或者,您可以使用依赖于 Sanger 测序的 EditCo 的 CRISPR 编辑推断 (ICE) 工具来分析单指导、多指导和敲入 CRISPR 编辑。值得注意的是,EditCo 的 ICE 工具目前是分析多指导衍生的 CRISPR 编辑的唯一公开可用选项。CRISPR 编辑推断 (ICE) 工具是一款免费的在线软件,可分析 Sanger 测序数据以确定编辑效率。在使用 ICE 之前,必须准备编辑和对照 DNA 样本进行 Sanger 测序。该协议提供了如何设计引物、分离基因组 DNA 和进行 PCR 的说明。这些说明可用于每个靶标使用一个 sgRNA(或 cr:tracr)或每个靶标使用多个 sgRNA(即 EditCo 的多指导设计)的敲除实验。该协议也可用于敲入实验。如果您需要 Sanger 测序引物,可以联系 Technicalsupport@editco.bio。请注意,Sanger 引物建议是使用标准生物信息学算法计算得出的。EditCo 并未对其进行功能验证。
Lorraine Meisner 博士 Forrest Spencer 博士 “…不因他人的言论而灰心丧气是不可能的。这种心态还必须伴随着兴奋和动力,否则就没有动力继续尝试。”
参考文献1。Lazo M,Clark JM。非酒精性脂肪肝病的流行病学:一种全球视角。Semin Liver Dis.2008; 28:339-50。2。Bajaj S,Nigam P,Luthra A等。一项关于胰岛素抵抗,代谢共同变化和预测评分的病例对照研究。印度J Med Res。2009; 129(3):285-292。 3。 Mohan V,Farooq S,Deepa M,Ravikumar R,Pitchumoni CS。 与不同等级的葡萄糖不耐症和代谢综合征有关的南印第安人非酒精脂肪肝病患病率。 糖尿病临床实践。 2009; 84(1):84-91。doi:10.1016/j.diabres.2008.11.039 4。 Romeo S,Kozlitina J,Xing C等。 PNPLA3中的遗传变异赋予对非酒精性脂肪肝病的敏感性。 nat Genet。 2008; 40(12):1461-1465。 doi:10.1038/ng.257 5。 Severson TJ,Bostur S,Bonkovsky HL。 影响非酒精性脂肪肝病的遗传因素:系统的临床综述。 世界J胃烯醇。 2016; 22(29):6742-6756。doi:10.3748/wjg.v22.i29.6742 6。 Kozlitina J,Smagris E,Stender S等。 外显域的关联研究确定了一种TM6SF2变体,该变体赋予了对非酒精性脂肪肝病的易感性。 nat Genet。 2014; 46(4):352-356。 doi:10.1038/ng.2901 7。 Oliveira Ain,Malta FM,Zitelli PMY,Salles APM,Gomes-Gouvea MS,Nastri ACS,Pinho JRR,Carrilho JRR,Carrilho FJ,Oliveira CP,Mendes-CorrêaMC,Pessoa MC,Pessoa MG,Mazo DF。 PMID:33622266; PMCID:PMC7901065。 8。2009; 129(3):285-292。3。Mohan V,Farooq S,Deepa M,Ravikumar R,Pitchumoni CS。与不同等级的葡萄糖不耐症和代谢综合征有关的南印第安人非酒精脂肪肝病患病率。糖尿病临床实践。2009; 84(1):84-91。doi:10.1016/j.diabres.2008.11.039 4。Romeo S,Kozlitina J,Xing C等。PNPLA3中的遗传变异赋予对非酒精性脂肪肝病的敏感性。nat Genet。2008; 40(12):1461-1465。 doi:10.1038/ng.257 5。 Severson TJ,Bostur S,Bonkovsky HL。 影响非酒精性脂肪肝病的遗传因素:系统的临床综述。 世界J胃烯醇。 2016; 22(29):6742-6756。doi:10.3748/wjg.v22.i29.6742 6。 Kozlitina J,Smagris E,Stender S等。 外显域的关联研究确定了一种TM6SF2变体,该变体赋予了对非酒精性脂肪肝病的易感性。 nat Genet。 2014; 46(4):352-356。 doi:10.1038/ng.2901 7。 