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World File Search System利什曼病
以 CRISPR-Cas9 为主要靶点构建 PX-LmGP63，用于利什曼原虫 GP63 基因敲除及利什曼化
背景：利什曼原虫是一种细胞内原生动物寄生虫，它使用复杂的方法破坏哺乳动物宿主巨噬细胞的先天免疫反应。已发现许多因素会影响寄生虫致病性的严重程度。其中一个因素是 GP63，它是一组破坏宿主细胞信号传导机制的金属蛋白酶。目的：本研究旨在通过 CRISPR-Cas9 构建 PX-LMGP63 载体，用于利什曼原虫中的 GP63 基因敲除，作为一种潜在的利什曼化方法。方法：根据 GP63 的 mRNA 序列设计一对 gRNA。然后将退火引物克隆到线性化载体 PX-459 中并转化到 DH5 A 感受态细胞中。然后，使用基因特异性和载体引物进行 PCR 检测以确认菌落。此外，对构建的质粒进行测序以进行最终确认。结果：PCR证实了预期大小为270的条带。质粒测序显示gRNA789已连接到载体上。构建的结构被命名为PX-LMGP63，下一步将转染到前鞭毛体细胞中。结论：由于皮肤利什曼病在大多数国家流行并成为公共卫生问题，并且缺乏有效的利什曼病疫苗，使用CRISPR方法可能使未来获得有效的疫苗成为可能。
长期造血干细胞触发利什曼原虫寄生虫
应对静止和治疗后复发的挑战在微生物学领域中至关重要。这项研究表明，在人和小鼠骨髓干细胞中估计有2-3个分裂后，Infantum和Donovani L. donovani寄生虫迅速静止。有趣的是，在巨噬细胞中未观察到这种行为，这是利什曼原虫寄生虫的主要宿主细胞。静止和非循环代谢状态的转录比较证实了基因表达的总体下降是静止的标志。静止的amastigotes显示出随着遗传改变而快速进化适应反应的尺寸和迹象。我们的研究进一步证明了这种静止状态会显着增强对治疗的抗药性。此外，通过静止的过渡与沙蝇的传播高度兼容，并增加了寄生虫感染细胞的潜力。总的来说，这项工作将骨髓中的干细胞确定为利什曼原虫静止的利基市场，对抗寄生虫治疗和毒力性状的获取具有重要意义。
利什曼尼亚人：治疗发展的策略 - 寄生虫
摘要 - 利什曼尼亚人是向媒介传播的寄生虫疾病，对全球超过10亿人构成威胁。寄生虫的寄生虫靶细胞（例如巨噬细胞）复制。该疾病以各种形式表现出来，从局部皮肤利什曼病到威胁生命的内脏形式，在95％的情况下，这是致命的。当前的治疗依赖于越来越遇到抗药性的有毒和昂贵药物的侵入性给药。因此，必须为该疾病找到替代治疗方法。本文献综述的重点是替代治疗的最新进展，并旨在提出旨在解决当前局限性的各种策略，包括成本，毒性，脱靶效应，管理路线以及耐药性的出现。从概述现有批准的治疗方法及其特定限制开始，我们将治疗开发策略分为五个关键部分：（i）使用现有批准的治疗方法的组合疗法来增强效率并降低抵抗力； （ii）纳米颗粒制剂，可以将目标递送到感染的器官和提高的治疗效率上； （iii）药物重新定位，该策略已经促进了当前一半以上的治疗化合物的批准； （iv）与标准化学疗法结合使用的免疫调节，以增强治疗效率和较低的复发率； （v）通过低毒性，免疫调节特性和有效的抗寄生虫作用，通过结合了低毒性，表现出有希望的体外结果。总而言之，这篇综述概述了治疗开发的当前策略，在承认其局限性的同时，强调了它们对常规疗法的优势。
查尔酮将 cTXNPx 鉴定为潜在的抗利什曼病药物靶点
