使用最佳接种物稀释对照培养基的微生物测试:胰蛋白胨大豆琼脂、富含 5% v/v 马血的哥伦比亚血琼脂基质、富含 5% v/v 巧克力马血的哥伦比亚血琼脂基质或 Sabouraud 葡萄糖琼脂(视情况而定)在 37±2°C 下孵育 18 小时后的反应培养基受到 10-100 个菌落形成单位的攻击化脓性链球菌 ATCC® 19615 浑浊生长肺炎链球菌 ATCC® 6303 浑浊生长肺炎链球菌 ATCC® 6305 浑浊生长粪肠球菌 ATCC® 19433 浑浊生长铜绿假单胞菌 ATCC® 27853 浑浊生长可见生长代表满意结果。在厌氧条件下 37 ± 2°C 培养 18 小时后的反应(有关详细信息,请参阅 Oxoid 手册 - 大气生成系统) 培养基中出现 10-100 个菌落形成单位 肺炎链球菌 ATCC® 6305 浑浊生长 可见生长代表满意的结果。 在 37 ± 2°C 培养 48 小时后的反应 培养基中出现 10-100 个菌落形成单位 白色念珠菌 ATCC® 10231 浑浊生长 可见生长代表满意的结果。
在肿瘤研究领域的引言中,威廉·库利(William Cooley)是第一个证明微生物产物(特异性化脓性链球菌和铜质马斯科斯链球菌)抗肿瘤作用的人。1肠道微生物群代表一个由各种共生微生物组成的生态系统,这些微生物代谢了残留食物,肠道分泌物和消化汁和脱落结肠细胞。在大肠中,蛋白水解发酵随着饮食蛋白的高摄入而增加,从而产生诸如酚类化合物,胺,氨,N-硝基化合物和吲哚的物质产生。这些化合物可以对上皮细胞的分化和增殖产生致癌作用。2,3微生物群还影响许多人类基因的表达。例如,树突状细胞和巨噬细胞中的双歧杆菌,乳酸菌和大肠杆菌的特异性菌株会影响粘蛋白基因的表达,Toll样受体(TLR)信号传导,以及caspase表达,从而调节免疫活性和凋亡。共生细菌与免疫细胞之间的相互作用在促炎基因,原始基因,抗炎基因和肿瘤抑制基因之间建立了平衡。3-5 an
在细菌中,CRISPR/Cas 系统作为抵御入侵病毒的免疫防御。 CRISPR/Cas 帮助细菌“记住”过去的病毒感染,并在发生新的病毒感染时作为一种防御策略。简单来说,就是病毒基因组的片段整合到细菌基因组中,使得细菌在反复感染病毒的过程中能够识别并切割病毒基因组。该细菌系统已被广泛研究并适用于实验室中的分子生物学应用。 CRISPR/Cas系统从其原有的单细胞生物功能中分离出来,用于细胞培养和多细胞生物中的应用。 CRISPR/Cas 系统天然存在于许多不同的细菌属中,每种细菌属都有自己的结构和酶特性。科学家正在利用这一点进一步开发 CRISPR/Cas 作为一种分子生物学技术,以便可以专门到达和修改越来越多的基因组区域。基因组编辑中最广泛使用的 CRISPR/Cas 系统是来自化脓性链球菌的 CRISPR/Cas9。然而,其他 CRISPR/Cas 变体如 CRISPR/Cpf1 也用于扩展基因组编辑或 CRISPR/Cas13 修饰 RNA 的应用可能性。
白介素 (IL)-1 细胞因子家族是多种免疫反应的中心调节因子。它由几种细胞因子组成,包括属于 IL-1、IL-36 和 IL-18 亚家族以及 IL-33 的细胞因子。IL-1 家族主要在协调先天免疫反应中发挥作用,但也参与适应性免疫。在发现 IL-1 信号失调是几种单基因自身炎症疾病的发病机制的基础之后,人们对 IL-1 家族的兴趣日益浓厚,这些疾病的特征是皮肤和其他器官的无菌性炎症。这也增加了对先天免疫和 IL-1 家族在多基因自身炎症性皮肤病(例如中性粒细胞性皮肤病)以及一些最常见的慢性炎症性皮肤病(例如牛皮癣和化脓性汗腺炎)中的作用的了解。已经开发出几种治疗药物来抑制 IL-1 家族成员及其信号通路。这些药物已在几种慢性炎症性皮肤病中显示出治疗效果。本综述的目的是详细描述 IL-1、IL-33、IL-36 和 IL-18 通路病理失调在皮肤病中的后果,并提供针对 IL-1 家族细胞因子信号传导的治疗策略的前瞻性更新。
