图1。DNA纳米结构组件和纳米孔的表征。a)DNA螺旋束杂交的示意图:7249 NT M13MP13的热退火,带有190个短“主食”链。b)预期尺寸和3螺旋束组件的结构。c)1%琼脂糖凝胶电泳,显示了一个泳道中各种DNA长度的梯子,另一个车道完全组装了3HB结构。d)用于3HB结构的纳米孔感测的设置。黄色的色调描绘了电场强度。e)在13.2nm孔(顶部)中,在200 mV以下的12m licl中存在3HB引起的瞬时离子阻塞的串联电流痕迹(顶部)。单个封锁事件适合提取变量,例如最大电导阻塞和易位时间(底部)。f)在与(e)相同的实验条件下,最大电导阻塞与易位时间的散点图,n = 846。
单细胞凝胶电泳测定法,也称为彗星测定法,是一种广泛使用的方法,可在视觉上评估DNA损伤。受到碱性条件的影响,具有不同分子量和电荷的DNA分子在电场中表现出不同的行为。未损坏的DNA分子保留在细胞核内,并在电泳过程中显示出最小的迁移,而变性的DNA片段则从核中迁移。遗传物质从细胞核到尾部的迁移增加,称为“彗星损伤”,是DNA损伤的量度。彗星测定基本上涉及量化通过光学显微镜获得的图像[5]。此外,人类8-羟基-2-脱氧鸟苷(8-OHDG)ELISA测定是一种精确的体外定量技术,用于检测人类唾液,血清,尿液和质量样品中的8-OHDG。8-OHDG是由于鸟嘌呤的羟基自由基攻击引起的活性氧(ROS)诱导的DNA碱基修饰。通过ELISA对8- OHDG浓度的量化由于其稳定性而变得越来越流行,
fastgene®50bpDNA梯子猫。编号MWD50尺寸:56μg /500μl描述PCR产物的独特组合和许多用适当限制酶消化的专有质粒,以产生17个片段,适合用作琼脂糖凝胶电泳的分子量标准品。DNA包括50-1,500碱基对的片段。200、500和1200碱基对带的强度增加了作为参考点的强度。提供了每个频段中DNA的近似质量(0.56μgA负载),以近似于相似大小的相似强度样品中的DNA质量。用适当限制酶消化的源PCR产物和双链DNA被苯酚提取并平衡至10 mM Tris-HCl(pH 8.0)和10mm EDTA。范围:50-1,500 bp的频带数:17浓度:112μg / ml包装:56μg /500μl建议的负载:5μl /井包含橙色G作为跟踪染料。在4°C的存储存储12个月在-20°C 24个月
我们已经确定了T4 DNA(166千碱基对,KBP)对圆锥形和板层中稳态剪切下碎片化的敏感性。以6000 s 1的剪切速率剪切至少30分钟后,对应于O(10 3)的雷诺数(10 3)和weissenberg数量的O(10 3),97:9 + 1:3%的样品被分解为具有62:62:6 + 3:2 kbp的polydisperse混合物中的polydisperse混合物中03,通过脉冲场凝胶电泳测量(置信区间为95%)。此处从剪切流中观察到的分子量分布与DNA的(主要伸展)水槽流产生的分子分布相似,并且与在简单的伸展流中观察到的中点分布在质量上不同。鉴于剪切流无法产生锋利的线圈 - 拉伸过渡,此处显示的数据支持了一个模型,其中聚合物可以在不完整扩展的情况下在流量中碎片。这些结果进一步表明,在微流体设备中,剪切的DNA碎片不可能是一个重要的问题,并且实验中的异常分子量观察是由于DNA在设备中观察之前的DNA处理引起的。
Silico PCR中的摘要是一种计算技术,用于预测PCR结果,提高引物特异性并在进行实验室工作之前优化实验条件。已经开发了许多带有预加载基因组模板的基于Web的工具,用于在计算机PCR模拟中进行操作。但是,对灵活,用户友好的软件包的需求不断增加,该软件包允许用户上传或定义自己的自定义模板序列并脱机操作,从而确保在Silico PCR模拟和启动验证中确保数据隐私和安全性。本文介绍了Pypcrtool,这是一种python软件包,旨在在计算机PCR模拟中执行并验证底漆特异性。该工具旨在提供一种灵活,用户友好的解决方案,该解决方案在本地处理数据,从而促进DNA片段扩增的预测以及通过凝胶电泳模拟对PCR产品谱带的可视化。PYPCRTool允许用户输入和指定模板DNA序列文件,向前和反向引物序列并自定义不匹配公差。一个示例场景演示了Pypcrtool的功能,展示了其能力
基因克隆是指分离目标 DNA 序列以复制多个副本的过程。目标基因被分离(通过 PCR),然后插入质粒载体(通过消化和连接)。质粒载体能够在宿主细胞内自主复制,确保序列被克隆。重组载体可用于创建转基因生物 (GMO),进而可用于生产大量治疗性蛋白质(生物制药)。基因克隆的过程涉及多个步骤:•用聚合酶链式反应(PCR)分离和扩增目的基因(和质粒载体)•如果要将基因整合到细菌细胞中,则需要 cDNA 拷贝(逆转录)•用相同的特异性限制性酶(平端或粘端)消化基因和质粒载体•通过将目的基因连接到质粒载体(使用 DNA 连接酶)来创建重组质粒•通过凝胶电泳将重组质粒与正常质粒(没有目的基因)分离•通过载体递送方法(例如电穿孔)将重组质粒引入靶细胞•在抗生素培养基中培养细胞以选择修饰细胞(只有带有质粒的细胞才具有抗生素抗性)
