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World File Search System免疫荧光
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伽马H2AX（ɣ-H2AX）和磷酸KAP1（PKAP1）是预测性生物标志物，可用于识别DNA损伤响应（DDR）途径的诱导（图1）。在评估DNA损伤疗法的有效性时，监测DDR途径的激活可能是有价值的，并采用涉及测试DDR标记在肿瘤活检中测试DDR标记的标准方法。但是，获得组织活检是侵入性的，具有挑战性的，通常是不可重复的。富含液体活检的循环肿瘤细胞（CTC）提供了一种替代方法，可允许对治疗反应的微创，可重复和实时评估。Angle仅开发了研究用途（RUO）工作流，用于识别CTC上的DNA损伤。在这项研究中，我们旨在评估角度的免疫荧光（IF）测定的性能，以鉴定上皮，间质和过渡性CTC以及确定DNA损伤状态（靶向PKAP1或ɣ-H2AX）在确定的DNA损伤状态（靶向PKAP1或ɣ-H2AX）上，通过与Parsortix®的使用相结合的parsortix®技术，并依赖于Parsortix®根据血液的大小和可变形性，从血液中富集和收获CTC。
熔融电颤技术使半月板结构中的胶原蛋白排列整齐
披露：作者对于本研究没有任何需要披露的信息。简介：半月板对于膝关节的负荷分布、减震和稳定性至关重要。半月板损伤会导致疼痛、活动受限和易患骨关节炎。虽然传统治疗方法不能恢复半月板功能，但生物制造有望生成具有仿生血管化和非血管化区域的半月板结构 1 。然而，这种模拟通常是通过软水凝胶或厚的应力屏蔽纤维实现的。熔融电写 (MEW) 通常用于为具有 µ m 级纤维的水凝胶提供长期机械稳定性 2 。熔融电纤颤 (MF) 使用类似原理，但通过使用牺牲材料，可以实现纳米级纤维 3 。本研究旨在通过融合 MEW 和 MF 来制造区域性半月板结构。 MEW 提供直接的机械稳定性，而 MF 引导胶原蛋白排列以刺激结构 ECM 元素的沉积，从而实现长期的机械稳定性。方法：使用 MEW（聚己内酯 (PCL)）和 MF（PCL/PVAc，比例 = 20:1（MEW:MF））打印菱形（15、30、60 °）和盒子状结构（300 x 300 µm）。通过乙醇/PBS 洗涤溶解 PVAc，并在支架上接种人源半月板祖细胞（hMPC，密度 = 5*10 6 细胞/毫升）。进行压缩和拉伸测试（动态机械分析仪，TA Q800）。用免疫荧光可视化细胞（Dapi、肌动蛋白）和 I 型胶原蛋白引导。为了将脉管系统纳入外部区域，将血管和血管周围细胞（HUVEC：2.5*10 6 细胞/ml 和 MSC：5*10 6 细胞/ml）接种到支架的外部区域。）通过免疫荧光（CD-31 和 a-SMA）研究血管网络的形成。结果部分：MF 纤维引导 MPC（肌动蛋白 +）和 I 型胶原蛋白沉积，而 MPC 聚集在 MEW 微纤维上，I 型胶原蛋白主要沉积在这些聚集体周围（图 1A）。此外，与 MEW PCL 支架或非增强凝胶相比，MF-MEW 的汇聚为半月板结构提供了更高的压缩 E 模量，尤其是随着时间的推移（图 1B）。评估血管分区显示所有结构的总血管长度保持不变，并且与非增强凝胶相比更大（图 1C）。讨论：本研究强调了 MEW 和 MF 融合以引导细胞和 ECM 引导的潜力。MEW/MF 胶原引导可能归因于随着时间的推移更好的基质弹性。此外，本研究展示了生物打印机械能力和半月板构造的第一步，其中包括仿生血管和无血管区。意义/临床意义：这些发现与生成高度多孔但机械稳定的半月板植入物有关，这些植入物可实现胶原对齐，从而实现潜在的长期稳定机械性能。此外，这些结构可用于包括半月板血管和非血管成分的体外研究，以进一步获得半月板再生的基础知识，最终改善患者护理。参考文献：