白介素 (IL)-1 细胞因子家族是多种免疫反应的中心调节因子。它由几种细胞因子组成,包括属于 IL-1、IL-36 和 IL-18 亚家族以及 IL-33 的细胞因子。IL-1 家族主要在协调先天免疫反应中发挥作用,但也参与适应性免疫。在发现 IL-1 信号失调是几种单基因自身炎症疾病的发病机制的基础之后,人们对 IL-1 家族的兴趣日益浓厚,这些疾病的特征是皮肤和其他器官的无菌性炎症。这也增加了对先天免疫和 IL-1 家族在多基因自身炎症性皮肤病(例如中性粒细胞性皮肤病)以及一些最常见的慢性炎症性皮肤病(例如牛皮癣和化脓性汗腺炎)中的作用的了解。已经开发出几种治疗药物来抑制 IL-1 家族成员及其信号通路。这些药物已在几种慢性炎症性皮肤病中显示出治疗效果。本综述的目的是详细描述 IL-1、IL-33、IL-36 和 IL-18 通路病理失调在皮肤病中的后果,并提供针对 IL-1 家族细胞因子信号传导的治疗策略的前瞻性更新。
1 伊拉克巴格达中等技术大学健康与医疗技术学院 *通讯作者:Fatima Abdulrahman Dohi 伊拉克巴格达中等技术大学健康与医疗技术学院 文章历史 收到日期:2024 年 12 月 11 日 接受日期:2025 年 1 月 17 日 发表日期:2025 年 1 月 25 日 摘要:车前草叶在传统医学中用于治疗多种疾病;本研究旨在定性研究目标草药中的植物成分,并研究其对从临床样本中分离出的某些类型细菌的抗菌活性。用水/乙醇(1:1)提取植物叶粉。经过对植物成分的定性筛选,粗提取物显示存在几类化学物质,包括皂苷、糖苷、酚、单宁、类固醇、生物碱、黄酮类化合物和萜类化合物。使用纸片扩散法测试了三种浓度的粗提取物对五种细菌(包括革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌)(金黄色葡萄球菌、化脓性链球菌、假单胞菌、变形杆菌属)的抑制作用。三种浓度的粗提取物对所有测试细菌的活性百分比不同。关键词:车前子、抗菌、植物成分、革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌。引言
基于 CRISPR/Cas9 的碱基编辑工具可实现精确的基因组安装,并为基因治疗带来巨大希望,而 Cas9 核酸酶的大尺寸、其对特定原间隔区相邻基序 (PAM) 序列的可靠性以及靶位偏好限制了碱基编辑工具的广泛应用。在这里,我们通过将胞嘧啶脱氨酶与来自 Streptococcus_gordonii_str._Challis_substr._CH1 (ancSgo-BE4) 和 Streptococcus_thermophilus_LMG_18311 (ancSth1a-BE4) 的两个紧凑的密码子优化的 Cas9 直系同源物融合来生成两个胞嘧啶碱基编辑器 (CBE),它们比化脓性链球菌 (SpCas9) 小得多,分别识别 NNAAAG 和 NHGYRAA PAM 序列。这两种 CBE 在胞嘧啶碱基编辑中都表现出高活性、高保真度、不同的编辑窗口和低副产物,并且在哺乳动物细胞中 DNA 和 RNA 脱靶活性极小。此外,在我们测试的靶位点上,这两种编辑器都表现出与两种基于 SpCas9 工程变体(SpCas9-NG 和 SpRY)的 CBE 相当或更高的编辑效率,它们与 ancSgo-BE4 或 ancSth1a-BE4 的 PAM 序列完美匹配。此外,我们通过 ancSgo-BE4 和 ancSth1a-BE4 成功生成了两种在 Ar 基因处带有临床相关突变的小鼠模型,它们在创始小鼠中表现出雄激素不敏感综合征和/或发育致死性。因此,这两种新型 CBE 拓宽了碱基编辑工具包,分别扩大了靶向范围和窗口,以实现有效的基因修饰和应用。