摘要。Sukmawati S,Ratna R,Sipriyadi,Yunita M.2023。从印度尼西亚西南巴布亚省Sorong City的鲭鱼Bekasam的细菌表征和分子鉴定。生物多样性24:4967-4977。bekasam是传统发酵鱼产生的传统食物类型。通过发酵生长的微生物在形成产品的香气,质地和整体质量方面起着重要作用。该研究旨在确定鲭鱼(Scomberomorus sp。)的细菌的生化特征sorong City的Bekasam,并在分子水平上识别细菌。 这项研究是一项描述性研究,它描述了通过PCR(聚合酶链反应)技术从发酵鲭鱼鱼中表征细菌的结果以及分子鉴定到物种水平的结果。 然后,使用琼脂糖凝胶电泳分离方法进一步分析了DNA序列,以可视化细菌DNA谱。 鲭鱼中细菌分离株的生化表征表明,所有分离株都是阴性吲哚,八个分离株在还原硝酸盐时呈阳性。 相比之下,在还原硝酸盐时,四个分离株为阴性,然后所有分离株都具有蛋白水解活性,除了FST 3.1和FST 3.2分离株。 11个分离株在水解脂肪中是阳性的,一个分离物不能水解脂肪。sorong City的Bekasam,并在分子水平上识别细菌。这项研究是一项描述性研究,它描述了通过PCR(聚合酶链反应)技术从发酵鲭鱼鱼中表征细菌的结果以及分子鉴定到物种水平的结果。然后,使用琼脂糖凝胶电泳分离方法进一步分析了DNA序列,以可视化细菌DNA谱。鲭鱼中细菌分离株的生化表征表明,所有分离株都是阴性吲哚,八个分离株在还原硝酸盐时呈阳性。相比之下,在还原硝酸盐时,四个分离株为阴性,然后所有分离株都具有蛋白水解活性,除了FST 3.1和FST 3.2分离株。11个分离株在水解脂肪中是阳性的,一个分离物不能水解脂肪。根据16个SRNA基因序列的电泳和比对的DNA模式,已将几种类型的细菌鉴定为帕马果果仁杆菌2883 FST 1.1菌株,帕马类杆菌杆菌菌株3665 FST 2.1杆菌菌株2.1 ICA-144 FNT 2.1和蜡状芽孢杆菌菌株ATCC 14579 FNT 3.1。
摘要 在调查中,对受害者和肇事者进行法医身份识别至关重要,特别是在尸体被烧毁、腐烂或严重受损的案件中。牙齿通常被用作 DNA 分析的来源,因为与骨头相比,牙齿更能抵抗环境影响。本研究旨在评估温度和燃烧时间对用于性别鉴定的牙齿 DNA 质量的影响。25 颗牙齿样本在 500°C、750°C 和 1000°C 的温度下燃烧 10 分钟和 15 分钟。通过苯酚-氯仿-异戊醇法进行 DNA 提取,并使用紫外可见分光光度法进行测量。使用牙釉质蛋白基因通过 PCR 进行 DNA 扩增,并使用丙烯酰胺凝胶电泳进行可视化。本研究的结果表明,DNA 浓度随燃烧温度的升高而增加。然而,DNA 的质量在高于 500°C 的温度下会下降。牙齿被证实可承受 500°C 的高温燃烧 10 分钟,可用作性别鉴定的来源,但在 750°C 和 1000°C 的高温下容易降解。这项研究通过强调牙齿对高温的抵抗力,帮助执法人员对火灾受害者进行法医鉴定。
Agilent Femto Pulse 系统的革命性设计使其成为唯一能够自动对高分子量 (HMW) gDNA 进行脉冲场凝胶电泳 (PFGE) 分析的仪器。与 PFGE 分析相比,Femto Pulse 系统能够在极短的时间内对 gDNA 大小和完整性进行定性分析。第三代测序或长读测序平台在从小型基因组分析到复杂基因组从头组装等各种应用方面的进步,对 HMW gDNA 样本提出了高质量标准。有多种方法可用于从真核和原核来源中分离 gDNA,这些方法针对特定的下游应用量身定制。因此,分离的 gDNA 的大小和质量会受到不同提取方法的影响,因此需要对 gDNA 样本进行可靠的质量评估。Agilent 基因组 DNA 165 kb 试剂盒专为在 Femto Pulse 系统上分离 HMW gDNA 而设计,可提供准确且可重复的大小和质量评估。使用 Femto Pulse 系统上的五种不同 gDNA 提取方法和基因组 DNA 165 kb 分析对 gDNA 的大小和质量进行了比较。
低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)升高是ASCVD发展和进展的根本致病因素。 3,4 先前的研究表明,低 LDL-C 水平的个体 ASCVD 发病率低于高 LDL-C 水平的个体。 5-7 LDL 由几种大小和密度不同的颗粒子类组成,包括大浮力 (lb) 颗粒以及中密和小密 (sd) LDL。 8 然而,与其他亚型相比,sdLDL 可能是跨不同 LDL 亚型的 ASCVD 风险的更好的生物标志物。 9,10 据报道,sdLDL 与多种疾病有关,包括代谢紊乱、肥胖和 2 型糖尿病,并被认为是冠心病的危险因素。 11-13 因此,测量 sdLDL-C 水平对于监测 ASCVD 风险具有重要意义。测量 sdLDL-C 的传统方法依赖于复杂的超速离心或梯度凝胶电泳。 14 测量所需的特殊设备和较长的测定时间限制了 sdLDL 测量的临床应用。桑普森等人开发了一个基于标准脂质组结果估算 sdLDL-C 的新方程,其判定系数为 0.745。 15 但其配方仅在美国人群中建立,其在其他人群中的适应性和估计效果仍不清楚。