目前的药物治疗由于毒性、低疗效和耐药性而失败；利什曼病是全球面临的重大健康挑战，迫切需要新的经过验证的药物靶点。受天然查尔酮 2',6'-二羟基-4'-甲氧基查尔酮 (DMC) 活性的启发，硝基类似物 3-硝基-2',4',6'-三甲氧基查尔酮 (NAT22, 1c) 被确定为强效的广谱抗利什曼原虫药物先导。结构修饰提供了一种含炔烃的化学探针，该探针标记了寄生虫内的一种蛋白质，该蛋白质被证实为胞浆锥虫过氧化物酶 (cTXNPx)。至关重要的是，在前鞭毛体和巨噬细胞内无鞭毛体生命形式中都观察到了标记，没有证据表明宿主巨噬细胞具有毒性。查尔酮在寄生虫中孵育会导致 ROS 积累和寄生虫死亡。通过 CRISPR-Cas9 删除 cTXNPx 会显著影响寄生虫表型，并降低查尔酮类似物的抗利什曼原虫活性。与计算机模拟 cTXNPx 同源性模型的分子对接研究表明，查尔酮能够结合假定的活性位点，阻碍其接近关键的半胱氨酸残基。总之，这项研究将 cTXNPx 确定为抗利什曼原虫查尔酮的重要靶点。
接种莱蒂芬特疫苗，一种新型犬利什曼病 - ...
疫苗接种可能会引发抗体的产生，而这种抗体可以通过标准诊断技术检测到。这一事实可能无法实现感染动物与疫苗接种动物的鉴别 (DIVA) (1)。DIVA 疫苗可以对易感动物群体进行大规模疫苗接种，而不会影响恢复期个体的血清学鉴定。在犬利什曼病中，可以通过标准诊断技术检测到对疫苗的抗体反应，从而无法区分接种疫苗的狗和自然感染的狗。此外，接种疫苗的狗体内的抗利什曼抗体水平可能在数月内都能检测到 (2, 3)。最近，欧盟委员会已授予 LetiFend ® 上市许可。该疫苗的有效成分是 Protein Q，这是一种由 L. infantum 细胞内蛋白的五个抗原片段基因融合形成的重组蛋白 (3)。LetiFend ® 适用于 6 个月以上未感染狗的主动免疫，以降低接触 L. infantum 后发生活动性感染和/或临床疾病的风险。 LetiFend ® 的疫苗接种疗程为一次注射，随后每年进行加强注射。本研究旨在评估 LetiFend ® 疫苗接种对多种 L. infantum 血清学诊断测试的潜在干扰。
蛋白酶抑制剂是针对内脏利什曼病的潜在药物：激发未来研究的评论
更加危险。是由淋巴器官（主要是脾脏，骨髓和肝脏）感染的血细胞引起的，如果未治疗，通常是致命的。HEP-拟南芥，贫血，发烧，卡氏症和白细胞减少症都是VL的症状。 利什曼病的长期课程可能需要数月甚至数年的发展。 在亚洲，印度和中东国家中发现的主要是利什曼原虫物种会导致VL；位于南美洲和中美洲的利什曼原虫物种会引起皮肤，内脏和粘膜皮肤病。 在骨髓的血细胞，网状内皮结构和皮肤中，原生动物的尺寸非常小，使诊断有利什 - 素质症具有挑战性。 2在疾病的更严重类型中，疗法长期以来一直具有挑战性，耐药性的出现使其更具挑战性。 没有有效的利什曼病疫苗接种。 因此，本文审查了利什曼病的背景，当前情况和治疗以及药物靶位部位GP63以及来自海洋放线杆菌的蛋白酶抑制剂，用于针对这些GP63分子的药物开发。HEP-拟南芥，贫血，发烧，卡氏症和白细胞减少症都是VL的症状。利什曼病的长期课程可能需要数月甚至数年的发展。在亚洲，印度和中东国家中发现的主要是利什曼原虫物种会导致VL；位于南美洲和中美洲的利什曼原虫物种会引起皮肤，内脏和粘膜皮肤病。在骨髓的血细胞，网状内皮结构和皮肤中，原生动物的尺寸非常小，使诊断有利什 - 素质症具有挑战性。2在疾病的更严重类型中，疗法长期以来一直具有挑战性，耐药性的出现使其更具挑战性。没有有效的利什曼病疫苗接种。因此，本文审查了利什曼病的背景，当前情况和治疗以及药物靶位部位GP63以及来自海洋放线杆菌的蛋白酶抑制剂，用于针对这些GP63分子的药物开发。
