A.摘要CRISPR/CAS9基因编辑技术已使用形成复杂的两个关键成分彻底改变了基因组修饰领域:Cas9核酸内切酶和一个将Cas9引导到基因组DNA中特定目标位点的单个指南RNA(SGRNA)。Lenti-X CRISPR/CAS9系统(CAT。编号632629)是一个完整的系统,用于产生高产率的慢跑病毒,编码CRISPR/CAS9介导的基因组编辑所需的成分[即单个指导RNA(SGRNA)和Cas9核酸酶],以将很难转发的哺乳动物细胞递送到哺乳动物细胞中。该系统还包含必要的控制和足够的试剂,用于构建10种不同靶(SGRNA)表达质粒。PLVX-HYG-SGRNA1矢量系统提供了其他线性化质粒,连接成分和Stellar™胜任的细胞。
1在这些情况下,我们在悬浮在液体中且实际上并未溶解的细菌或哺乳动物细胞等项目中使用术语“浓度”和“密度”互换。在生物环境中可以接受此术语。化学家可能会避免术语“浓度”来指代悬浮细胞。
纳米生HT CBB试剂盒(102-762-700; 96 rxn)•最多可用于200μl人/哺乳动物血液,非哺乳动物动物血液1,培养的细胞和细菌•预期的HMW DNA产量:血液和培养的哺乳动物细胞和2-10μg的3-15μg
扩散 不同的动物细胞及其适应性 介绍: 更多关于光合作用以及不同因素如何影响其速率的知识 不同因素如何影响植物对水的吸收速率 光合作用的反应物和产物如何运输 更专业的细胞:栅栏细胞、根毛细胞、木质部细胞和韧皮部
摘要CRISPR/CAS9系统最初是从原核生物适应性免疫系统中得出的,已作为有效的基因组编辑工具开发。它可以通过可编程SGRNA与靶DNA的特定结合对染色体DNA进行精确的基因操纵,并且具有内切核酸酶活性的CAS9蛋白将在特定位点减少双链断裂。然而,CAS9是哺乳动物细胞中的一种异物,与引入哺乳动物细胞有关的潜在风险尚不完全了解。在这项研究中,我们对HEK293T细胞中的链球菌CAS9(Spycas9)进行了下拉和质谱分析(MS)分析,并表明大多数Cas9-相关蛋白质由MS鉴定的大多数相关蛋白在核中局部局部。有趣的是,我们进一步发现CAS9蛋白包含编码核仁拘留信号(NODS)的序列。与野生型(WT)Cas9相比,CAS9的点突变变体(MCAS9)较小
摘要遗传相互作用长期以来已经为我们对哺乳动物细胞中DNA损伤的配位蛋白和途径的理解提供了信息,但是对该系统尚未实现的遗传网络的系统询问尚未实现。朝向这个目标,我们测量了与PARP抑制剂(PARPI)响应有关的基因之间的147,153个成对相互作用。在这种量表上评估遗传相互作用,在有或没有暴露于PARPI的情况下,揭示了在正常生长过程中维持基因组稳定性的途径和复合物的等级组织,并在正常生长过程中定义的变化,这些变化是由于PARPI的细胞毒性剂量导致的DNA病变而发生的。我们发现了DNA修复基因之间的意外关系,包括最小化的AUNIP和BRCA1-A复杂基因之间的上下文特异性缓冲相互作用。因此,我们的工作为绘制哺乳动物细胞中差异遗传相互作用的基础建立了基础,并为将来的DNA修复和PARP抑制剂提供了全面的资源。