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针对 Cas9 表达细胞的 Edit-R 合成向导 RNA 转染方案
以下是使用 DharmaFECT™ 1-4 转染试剂（目录号 T-2001、T-2002、T-2003、T-2004）将合成向导 RNA 转染到表达 Cas9 的培养哺乳动物细胞中的简化方案。合成向导 RNA 可以是合成的单向导 RNA，也可以是与 tracrRNA 复合的合成 crRNA。适用于完成细胞系优化后使用。有关完整详细信息以及优化指南，请参阅技术手册。
利用环状向导 RNA 募集内源性 ADAR，实现高效的体内和体外 RNA 编辑
使用外源性向导 RNA 招募内源性腺苷脱氨酶来编辑细胞 RNA 是一种有前途的治疗策略，但使用当前的向导 RNA 设计，编辑效率和持久性仍然很低。我们设计了环状 ADAR 招募向导 RNA (cadRNA)，以实现更高效的可编程 A-to-I RNA 编辑，而无需同时递送任何外源性蛋白质。使用这些 cadRNA，我们观察到在多个位点和细胞系中，在 RNA 的非翻译区和编码区中，都有稳健而持久的 RNA 编辑，并且具有高转录组特异性。此外，我们通过在反义域中整合散布的环路来增加靶腺苷的转录水平特异性，从而减少旁观者编辑。通过腺相关病毒在体内递送 cadRNA，可使 C57BL/6J 小鼠肝脏中的 mPCSK9 转录本实现 53% 的 RNA 编辑，并使 IDUA-W392X 小鼠 I 型黏多糖贮积症模型中的琥珀色无义突变实现 12% 的 UAG-UGG RNA 校正
利用基于病毒的向导 RNA 递送系统对小麦进行多重启动子和基因编辑
c GUG-C413-1-12-48-3 GW2T2 A: caaGCTCGCGCCCTGCTACCCGGGGGctg WT 301 (AABBDD) B: caaGCTCGCGCCCTGCTACCCGGGGGctg WT 209 D: caaGCTCGCGCCCTGCTACCCGGGGGctg WT 369 UPL3T11 A: gggCAAGGAGCAGCAGGAGCCCTCGGaga WT 10948 (AaBbDD) gggCAAGGAGCAGCAGGAG-CCTCGGaga-1 7316 B: gggCAAGGAGCAGCAGGAGCCCTCGGaga WT 6854 gggCAAGGAGCAGCAGGAG-CCTCGGaga-1 5787 D: gggCAAGGAGCAGCAGGAGCCCTCGGaga WT 15964 gggCAAGGAGCAGCAGGAG-CCTCGGaga -1 2494 GW7T6 A：gacTCCATCAACCGGGACTCGGGAGGgtt WT 58（AabbDd）gacTCCATCAACC ------------ Ggtt -12 73 B：gacTCCATCAACCGGGACT - GGGAGGgtt -1 208 D：gacTCCATCAACCGGGACTCGGGAGGgtt WT 109 gacTCCATCAACCGGGA -- CGGGAGGgtt -2 106
2′-O-甲基修饰的向导RNA增强CRISPR-Cas12a系统的单核苷酸多态性(SNP)鉴别能力
成簇的规律间隔的短回文重复序列 (CRISPR) 和 CRISPR 相关 (Cas) 蛋白是细菌和古菌所特有的，构成了针对外来移动遗传元素的适应性免疫系统。1,2 CRISPR-Cas 系统分为第 1 类（使用多个 Cas 蛋白）和第 2 类系统（使用单个多结构域 Cas 蛋白），根据复杂性和特征蛋白又细分为六种类型（I 型至 VI 型）。3 作为第 2 类系统的成员，II-A 型 CRISPR-Cas9 得到了最广泛的研究和开发，成为基因组编辑和治疗工具。 4 Cas9 具有两个核酸酶位点——His – Asn – His (HNH) 和 RuvC 样结构域，可在双 CRISPR RNA (crRNA) 和反式激活 crRNA (transcrRNA) 向导介导的特定位点实现双链 DNA (dsDNA) 的精确切割。5,6
蒙塔纳 - 消费者向导到网格相互作用 - 摩尔-PV- ...
感谢您对太阳能光伏（PV）技术的兴趣，并花时间阅读此出版物。信息是考虑太阳能光伏系统的消费者的主要资源和实用指南。该出版物集中在网格相互作用的太阳能光伏系统上，并具有三个主要部分，对于理解太阳能PV至关重要。他们是；捕获阳光，指导和转移产生的光伏电力，并在网格相互作用的框架内利用电力。该消费者指南不是技术手册，而是代表购买和安装安全且生产效率的PV系统所必需的因素，选项和决策步骤。
化学合成的CRISPR 向导RNA
1. Dellinger, DJ 等人，《使用 2'-O-硫代氨基甲酸酯保护的核苷亚磷酰胺在固相中化学合成 RNA 的简化流程》，《美国化学会志》133，11540– 11556 (2011)；DOI：10.1021/ja201561z
用于 CRISPR/... 的 R 语言多功能向导 RNA 设计包
CRISPR/Cas9 基因编辑应用的成功依赖于与 Cas9 蛋白结合使用的单向导 RNA (sgRNA) 的效率。当前的 sgRNA 设计软件在 sgRNA 序列效率方面提供的细节各不相同，并且通常将生物选择限制在开发人员选择的物种列表中。crispRdesignR 软件包旨在通过在单个程序中提供生成的 sgRNA 的全面序列特征来解决这些限制，这使用户能够预测 sgRNA 效率并为当前没有优化效率评分方法的系统设计 sgRNA 序列。crispRdesignR 报告了所有设计的 sgRNA 序列的大量信息，具有强大的脱靶调用和注释，并且可以在用户友好的图形界面中运行。crispRdesignR 软件包在 R 中实现，具有完全可编辑的代码，可用于特殊目的，包括用户提供的基因组中的 sgRNA 设计。该软件包独立于平台且可扩展，其源代码和文档可在 https://github.com/dylanbeeber/crispRdesignR 免费获取。
PrimeDesign 软件可快速、简化地设计主要编辑向导 RNA
。CC-BY-NC-ND 4.0 国际许可，根据 未经同行评审认证）是作者/资助者，他已授予 bioRxiv 永久展示预印本的许可。它是 由 此预印本的版权持有者（此版本于 2020 年 5 月 4 日发布。 ; https://doi.org/10.1101/2020.05.04.077750 doi：bioRxiv 预印本
CROP：基于映射向导的 CRISPR/Cas9 向导选择程序
脱靶效应（即 DNA 切割在靶区域之外进行）是限制 CRISPR/Cas9 基因组编辑系统应用的一个主要问题。CRISPR 脱靶预测器 (CROP) 是一个独立程序，旨在通过预测向导 RNA 的脱靶倾向来解决此问题，从而允许用户选择最佳向导。CROP 使用的方法包括生成替换、删除和插入组合，然后将其映射到参考基因组中。基于这些映射的变体，进行评分和比对，然后报告为一个表格，该表格包含来自给定基因序列的所有向导 RNA 的脱靶倾向。该程序的 Python 脚本可从以下网址免费获取：https://github.com/vaprilyanto/crop。关键词：基因组编辑、向导 RNA、脱靶。简介