二肽重复蛋白抑制 C9ORF72 ALS/FTD 中的同源性指导 DNA 双链断裂修复
方法和结果：使用 DNA DSB 修复分析，我们评估了特定修复途径的效率，发现 PR、GR 和 GA 降低了非同源末端连接 (NHEJ)、单链退火 (SSA) 和微同源介导的末端连接 (MMEJ) 的效率，但不降低同源重组 (HR)。我们发现 PR 部分通过与核仁蛋白核磷蛋白 (NPM1) 结合来抑制 DNA DSB 修复。NPM1 的消耗会抑制 NHEJ 和 SSA，这表明 PR 表达细胞中 NPM1 的功能丧失会导致非同源和同源定向 DNA DSB 修复途径受阻。通过删除 NPM1 亚细胞定位信号，我们发现 PR 会结合 NPM1，无论 NPM1 指向哪个细胞区室。删除已知可与其他富含精氨酸的蛋白质结合的 NPM1 酸性环基序可消除 PR 和 NPM1 结合。使用共聚焦和超分辨率免疫荧光显微镜，我们发现 RAD52（SSA 修复机制的一个组成部分）的水平相对于使用 CRISPR/Cas9 基因组编辑删除了 C9ORF72 扩增的同源对照显著增加 iPSC 神经元。对死后脑组织的 Western 分析证实，与对照相比，C9ALS/FTD 样本中的 RAD52 免疫反应性显著增加。
丙硫酸丙二醇酯和抗中性基质细胞质抗体（...
血管炎是一组自身免疫性疾病，其特征是血管壁发炎。受影响的血管尺寸，类型和位置决定了特定类型的血管炎。血管炎可以作为主要过程或继发另一种潜在疾病的主要过程[4]。各种形式的血管炎之一是抗中性粒细胞胞质抗体（ANCA）相关的血管炎（AAV），其特征在于存在ANCAS [5，6]。ANCA是针对多核中性粒细胞和单核细胞颗粒中酶的自身抗体。ANCA主要针对酶蛋白激酶3（PR3）或髓过氧化物酶（MPO）[7]。PR3位于细胞质中，而MPO围绕核。间接免疫荧光（IFF）测试用于确定存在哪些ANCA，突出显示与肉芽肿性炎性炎（PGA或CHURG Strauss综合征）与肉芽肿性相关的细胞质ANCA（C-ANCA），与perinucic（MPA）或perinucial comaint（PGA或Churg strauss综合征）（PGA或Churg strauss综合征）（PGA）（MPA）或perinuciel ANCA（P-PA）（PGA）多血管炎（EGPA或Wegener病）[7]。ANCA还与其他自身免疫性疾病（如类风湿关节炎）相关[8]，这与该IFF检测无法区分。因此，需要另外的酶连接的免疫吸附测定法（ELISA）来确认指示。AAV会影响中小血管，可能损害几个器官[9，10]。
居里基金会项目确定...的机制
项目 确定斑马鱼受伤后控制心脏成功再生的机制 描述 心脏的再生能力在动物界中差异很大。包括人类在内的哺乳动物在心脏受伤（心脏病发作）后再生反应较差。因此，由于缺乏直接针对受伤原因的治疗，患者常常会出现并发症。另一方面，斑马鱼在受伤后表现出非凡的自然再生心脏的能力。因此，通过确定驱动积极再生反应的斑马鱼因素和机制，我们可以潜在地利用这些知识并将其应用于表现出较差再生反应的动物，以新疗法和新疗法的形式。在这个项目中，我们将结合基因操控和先进的实时成像技术来识别和控制心脏再生过程中重要的细胞潜在因素。因此，该项目将为单个细胞内以及细胞之间的复杂相互作用提供新的见解，以成功完成再生。