Oliveira Ain,Malta FM,Zitelli PMY,Salles APM,Gomes-Gouvea MS,Nastri ACS,Pinho JRR,Carrilho JRR,Carrilho FJ,Oliveira CP,Mendes-CorrêaMC,Pessoa MC,Pessoa MG,Mazo DF。 PMID:33622266; PMCID:PMC7901065。 8。2008; 40(12):1461-1465。 doi:10.1038/ng.257 5。Severson TJ,Bostur S,Bonkovsky HL。影响非酒精性脂肪肝病的遗传因素:系统的临床综述。世界J胃烯醇。2016; 22(29):6742-6756。doi:10.3748/wjg.v22.i29.6742 6。Kozlitina J,Smagris E,Stender S等。外显域的关联研究确定了一种TM6SF2变体,该变体赋予了对非酒精性脂肪肝病的易感性。nat Genet。2014; 46(4):352-356。 doi:10.1038/ng.2901 7。 Oliveira Ain,Malta FM,Zitelli PMY,Salles APM,Gomes-Gouvea MS,Nastri ACS,Pinho JRR,Carrilho JRR,Carrilho FJ,Oliveira CP,Mendes-CorrêaMC,Pessoa MC,Pessoa MG,Mazo DF。 PMID:33622266; PMCID:PMC7901065。 8。2014; 46(4):352-356。 doi:10.1038/ng.2901 7。Oliveira Ain,Malta FM,Zitelli PMY,Salles APM,Gomes-Gouvea MS,Nastri ACS,Pinho JRR,Carrilho JRR,Carrilho FJ,Oliveira CP,Mendes-CorrêaMC,Pessoa MC,Pessoa MG,Mazo DF。PMID:33622266; PMCID:PMC7901065。8。PNPLA3和TM6SF2多态性在巴西慢性丙型肝炎患者中对肝纤维化和代谢异常的作用C. 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。cc-by 4.0国际许可证(未经同行评审证明)获得的是作者/资助者,他已授予Biorxiv授予Biorxiv的许可,以永久显示预印本。这是该版本的版权持有人,该版本于2024年8月14日发布。 https://doi.org/10.1101/2024.08.13.607711 doi:Biorxiv Preprint
标题日期(HD)是由多个基因座控制的至关重要的农艺性状,它可以探讨大米(Oryza sativa L.)的一系列地理和季节性适应。因此,有关跨父母HD基因型的信息对于标记辅助育种计划至关重要。在这里,我们使用Fluidigm 96-Plex SNP基因分型平台来开发基因分型测定,以确定41 HD基因座的等位基因(29个先前具有特征性的基因和12个定量性状基因座[QTLS],包括新检测到的QTL)。基因分型测定总共区分了144个等位基因(根据文献和公开可用的数据库定义)和QTL。377个品种的基因分型平均显示3.5个等位基因,HD1,GHD7,PRR37和DTH8的多样性高于其他基因座的基因分型,而参考(“ Nipponbare”)基因型在41个基因座的30型中的占主导地位。HD预测模型使用来自200个品种的数据显示出良好的相互作用(r> 0.69,p <0.001),当时用22种未包含在预测模型中的品种进行测试。因此,开发的测定法提供了有关HD的基因型信息,并将实现具有成本效益的繁殖。
图2。单倍型精度定义和分析在256个具有挑战性的医学相关基因座。a,hap-lot型误差计算为实际和预测的单倍型之间的序列差异。质量值(QV)是单倍型误差的类似phred的变换。b,序列差异(单倍型误差)和QV箱之间的近似对应关系。c,全数据库locityper的单倍分型精度(以填充圆圈为标记)和1公斤的调用分别设置为最多40 HPRC样品。单倍型失败过滤的单倍型以灰色显示。d,在多达40个HPRC样本中,保留的一个设置中的locityper精度(loo;带有白色圆圈)和相应的单倍型可用性(实际和最接近可用的单倍型之间的QV)。e,从1kgp的602 Illumina WGS三重奏处的Locityper一致性。f,准确性,在跨HPRC样品的LOO设置中被Locityper丢失 - 最佳可用QV和预先介绍的QV之间的差异。累积分数显示为浅蓝色。
