samantha rossano,samantha.rossano@yale.edu。作者贡献SR收集并分析了PET数据,完成了Western印迹和分析,并准备了手稿; TT监督Western印迹和分析以及手稿准备; EB收集并重建宠物数据; IL分析了宠物数据; KF进行了宠物成像和数据收集; NN,JR,SL,YY,ZF和HH开发,合成和宠物示踪剂的QC; DK合成宠物示踪剂; HB为研究设计做出了贡献;船尾确定和分配的动物,进行了所有监测和成像,包括超声和PET/CT,数据收集,进行了所有胎儿组织收集,有助于研究设计和手稿准备; SG分析了PET数据,有助于研究设计和手稿准备; REC为研究设计,进行了PET实验,数据分析和手稿准备。
图6用于尿β2-微球蛋白结合珠的免疫印迹,该珠子用抗β2-微球蛋白抗体固定的铜离子。Naito等人描述了用铜离子固定的珠子的制备。[26]。用磷酸盐缓冲盐水稀释10倍的尿素的二十微升珠子(PBS:150 mM NaCl,20 mM磷酸钠; pH 7.2)。将混合物在4°C旋转30分钟,然后在4°C下以16,000×g离心5分钟。颗粒珠3次。铜结合蛋白从珠子中释放出来,由十二烷基硫酸钠变性,然后受到十二烷基硫酸钠 - 聚丙烯酰胺凝胶电泳的影响,然后用抗-β2-微球蛋白抗体进行免疫印迹。箭头指示在尿素样品中检测到的三种不同类型的糖基化β2-微球蛋白。m表示标记蛋白。
图S2。 通过蛋白质印迹评估的GADD45αshRNA的沉默效率。 gADD45α蛋白表达水平在(a)MHCC -97H和(b)用NC和三个靶向GADD45α的SHRNA后的HUH7细胞中。 基于GADD45α蛋白的表达,SH2的沉默是最重要的,用于随后的实验。 数据表示为平均值±SD(n = 3)。 ** p <0.01。 GADD45α,生长停滞和DNA损伤诱导α; NC,阴性对照; SH,短发夹。图S2。通过蛋白质印迹评估的GADD45αshRNA的沉默效率。gADD45α蛋白表达水平在(a)MHCC -97H和(b)用NC和三个靶向GADD45α的SHRNA后的HUH7细胞中。基于GADD45α蛋白的表达,SH2的沉默是最重要的,用于随后的实验。数据表示为平均值±SD(n = 3)。** p <0.01。GADD45α,生长停滞和DNA损伤诱导α; NC,阴性对照; SH,短发夹。
伦敦城市大学数学神经科学与心理学中心和心理学系,伦敦 EC1V 0HB,英国 pinotsis@mit.edu 关键词:记忆印迹;神经集合;工作记忆;协同学;预测编码;自动编码器;有效连接 致谢。这项工作得到了 UKRI ES/T01279X/1、海军办公室的支持
近 70 年前,卡尔·拉什利 (Karl Lashley) 开始寻找印迹。此后,人们学到了很多东西,但分歧依然存在。在当代学习和记忆的神经生物学中,有两种截然不同的概念在竞争:联想/联结 (A/C) 概念和计算/表征 (C/R) 概念。这两种理论都建立在这样的信念之上:心智是从物质大脑的属性和过程产生的。这些理论的不同之处在于它们对记忆的神经生物学基础是什么以及它在大脑中的位置的描述。记忆的 A/C 理论强调需要将记忆认知与记忆印迹区分开来,并假定记忆认知是通过印迹回路路由的模式化神经活动的一种新兴属性。在这个模型中,学习重新组织突触关联强度以指导未来的神经活动。重要的是,本文所提倡的 A/C 理论认为突触变化不是象征性的,尽管通常是必需的,但对于记忆认知来说并不够。相反,突触变化提供了恢复神经活动符号模式的能力和蓝图。与假设记忆出现在电路层面的 A/C 理论不同,C/R 概念表明记忆表现在细胞内分子结构的层面。在 C/R 理论中,这些细胞内结构传递信息,其特性与大脑计算利用读/写存储器的观点相一致,功能类似于计算机中的读/写存储器。新的研究激发了双方的热情,并强调了进行新讨论的必要性。本文介绍了这两种理论、每种理论尚未解决的关键问题以及几种潜在的发展路径。
血清、EDTA 血浆 Western blot SDS-PAGE 和 Western blot/ 版本 003,Western blot - 检测抗炭疽杆菌和相关炭疽病原体的抗体:SDS-PAGE 和印迹 (第 1 部分)/ 版本 004,Western blot - 检测抗炭疽杆菌和相关炭疽病原体的抗体:免疫反应 (第 2 部分)/ 版本 006