技术 克隆、免疫荧光、RNA 原位杂交、基因操作（RNA、crispr、tol2、突变体、转基因）、斑马鱼处理、活体共聚焦成像 参考文献 doi: 10.1126/science.abo6718 doi: 10.1242/dev.199740 doi: 10.1016/j.ydbio.2020.12.004 联系方式 Phong NGUYEN 遗传学和发育生物学 UMR3215/U934 单位 电子邮箱：phong.nguyen@curie.fr 电话：+33 (0) 156246897 网站：htps://insutut-curie.org/equipe/nguyen
从挪威养殖大西洋比目鱼 Hippoglossus hippoglossus 细胞培养中分离诺达病毒
摘要：本文介绍了从患有病毒性脑病和视网膜病变 (VER) 的大西洋比目鱼 Hippoglossus hippoglossus 细胞培养物中分离诺达病毒的方法。细胞系 SSN-1 接种了患病幼鱼的组织材料（首次喂食后 60 天）。接种后约 5 天出现广泛的细胞病变效应 (CPE)，在同一细胞系中传代数次后也观察到了这种现象。在间接免疫荧光试验中，感染培养物的细胞与抗鲈鱼 Dicentrarchus labrax 诺达病毒的抗血清表现出反应性。使用针对条纹鲈 Pseudocaranx dentex 诺达病毒的特异性引物，用逆转录聚合酶链反应 (RT-PCR) 分析感染细胞，结果得到预测大小的产物。感染的 SSN-1 细胞的电子显微照片显示病毒颗粒大约小于 30 纳米。用受感染的 SSN-1 细胞的上清液对大西洋大比目鱼幼体（孵化后 4 天）进行攻击，导致 VER 的产生，这通过对攻击后第 9 天采集的幼体样本进行的免疫组织化学检测得到证实。目前的结果表明，使用 SSN-1 细胞系分离了来自大西洋大比目鱼的诺达病毒，并且在细胞培养中繁殖的病毒保留了毒力。
使用常温机器灌注平台对肾缺血再灌注损伤进行药物靶向治疗
常温机器灌注 (NMP) 是一种在移植前保存肾脏的新兴方式。NMP 可以实现对肾脏缺血-再灌注损伤 (IRI) 的定向药物调节，而无需全身供体/受体疗法。在小鼠肾脏 IRI 模型中比较了三种已证实的抗 IRI 药物，即 CD47 阻断抗体 (α CD47Ab)、可溶性补体受体 1 (sCR1) 和重组血栓调节蛋白 (rTM)。然后在定制的 NMP 回路中使用最有效的药物来治疗分离的猪肾脏，确定药物对灌注和 IRI 相关参数的影响。α CD47Ab 在 24 小时后对小鼠的 IRI 具有最大的保护作用。因此，α CD47Ab 被选为添加到 NMP 回路的候选药物。通过免疫荧光证实了 CD47 受体结合。与未经治疗的 NMP 肾脏相比，CD47 阻断后肾脏灌注/血流得到改善，氧化应激和组织学损伤相应减少。NMP 期间，α CD47Ab 治疗对肾小管和肾小球功能参数没有显著影响。在小鼠肾脏 IRI 模型中，与针对其他途径的疗法相比，α CD47Ab 被证实是一种更优的抗 IRI 药物。NMP 能够有效地将这种药物直接输送到猪肾脏，尽管需要在移植环境中进一步证明其疗效。
STING 激动剂 8803 重新编程免疫微环境并提高胶质母细胞瘤临床前模型的生存率