与外部植物性状不同,肉眼的肉眼无法区分构成负责这些表型特征的基本遗传材料的基因型。使基因型可以进行研究,并在植物育种和相关主题中进一步理解和使用,已经可以使用各种基因分型方法。植物基因分型始于相当复杂的方法,基于使用标记的探针直接杂交DNA片段来鉴定需要大量靶DNA的特定基因(如限制片段长度多态性或RFLP的情况下)。几年后,它们演变为一系列相对简单,更便宜的基于PCR的方法。These latter reached a peak with very polymorphic and straightforward markers, like microsatellites or SSR (Simple sequence repeats), which were then followed by DNA sequencing and fragment analysis, PCR and qPCR, allele-speci fi c molecular probes and primers, and today ' s modern and advanced microchip-DNA technology involving hundreds to thousands of simultaneous reactions.我们的知识和植物基因分型进展的当前状态在此研究主题中进行了更新,在该主题中,我们详细介绍了用于针对不同植物物种感兴趣的各种基因的可用方法和技术。从传统分子标记到现代微阵列技术,我们的研究主题涵盖和解决了广泛而多样的领域。纳入了各种科学方法和研究思想,旨在更好地了解植物基因分型的更好的理解和实际应用。Yin等。 chinensis makino)。Yin等。chinensis makino)。这导致了随后的14篇发表论文。如上所述,SSR标记是一种简单,通用且直接的分子工具,用于植物基因分型。使用的SSR标记用于实用识别和非头卷心菜的独特性测试(Brassica Campestris ssp。这是一个非常重要的测试,它建立了独特的,统一性和稳定性(DU),这是授予植物品种权利(PVR)所需的基本因素。作者测试了287个SSR标记,用于423种非头卷心菜品种的基因分型,并使用了四种荧光染料,FAM,HEX,HEX,TAMRA和ROX,用于远期引物的标签。重要的是,两种方法
简介:这项研究旨在研究支原体肺炎(MP) - MP肺炎(MPP)儿童支气管肺泡灌洗液(BALF)中的DNA负荷及其亚型及其亚型的肺炎及其相关的实验室数据,成像,成像儿童及其临时临床的复杂性,并进行了临床临床的临时,并进行了临床。方法:在2017年12月至2020年12月之间在天津儿童医院住院的儿童被选为研究,不包括病毒,细菌和真菌感染的混合病毒。使用实时定量荧光聚合酶链反应(PCR),根据BALF中的MP DNA负载将儿童分为低负载组。成功的MP培养后,阳性样品受到PCR限制片段长度多态性和多级别可变数字串联重复分析键入键入。从研究中包括的所有儿童收集了基本数据,临床信息,实验室数据和放射学结果。结果:PI-I类型主导了不同的负载组。低负荷群体中的儿童喘息和呼吸急促。然而,高负荷组的儿童住院时间更高,最高发烧温度,更高的寒冷/寒冷,腹痛的发生率以及较高的C反应蛋白(CRP),procalcitonin(PCT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平。高负载组中的儿童更可能发生成像变化,例如胸腔积液,呼吸道感染和肺外并发症的发生率高于低负载组中的呼吸道感染。我们应用了Spearman的相关分析来阐明MP DNA负载与MPP的临床严重程度之间的关系。我们发现,MP DNA负荷与住院时间,最高发烧温度,CRP,PCT,白介素6(IL-6)和AST水平正相关,并且与发烧和咳嗽持续时间,白细胞计数(WBC)以及单一细胞(MONOO)(MONOO)的比例负相关。相关程度如下:住院时间> IL-6>咳嗽持续时间> AST> AST>发烧持续时间> PCT> WBC>单声道>最高发烧温度> CRP水平的比例。结论:MP DNA负荷与MP键入无关,但与儿童的临床表型显着相关。因此,MP DNA负荷有助于早期诊断感染,并可以更好地预测疾病的回归。