摘要:CRISPR-Cas9技术的出现彻底改变了基础和转化生物医学研究。为了使Cas9核酸酶发挥基因组编辑活性,通常将源自猿猴病毒40(SV40)T抗原的核定位信号(NLS)作为基因融合体安装,以引导细胞内的Cas9蛋白进入细胞核。值得注意的是,先前的研究表明,多个SV40 NLS融合可以提高Cas9衍生的基因组编辑和碱基编辑工具的靶向活性。此外,多NLS融合可以以组成性表达和直接递送Cas9-引导RNA核糖核蛋白(RNP)复合物的形式增加Cas9的细胞内活性。然而,NLS融合与细胞内Cas9活性之间的关系尚不完全清楚,包括活性对NLS融合数量或组织的依赖性。在本研究中,我们构建并纯化了一组在蛋白质的 N 端或 C 端含有 1 至 4 个 NLS 重复序列的化脓性链球菌 Cas9 (SpCas9) 变体,并系统地分析了多 NLS 融合对 SpCas9 RNPs 活性的影响。我们发现,多 NLS 融合可以提高脂质转染或核转染 Cas9 RNPs 的细胞内活性。重要的是,多 NLS 融合可以增强 SpCas9 RNPs 在原代细胞、干细胞/祖细胞和小鼠胚胎中的基因组编辑活性。
正向遗传筛选试图通过系统地扰动遗传元素并观察由此产生的表型来解剖复杂的生物系统。虽然标准筛选方法引入了单个扰动,但多重扰动可提高单靶筛选的性能,并实现用于研究遗传相互作用的组合筛选。当前用于多重扰动的工具与需要嵌入 mRNA 条形码的汇集筛选方法不兼容,包括一些显微镜和单细胞测序方法。在这里,我们报告了 CROPseq-multi 的开发,这是一种受 CROPseq 1 启发的慢病毒系统,用于多重化脓性链球菌 (Sp) Cas9 扰动和嵌入 mRNA 条形码。CROPseq-multi 具有与 CROPseq 相同的每引导活性和较低的慢病毒重组频率。 CROPseq-multi 与富集筛选方法和光学池筛选兼容,并可扩展到具有单细胞测序读数的筛选。对于光学池筛选,优化和多路复用的原位检测方案可将条形码检测效率提高 10 倍,能够检测重组事件,并将解码效率提高 3 倍(相对于 CROPseq)。CROPseq-multi 是一种广泛适用的多路复用解决方案,适用于各种基于 SpCas9 的遗传筛选方法。
*根据需要进行调整和 /或补充,以满足性能标准方向,将45.3 g粉末悬浮在1升蒸馏水中,并加入10毫升甘油。将其烧开并分配到合适的容器中。在121°C的高压釜中灭菌15分钟。描述锡酰胺琼脂是基于铜绿假单胞菌菌株对季铵化合物(QAC)的耐药性。用肉基三乙基氨基氨溴化物A以1G/L的浓度为1g,但非常贫穷和缓慢。0,2-0,3 g/L的抑制剂浓度似乎不会影响化脓性物种的生存能力。,但它确实抑制了伴随的细菌,包括革兰氏阳性和革兰氏阴性生物。可能在抑制浓度较低的抑制浓度下形成的其他假单胞菌也受到抑制。在30-35°C下孵育18-72小时,PS存在着重要的优势。铜绿可对任何其他抗性微生物都显着,建议在42°C下进行第一个隔离,在48小时时延长孵育,因为在这些情况下,抑制其他微生物几乎是总的。技术根据当前的国家或国际标准,已建立和测试的协议或根据每个实验室建立和接受的程序进行。质量控制