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World File Search System免疫沉淀
flap核酸内切酶1通过ADP-核糖基化Yilun Sun 1*，Lisa M. Jenkins 2，Lara H. El Touny 3，Ukhyun Jo 1，Xi Yan
抽象的DNA-蛋白交联（DPC）是最普遍和有害的DNA病变之一，是由于暴露于代谢应激，药物或交联药物（如甲醛（FA））而引起的。fa是甲醇代谢，组蛋白脱甲基化，脂质过氧化和环境污染物的细胞副产品。无法修复FA诱导的DPC几乎所有基于染色质的过程，包括复制和转录，导致免疫缺陷，神经变性和癌症。然而，它在很大程度上仍然未知细胞如何维修DPC。由于缺乏鉴定DPC的技术，我们不理解FA的蛋白质类型会阻碍DPC修复的研究。在这里，我们通过将氯化葡萄球菌差异超速离心与HPLC-MAS-MAS光谱法（MS）耦合，从而设计了一种新型的生物测定法，以介绍FA诱导的DPC。使用该方法，我们揭示了FA诱导的人类细胞中FA诱导的DPC的蛋白质组，发现形成DPC的最丰富的蛋白质是PARP1，拓扑异构酶I和II和II和II，甲基转移酶，DNA和RNA聚合酶，组蛋白，组蛋白，以及核糖体蛋白。为了鉴定修复DPC的酶，我们进行了RNA干扰筛选，发现皮瓣核酸内切酶1（FEN1）的下调使细胞对FA过敏。由于Fen1具有5'-FLAP内切酶活性，因此我们假设FA诱导了DPC偶联的5'-FLAP DNA片段，可以通过Fen1处理。的确，我们证明了FA会损坏通过碱基切除途径（BER）转化为5'-FLAP的DNA碱基。我们还观察到受损的DNA碱基与DPC和FEN1共定位。从机械上讲，我们显示了FEN1在体内修复FA诱导的DPC和裂解5'-FLAP DNA底物，这些DNA具有模拟于体外的DPC。我们还发现，FEN1修复酶拓扑异构酶II（TOP2）-DPC，由其抑制剂依托泊苷和阿霉素诱导的诱导的酶促蛋白酶和阿霉素独立于BER途径，而FEN1和FEN1和DPC靶向的蛋白酶sprtn是对两种FA诱导的非Zym Zym Zym Zymations sprapterations spr的可行途径top2-dpcs。值得注意的是，我们发现FA诱导的非酶DPC和酶ToP2-DPC迅速通过聚辅助核糖基化（ParyLation）迅速修饰，这是一种由PARP1催化的翻译后修饰，由PARP1催化的，这是一种由Paryling DNA损伤损害蛋白和DNA Reparion Reparte resation and DNA损伤蛋白的关键DNA损伤效应器和DNA Reparte resation and dna Reparte stotes和DNA Reparte stotes。，我们用HPLC-MS的抗PAR抗体进行了免疫沉淀（IP）测定，并将Fen1鉴定为parylation底物。接下来，我们表明DPC底物的填充信号发出了Fen1，而Fen1的抚养也将Fen1驱动到DPC位点。最后，使用末端ADP-ribose-MS方法的酶促标记，我们将FEN1的E285残基确定为主要的荷置位点，这似乎是FEN1迁移到DPCS所需的。综上所述，我们的工作不仅揭示了FA诱导的DPC的身份，而且还发现了前所未有的PARP1-FEN1核酸酶途径，是一种通用和势在必行的机制，可以修复其他DPC并防止DPC诱导的基因组不稳定。
人脑基因表达的三个组成部分反映了与神经发育障碍的特定联系
Cardiomyocyte mechanical memory is regulated through the talin interactome and DLC1 dependent regulation of RhoA Emilie Marhuenda 1* , Ioannis Xanthis 1* , Pragati Pandey 1 , Amar Azad 2 , Megan Richter 2 , Davor Pavolvic 2 , Katja Gehmlich 2,3 , Giuseppe Faggian 4 , Elisabeth Ehler 5，James Levitt 5，Simon Ameer-Beg 5，Thomas Iskratsch 1 1 1 1工程与材料科学学院，伦敦皇后大学，英国皇后大学，英国皇后大学2伯明翰大学心血管科学研究所，伯明翰大学B15 2TT，英国伯明翰大学3 2TT，英国3，心血管疾病医学司3意大利维罗纳市维罗纳（Verona）的CardioChirurgia discorte Ospedaliero discorte and Angebolic Medicine and Sciences，英国伦敦国王学院（King's College）的心血管和代谢医学与科学学院 *同等贡献通信：t.iskratsch@qmul.ac.ac.ac.ac.ac.ac.uk摘要机械特性是许多在健康或疾病方面的生物学过程。同样，在心脏中，机械信号越来越清楚地参与了疾病进展。心肌细胞通过整合素和相关蛋白（包括机械敏感的蛋白塔林作为积分成分），将其环境的机械性能感知到其环境的机械性能。我们以前的工作表明塔林张力的不同模式，具体取决于细胞外基质刚度。在这里，我们想研究这如何导致下游机械转导变化，从而进一步影响心肌细胞表型。这表明了机械记忆，我们在小鼠心脏中进一步证实了它。机械信号再次变化，包括例如在光漂白（FRAP）实验后结合免疫沉淀和荧光恢复，我们确定塔林相互作用的蛋白质DLC1，RIAM和PAXILLIN各自优先在特定的细胞外基质刚度下与Talin结合，即使在缺乏张力的情况下也可以保留这种相互作用。机械记忆通过相关的激酶途径调节。使用Lovtrap系统的光遗传学实验证实了各个蛋白质之间的直接竞争，该蛋白再次通过磷酸化而改变。DLC1以刚度依赖性的方式调节RhoA活性，而DLC1的损失和过表达导致肌原纤维混乱。一起研究表明，将机械信息烙印到塔林 - 相互作用中的一种机制，从而对心脏健康和疾病产生了影响。引言心肌细胞是心脏中的收缩细胞，其适当功能通过包括电气，化学和机械信号1的复杂信号网络进行调节。压力和从心脏充满血液中伸展，但同样重要的是感应额外的细胞基质的刚度。后者在开发过程中正在发生变化。重要的是，在衰老和心脏病中，它也正在发生变化，在这种疾病中，通过赖氨酸氧化酶（LOX）（LOX）和LOX酶的胶原蛋白过度交联，可以导致心脏僵硬，心肌细胞表型变化，心脏故障，而保留的射血分数（HFPEF）（HFPEF）2-9。肌营养不良蛋白糖蛋白复合物）和/或信号传导10。心肌细胞通过所谓的Costameres，肌肉Z-DISC水平的肋骨状结构，含有整联蛋白以及其他多分子络合物（例如） 心肌细胞整联蛋白粘附具有许多蛋白质，这些蛋白质在局灶性粘连中也有许多蛋白质，包括附着在细胞质肌动蛋白上的Talin和Vinculin。心肌细胞通过所谓的Costameres，肌肉Z-DISC水平的肋骨状结构，含有整联蛋白以及其他多分子络合物（例如心肌细胞整联蛋白粘附具有许多蛋白质，这些蛋白质在局灶性粘连中也有许多蛋白质，包括附着在细胞质肌动蛋白上的Talin和Vinculin。