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World File Search System切酶
使用限制性核酸内切酶，保护，选择和扩增来识别微生物转录因子的首选DNA结合序列
基因表达的抽象调节是细胞生物学的重要组成部分。转录因子蛋白经常结合旋转启动位点上游的调节DNA序列，以促进RNA聚合酶的激活或抑制。研究实验室已经专门用于了解转录因子的转录调节网络，因为这些受调节的基因为宿主生物的生物学提供了重要的见解。各种体内和体外测定已被开发，以阐明转录调节网络。包括SELEX-SEQ和CHIP-SEQ在内的几种测定法捕获了结合DNA结合的转录因子，以确定首选的DNA结合序列，然后可以将其映射到宿主有机体的基因组以鉴定候选调节基因。在此方案中，我们描述了一种使用限制性核酸内切酶，保护，选择和放大式（REPSA）来确定兴趣转换因子的DNA结合序列的替代性迭代选择方法。与基于传统抗体的捕获方法相反，REPSA通过用IIS型限制性核酸内切酶来挑战结合反应来选择转录因子结合的DNA序列。耐裂解的DNA物种通过PCR扩增，然后用作下一轮REPSA的输入。重复此过程，直到通过凝胶电泳观察到受保护的DNA物种，这表明成功的REPSA实验。随后的REPSA选择的DNA的高通量测序以及伴随基序发现的epsa选择的DNA，可以使用扫描分析来确定转录因子共识结合序列和潜在的调节基因，并在确定生物体的转录调节网络方面提供了关键的第一个步骤。
人原代T细胞基因组编辑
（ A ）使用ImmunoCult™ 人 CD3 / CD28 或 CD3 / CD28 / CD2 T 细胞激活活化剂人 T 2 - 3 天后，通过将 TCR αβ 和 CD3 受体与抗体结合，进行流式分析，来测定 TRAC 的敲除效率。每个条件的每个数据点代表一个单独的供体；n = 4 - 8 个供体。每一列线路表示干±标准差。（ B ） ）首先人T细胞被ImmunoCult™人CD3 / CD28 T细胞剂激活活化剂3天，然后进行电转。在电转48小时后，通过ArciTect™ T7循环内切酶I试剂盒测定基因组编辑（切割）的效率。 RNP 电转：+ RNP 。（ C - D ）被ImmunoCult™ 人 CD3 / CD28 T 细细胞激活剂活化 3 天的人 T 细胞经（ C ）模拟电转（无 RNP ）和（ D ） RNP 电转后 TCR αβ 和 CD3 的流式分析点图。（ E ）被ImmunoCult™ 人 CD3 / CD28 T 细胞激活剂活化 3 天的人 T细胞的CD4和CD8流式分析点图。
成簇的规律间隔短回文重复序列 (CRISPR) 相关 9 (CRISPR/Cas9) 酶的三种工程化 HNH 内切酶 Lys-to-Ala 突变体动力学降低的结构基础
许多细菌对入侵的噬菌体或质粒具有 II 型免疫力，称为成簇的规律间隔短回文重复序列 (CRISPR)/CRISPR 相关 9 (Cas9) 系统，用于检测和降解外来 DNA 序列。Cas9 蛋白有两个负责双链断裂的核酸内切酶（分别称为 HNH 结构域，用于切割 DNA 双链的靶链，RuvC 结构域用于切割非靶链）和一个单向导 RNA (sgRNA) 结合结构域，其中 RNA 和靶 DNA 链是碱基配对的。三种工程化的单 Lys-to-Ala HNH 突变体（K810A、K848A 和 K855A）表现出对靶 DNA 链切割的增强的底物特异性。我们在本研究中报告，在野生型酶中，在 1mM EDTA 存在下，与催化位点相邻的含 Y836 环（包括 E827-D837）内的 D835、Y836 和 D837 具有无法表征的加宽 1 H 15 N NMR 共振，而环中其余残基具有不同程度的加宽 NMR 光谱。我们发现，野生型酶中的该环在分子动力学 (MD) 模拟期间表现出三种不同的构象，而三个 Lys-to-Ala 突变体
切萨皮克遗产
武装部队部，SIRPA Marine，Balard 地块东楼 F，60 bd du Général-Martial-Valin CS 21623 – 75509 Paris Cedex 15 网站：www.colsbleus.fr 出版总监：CV Sébastien Perruchio，海军通讯主任 出版副总监：CF Adeline Duc 编辑总监：CC Letournel 主编：Virginie de Galzain 编辑委员会：CV Nicolas Faure、LV Barbara Lopez 编辑秘书：Philippe Brichaut 编辑：Jean-Marie Kowalski、Jean-Pierre Decourt EV1(R)、ASP Colombe Prache 设计和制作：Dominique Jaquard 计算机图形：Dominique Jaquard 致谢：凡尔赛宫和特里亚农宫；葛连拿 (Glénat) 版本；让-伊夫·德利特；贡比涅城堡和布莱朗库尔城堡的国家博物馆和庄园；巴黎和布雷斯特国家海事博物馆；欧空局；美国海军历史和遗产司令部；历史辩护服务； Indivision Landowski 封面：©B.Papin/MN 第 4 个封面：照片：©S.Congui/MN，创作：©M.Roussel/SIRPA/MN 印刷：法律和行政信息总局 (DILA)，26, rue Desaix, 75015 Paris 订阅：Rachida Le Roux – 电话。 ：01 49 60 52 44 电子邮件：déplacement-abonnement@ecpad.fr 广告、分类广告：ECPAD，商业中心 - 2 至 8, route du Fort, 94205 Ivry-sur-Seine Cedex - Karim Belguedour - 电话。 ：01 49 60 59 47 电子邮件：regie-publicitaire@ecpad.fr – 不退还手稿，照片可根据要求退还。对于文章的复制，无论通过何种媒介，请咨询编辑部联合委员会：n° 0211 B 05692/28/02/2011 ISBN：00 10 18 34 法定存放：出版时。
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切斯特县经济
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