来自Illumine基因分型微阵列的原始基因分型数据以图像格式(IDAT文件)上传到Genomestudio软件中。此软件通过基于荧光强度的相似性来确定样品的自动聚类来确定等位基因的身份。但是,由于异常强度模式,默认聚类算法可能无法识别有效的簇,也可以将错误的基因型分配给样品。可以通过手动审查和回忆SNP来解决数据的可靠性,信心和整体质量,从而使其成为非常关键的质量控制(QC)程序,然后再使用PLINK或遗传解释进一步QC。此过程可以按; - =几周,具体取决于项目的大小(SNP的数量)。GenomeStudio软件需要至少提供的VWW样品来准确地群集数据,并且如果样本超过= www,我们必须在批处理中进行,以便花费更多的时间。此外,更大的芯片也需要更多的时间,因此成本更高。
1 de Buenos Aires大学,Acclultod de Pharmacy yBioquíMica,Microbiologici aclínica,布宜诺斯艾利斯C1113A,阿根廷; karina.buttner@gmail.com(k.a.b。); carolinaentrocassi@gmail.com(A.C.E。 ); lgvaulet@ffyb.uba.ar(m.l.g.v.) 2 Universidad de Buenos Aires, Instituto de Investigaci ó n en Fisiopatholog í a y bioqu í mica cl í nica (infibioc), buenos aires c1113aad, Argentina 3 divided ó n cirug í a, hospital fern á ndez, buenos aires c1425agp, Argentine; lopezdeysi20@gmail.com(立法法令 ); lausvidlerlopez@gmail.com(l.s.l.) 4 Centro Privato de cirugi a y coloprochologe i,阿根廷布宜诺斯艾利斯C1060ABB; painscarena@gmail.com(D.C。); lucianarosa@gmail.com(L.L.R.) 5布宜诺斯艾利斯大学,塞西亚斯兽医,萨鲁德·普里卡,布宜诺斯艾利斯C1427CWO,阿根廷; odegre@fvet.uba.ar 6 Uppsala大学医院临床微生物学系,瑞典751 85; bjorn.hermann@medsci.uu.se 7临床微生物学分隔,乌普萨拉大学医学科学系,751 85 Uppsala,瑞典 * corpspondence:mrfchlam@ffyb.uba.uba.ar.ar.ar); lgvaulet@ffyb.uba.ar(m.l.g.v.)2 Universidad de Buenos Aires, Instituto de Investigaci ó n en Fisiopatholog í a y bioqu í mica cl í nica (infibioc), buenos aires c1113aad, Argentina 3 divided ó n cirug í a, hospital fern á ndez, buenos aires c1425agp, Argentine; lopezdeysi20@gmail.com(立法法令); lausvidlerlopez@gmail.com(l.s.l.)4 Centro Privato de cirugi a y coloprochologe i,阿根廷布宜诺斯艾利斯C1060ABB; painscarena@gmail.com(D.C。); lucianarosa@gmail.com(L.L.R.) 5布宜诺斯艾利斯大学,塞西亚斯兽医,萨鲁德·普里卡,布宜诺斯艾利斯C1427CWO,阿根廷; odegre@fvet.uba.ar 6 Uppsala大学医院临床微生物学系,瑞典751 85; bjorn.hermann@medsci.uu.se 7临床微生物学分隔,乌普萨拉大学医学科学系,751 85 Uppsala,瑞典 * corpspondence:mrfchlam@ffyb.uba.uba.ar.ar.ar5布宜诺斯艾利斯大学,塞西亚斯兽医,萨鲁德·普里卡,布宜诺斯艾利斯C1427CWO,阿根廷; odegre@fvet.uba.ar 6 Uppsala大学医院临床微生物学系,瑞典751 85; bjorn.hermann@medsci.uu.se 7临床微生物学分隔,乌普萨拉大学医学科学系,751 85 Uppsala,瑞典 * corpspondence:mrfchlam@ffyb.uba.uba.ar.ar.ar