STING 激动剂可以重新编程肿瘤微环境，以诱导中枢神经系统内的免疫清除。使用多重顺序免疫荧光 (SeqIF) 和 Ivy 胶质母细胞瘤图谱，发现 STING 表达于髓系群体和血管周围空间。STING 激动剂 8803 延长了多种胶质母细胞瘤临床前模型中的中位生存期，包括免疫检查点阻断耐药模型 QPP8，其中 100% 的小鼠被治愈。治疗窗口期间的体外流式细胞术分析显示髓系肿瘤运输和激活增加，同时 CD8 + T 细胞和 NK 效应反应增强。用 8803 治疗可重新编程小胶质细胞以表达共刺激 CD80/CD86 和 iNOS，同时降低免疫抑制 CD206 和精氨酸酶。在人源化小鼠中，肿瘤细胞 STING 被表观遗传沉默，8803 的治疗活性得以维持，进一步证明了骨髓依赖性和重编程。虽然与 STAT3 抑制剂联合使用并没有进一步增强 STING 激动剂活性，但在免疫检查点阻断反应性胶质瘤模型中，将抗 PD-1 抗体添加到 8803 治疗中可提高生存率。总之，8803 作为单一疗法表现出显著的体内治疗活性，值得考虑进行临床转化。
原始文章formononetin通过抑制自噬
摘要：目的：这项研究的主要目的是研究新型COL4A5 MIS感官突变对IV胶原型的影响。方法：收集了临床数据和详细的家族病史。靶向下一代测序（NGS）用于检查概率中的COL4A3，COL4A4，COL4A5基因中的潜在致病变异，然后使用生物信息学工具和谱系分析对变体进行分析。CRISPR/CAS9基因编辑用于敲击人足细胞中潜在的致病变异，然后使用蛋白质印迹分析和免疫荧光测定法来测量COL4A5蛋白的表达。结果：三名患者（I：2，II：1和II：2）出现了微观的血尿和蛋白尿，以及患者II：1：Pro t. pro nod of F.一种新型的错义变体C.2641G> A（p。Gly881arg），位于Col4a5基因的外显子31中，被选为可能的致病变体。在CRISPR/CAS9基因编辑的Podocytes中，变体显着降低了胶原蛋白IVα5链的表达。结论：通过进行NGS和CRISPR/CAS9基因编辑Podocytes，一种新型的COL4A5错义变体，C.2641G> A（p。Gly881arg），被确认为中国家族中X-C-C-C-C-C-C-C-C-C-连接Alport综合征的遗传缺陷。我们的发现扩展了具有COL4A5突变的X连锁Alport综合征的遗传谱，并提供了一种评估新型COL4A5错义变体的功能意义的方法。
通过腺病毒载体转移优化的 CRISPR-Cas9 成分整合基因传递和基因编辑技术
摘要 增强 RNA 引导的 CRISPR-Cas9 核酸酶 (RGN) 的细胞内递送和性能仍然有需求。在这里，我们表明常用的化脓性链球菌 Cas9 (SpCas9) 蛋白的核转位并不理想。因此，我们通过为高特异性 eSpCas9(1.1) 核酸酶 (eCas9.2NLS) 赋予额外的核定位信号 (NLS) 来生成 eCas9.4NLS。我们证明与原型或优化的引导 RNA 偶联的 eCas9.4NLS 可实现有效的靶向 DNA 切割，并探究具有不同 NLS 组成的 SpCas9 蛋白在异染色质和真染色质中嵌入的靶序列上的性能。此外，在腺病毒载体 (AdV) 介导的 SpCas9 表达单元转移后，无偏定量免疫荧光显微镜显示 eCas9.4NLS 核富集水平比高特异性 eCas9.2NLS 的核富集水平高 2.3 倍。这种改进的核易位反过来在非同源末端连接修复靶向双链 DNA 断裂后产生了强大的基因编辑。具体而言，AdV 将 eCas9.4NLS 递送到肌肉祖细胞中，导致有缺陷的 DMD 等位基因（导致杜氏肌营养不良症 (DMD)）的编辑频率明显高于编码亲本 eCas9.2NLS 蛋白的 AdV 所实现的编辑频率。总之，这项工作为整合病毒载体和优化的基因编辑技术以增强 RGN 递送和性能提供了强有力的理论基础。