地转化为AAV8-H UGT1A1矢量批次的体内效率。对AAV8-H UGT1A1的基于细胞的效力分析充分确定了转基因UGT1A1的表达和活性，这与体内效率一致。这种新颖的方法适合确定载体的效力以支持临床级载体释放。
在体外进行退火温度的优化温度
在聚合酶链反应（PCR）技术中，通过一系列由三个温度依赖性步骤组成的聚合循环在体外扩增DNA：DNA变性，引物 - 板板退火和DNA合成，由热稳定DNA聚合酶。反应产物的纯度和产量取决于几个参数，其中之一是退火温度（T。）。在亚和超级最佳的TA值下，可以形成非特异性产物，并降低产物的产量。合成长产物或总基因组DNA是PCR的底物时，优化T。特别关键。在本文中，我们通过实验确定了几个引物 - 板对的最佳退火温度（TAOPT）值，并开发了一种计算方法。发现TAOPT是较不稳定的引物 - 板对和产品的熔化温度的函数。实验和计算的t，OPT值同意在0.70℃以内的事实消除了实验确定拖曳的需求。DNA片段的合成短于1 kb，因此在每个连续循环中TA较高。
同时定量分析和体外的抗关节剂效果
Results: The50%water-ethanolsolventwastheoptimalsolventyieldingthehighesttotal polyphenol content, and the concentrations of chebulanin and chebulagic acid were muchhigherthanthoseofgallicacid,corilagin,andellagicacidintheextracts.TheDPPH radical-scavenging assay showed that gallic acid and ellagic acid were the最强的抗氧化成分，而其他三个成分显示出可比的抗氧化活性。至于抗炎性作用，Chebulanin和Chebulagic Acid在所有三个浓度下都显着抑制IL-6和IL-8表达； Corilagin andellagicacidsigniify抑制的6 andil-8 ExpressionAthighConcentration;以及IL-1β刺激的MH7A细胞中的GallicacidColdnotnotnotinbiondimibitil-8 Expression andShowedWeakIndeweakInedWeakInibinefil-6表达。主成分分析表明Chebulanin和ChebulagicacidwereThemainComponentsRessiblefortheanti-Arthanti-Arthriticefectsfectsofsof T. Chebula。