蛋白水解靶向嵌合体 (PROTAC) 是一种很有前途的治疗方式,在癌症治疗中引起了广泛关注。利用 PROTAC 技术,我们使用 Cereblon (CRBN) 和 Von Hippel – Lindau (VHL) E3 配体合成了新型结构修饰的基于 paullone 的 PROTAC。与标准阿霉素相比,PROTAC 23a 显著抑制了 MCF-7 乳腺癌细胞 (IC 50 = 0.10 µ M) 和 A549 肺癌细胞 (IC 50 = 0.12 µ M) 的生长。通过 MCF-7 细胞中的免疫印迹试验评估了这些新型 PROTAC 的降解效率。蛋白质印迹结果显示,PROTAC 23a 在浓度范围为 5.5 至 16 µ M 时降解细胞周期蛋白依赖性激酶 1 (CDK1),从而产生抗癌作用。分子对接用于确认活性 PROTAC 23a 对 CDK1 结合位点的亲和力。我们的研究结果表明了基于 paullone 的 PROTAC 作为 CDK1 降解剂的重要性,可能利用其来识别更有效的乳腺癌和肺癌临床治疗候选药物。
1 山东大学第二医院消化内科,山东省济南市 250033;2 山东省淄博市沂源县人民医院科教科,山东省淄博市 256100;3 山东大学齐鲁医院(青岛)超声科,山东省青岛市 256600;4 山东大学第二医院健康管理科,山东省济南市 250033 本研究的主要目的是检验植物三萜桦木酸对抗胃癌的作用及其潜在机制。通过 MTT 测定和克隆形成试验评估对照细胞和桦木酸处理细胞的细胞活力。采用透射电子显微镜和蛋白质印迹法研究桦木酸对自噬的刺激作用。通过蛋白质印迹法监测 ERK/MEK 信号通路。通过Transwell小室实验研究了SGC-7901细胞的迁移和侵袭。研究结果表明,与正常胃GES-1细胞相比,白桦脂酸对胃癌SGC-7901细胞具有显著的细胞毒性。白桦脂酸的细胞毒性是由于其在靶细胞中具有自噬刺激倾向。Western印迹法的数据支持自噬细胞死亡,显示LC3-II增强,LC3-I和p62表达降低。此外,观察到白桦脂酸阻断SGC-7901细胞中的ERK/MEK信号通路,这与磷酸化ERK和MEK蛋白表达水平下降有关。最后,Transwell小室实验表明,白桦脂酸可能降低SGC-7901细胞的迁移和侵袭能力。综上所述,这些结果表明,桦木酸通过诱导自噬、阻断 ERK/MEK 信号传导和抑制迁移和侵袭,表现出显著的抗胃癌作用。因此,桦木酸可能成为胃癌管理和研究中的先导分子。
PAT 逆转录转座因子与其他逆转录因子的不同之处在于它们具有“分裂直接重复”结构,即发现内部 300bp 序列重复,每个因子末端约有一半重复。在带有 Northern 印迹的 Panagrellus redivivus 总 RNA 上检测到约 900nt 的非常丰富的转录本,其起始部分映射到 PAT 因子的优先删除部分。潜在对应的 ORF 编码具有羧基末端半胱氨酸基序的 265 个残基的蛋白质,据信这是逆转录因子中 GAG 蛋白的唯一特征。在 Northern 印迹上还检测到一个更暗淡的 1800nt 长的转录本,它位于第一个 ORF 的稍下游。该区域的预测蛋白质序列带有逆转录酶和 RNaseH 的典型基序,如在逆转录因子的 Pol 基因中发现的。肽基序与来自盘基网柄菌的DIRS-1元件最为相似。讨论了使用PAT元件作为秀丽隐杆线虫转座子标记系统的可能性。
摘要:背景:探讨CRISPR/Cas9介导的microRNA 21(miR-21)敲除对鼻咽癌CNE2细胞生物学特性的影响及可能的作用机制。方法:设计针对miR-21基因的sgRNA,构建CRISPR/Cas9慢病毒系统并通过T7EN1酶切检测编辑效率。通过CCK-8、Transwell侵袭实验和流式细胞术检测miR-21敲除对CNE2细胞生物学特性的影响。通过生物信息学分析和免疫印迹研究其作用机制。结果:获得了靶向敲低miR-21基因的CRISPR/Cas9系统,miR-21敲除明显抑制CNE2细胞的生长、克隆形成、侵袭和迁移能力,从而诱导细胞凋亡。生物信息学分析共鉴定出28个KEGG。进一步的免疫印迹分析显示,miR-21敲除后,PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白的表达降低。结论:miR-21敲除可抑制CNE2细胞的生长增殖并诱导其凋亡,其机制可能与抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路有关。