使用 CRISPR 基因编辑技术开发的第二代利什曼病疫苗，该疫苗含有无标记减毒利什曼原虫株
。CC-BY-NC-ND 4.0 国际许可，根据 未经同行评审认证）是作者/资助者，他已授予 bioRxiv 永久展示预印本的许可。它是 由 此预印本的版权持有者（此版本于 2020 年 5 月 5 日发布。 ; https://doi.org/10.1101/2020.05.04.077115 doi: bioRxiv preprint
狼蛛利什曼原虫作为潜在的活疫苗合剂......
利什曼病是一种被忽视的媒介传播疾病，由通过感染的沙蝇叮咬传播的利什曼原虫引起。目前的治疗方法有限，部分原因是它们成本高昂且副作用大，而且目前还没有可用的人类疫苗。沙蝇唾液已被研究作为抗利什曼原虫疫苗的潜在应用。唾液蛋白 PpSP15 是第一个针对 L. major 的保护性疫苗候选物。此外，PsSP9 已被引入作为针对 L. tropica 的高免疫原性唾液蛋白。在此，我们旨在开发一种有效的多价活疫苗来控制由两种主要物种 L. major 和 L. tropica 引起的皮肤利什曼病。因此，使用 T2A 接头将上述两种唾液蛋白整合到 L. tarentolae 基因组内作为安全的活载体。然后，在用 CpG 预先处理的 BALB/c 小鼠中评估了共表达 PpSP15 和 PsSP9 的重组 L. tarentolae 的免疫原性和保护作用，以对抗 L. major 和 L. tropica。在感染前后的不同时间点进行细胞因子测定、寄生虫负担和抗体评估后，在接种共表达 PpSP15 和 PsSP9 的重组 L. tarentolae 的小鼠中获得了有希望的保护性 Th1 免疫力。这是首次证明基于不同唾液蛋白组合的安全活疫苗对两种不同利什曼原虫感染攻击的效力的研究。
切割碎石
（g）在“有关排除有组织犯罪的事项”的承诺书中存在虚假内容，或发生违反承诺的情况时。 （h）中标人提交未经政府批准的同等产品时。 （4）合同的准备 中标人被选定为中标人后，应立即准备合同。此外，标准驻军合同还将包括“销售合同条款”、“有关勾结和其他非法活动的特殊条款”和“有关排除有组织犯罪的特殊条款”。 （5）中标人的确定方式 投标总额在中队确定的估价限额内的投标人为中标人。如果有两个或两个以上的最低出价者有资格中标，则将通过抽签来确定中标者。 在确定中标结果时，中标金额为投标文件中载明的金额加上按照消费税法规定的消费税率（10%）计算的消费税金额（如果该金额有不足1日元的小数部分，则小数部分四舍五入）。因此，无论投标人是消费税的应税商业实体还是免税商业实体，投标人都必须在投标文件中载明相当于估算金额110/100的金额。 （6）其他 A.双方当事人签字、盖章后，本合同即成立。 （一）投标人参加投标时须提交资格审查结果通知书复印件。 如果您代表其他人竞标，则必须提交授权委托书。 E. 允许通过邮寄方式投标。此时，请将信封双层包装，在内信封上清楚注明“内附碎石投标表”，并附上资格审查结果通知书复印件，在投标日前一天下午5点之前通过挂号信（简易挂号信也可以）将信封寄送至北千岁警备区第323会计部队。此时请您致电负责人确认到达情况。 将立即进行重新招标。然而，如果已经通过邮寄方式投标，则重新投标将另行规定。 请在投标表格下方空白处写明：“本公司（若为本人或个人）或本团体（若为团体）接受《投标及合同指南》及《标准合同等》的合同条款，参与投标。”此外，我们承诺遵守《招标及承包指南》中关于排除黑社会组织参与的条款。 “承诺并声明这一点。 若您希望当天参加竞标，您必须在竞标日前一天下午 5 点之前联系北千岁警备队第 323 会计部队。 Q 如果投标的是等效产品，则必须向合同官员提交等效产品确定申请，并且必须在投标日期前一天下午 1:00 之前获得批准（周六、周日和节假日除外）。 投标相关咨询联系方式：日本陆上自卫队北千岁警备队第 323 计画中队承包课（联系人：谷） 电话：0123-23-2106（分机 5341） （7）公告发布地点及时间：发布地点：北方陆军网站：http://www.mod.go.jp/gsdf/nae/fin/index.html 发布时间：2024 年 7 月 16 日（星期二）至 2024 年 7 月 26 日（星期五）
切割碎石
我将在同意“标准合同等”的合同条款和条件后提交投标。此外，我们承诺遵守《招标及承包指南》中关于排除黑社会组织参与的条款。 “ （4）合同的准备 中标决定后，中标者应立即按照日本陆上自卫队《标准驻军合同》的格式准备合同。 （5）中标人的确定方式 投标总额在中队确定的估价限额内的投标人为中标人。如果有两名或两名以上的最低出价者有资格成为中标人，则以抽签的方式确定中标人。 （6）其他 A.双方当事人签字、盖章后，本合同即成立。 （i）在确定中标人时，中标价格为投标文件中所载金额加上该金额的 10%（如果该金额有小于 1 日元的尾数，则该尾数将被四舍五入）。因此，无论投标人是消费税的应税企业还是免税企业，投标人都必须在投标文件中载明相当于合同估算金额 110/100 的金额。 C)投标人须提交资格审查结果通知书复印件。 如果您代表其他人竞标，则必须提交授权委托书。 如果您参与投标，您将需要在指定位置查看“投标和合同指南”，并在投标文件中输入所需信息。 为了防止冠状病毒传播，我们建议您通过邮寄方式提交出价。此时，请在信封上清楚地写上“投标标的”，并附上资格审查结果通知书的副本，并确保在 2024 年 6 月 21 日星期五下午 3:00 之前到达日本陆上自卫队北惠庭支队第 323 会计中队承包组。届时，请致电负责人确认信封已收到。 如果您希望当天参加，请于 2024 年 6 月 21 日星期五下午 5 点之前联系北惠庭驻地北惠庭支队第 323 会计部队承包组。 第二次投标将于2024年6月28日星期五下午1点30分，与前款同样的方式进行。因此，投标文件必须在前一天下午5点之前到达日本陆上自卫队北惠庭警备队第323会计中队北惠庭支队。 Q 请在投标书下方空白处写明：“响应上述公告，我公司（若为本人或个人）或我机构（若为团体）接受《投标及合同指南》及《标准合同等》的合同条款后，参与投标。此外，我们承诺遵守《招标及承包指南》中关于排除黑社会组织参与的条款。 “ （7）投标、标准等咨询窗口：日本陆上自卫队北惠庭警备队第 323 会计大队北惠庭支队承包科（联系人：浦岛）电话：0123-32-2101（内线 348）传真：0123-33-1472（直线） （8）公布发布地点及时间： A.发布地点：北部陆军会计大队网站 http://www.mod.go.jp/gsdf.nae/fin/ B.发布时间：2024 年 6 月 11 日（星期二）至 2024 年 6 月 24 日（星期一）