c GUG-C413-1-12-48-3 GW2T2 A: caaGCTCGCGCCCTGCTACCCGGGGGctg WT 301 (AABBDD) B: caaGCTCGCGCCCTGCTACCCGGGGGctg WT 209 D: caaGCTCGCGCCCTGCTACCCGGGGGctg WT 369 UPL3T11 A: gggCAAGGAGCAGCAGGAGCCCTCGGaga WT 10948 (AaBbDD) gggCAAGGAGCAGCAGGAG-CCTCGGaga-1 7316 B: gggCAAGGAGCAGCAGGAGCCCTCGGaga WT 6854 gggCAAGGAGCAGCAGGAG-CCTCGGaga-1 5787 D: gggCAAGGAGCAGCAGGAGCCCTCGGaga WT 15964 gggCAAGGAGCAGCAGGAG-CCTCGGaga -1 2494 GW7T6 A:gacTCCATCAACCGGGACTCGGGAGGgtt WT 58(AabbDd)gacTCCATCAACC ------------ Ggtt -12 73 B:gacTCCATCAACCGGGACT - GGGAGGgtt -1 208 D:gacTCCATCAACCGGGACTCGGGAGGgtt WT 109 gacTCCATCAACCGGGA -- CGGGAGGgtt -2 106
1。Frangoul,H。等。exagamglogene自动赛,用于严重的镰状细胞疾病。n Engl J Med 390,1649–1662(2024)。2。忘记,B。G。胎儿血红蛋白的遗传持久性的分子基础。ann。N. Y. Acad。 SCI。 850,38–44(1998)。 3。 Wienert,B。等。 KLF1在英国HPFH中驱动胎儿血红蛋白的表达。 血液130,803–807(2017)。 4。 Wienert,B。等。 编辑基因组,以引入与胎儿球蛋白增加有关的有益天然发生的突变。 NAT COMUM 6,7085(2015)。 5。 Martyn,G。E.等。 近端启动子中的自然调节突变通过创建从头GATA1部位来提高胎儿球蛋白表达。 血液133,852–856(2019)。 6。 Martyn,G。E.等。 自然调节突变通过破坏BCL11A或ZBTB7A结合来提升胎儿球蛋白基因。 nat Genet 50,498–503(2018)。 7。 Frati,G。等。 CRISPR-CAS9治疗镰状细胞病的安全性和功效研究突出了特异性疾病的反应。 mol ther s1525-0016(24)00470–2(2024)doi:10.1016/j.ymthe.2024.07.015。 8。 Anzalone,A。V。等。 搜索和重新固定基因组编辑,无需双链断裂或供体DNA。 自然576,149–157(2019)。 9。 Coleman,M。B.等。 am。 J. Hematol。 42,186–190(1993)。 10。 Chen,P。J.等。N. Y. Acad。SCI。 850,38–44(1998)。 3。 Wienert,B。等。 KLF1在英国HPFH中驱动胎儿血红蛋白的表达。 血液130,803–807(2017)。 4。 Wienert,B。等。 编辑基因组,以引入与胎儿球蛋白增加有关的有益天然发生的突变。 NAT COMUM 6,7085(2015)。 5。 Martyn,G。E.等。 近端启动子中的自然调节突变通过创建从头GATA1部位来提高胎儿球蛋白表达。 血液133,852–856(2019)。 6。 Martyn,G。E.等。 自然调节突变通过破坏BCL11A或ZBTB7A结合来提升胎儿球蛋白基因。 nat Genet 50,498–503(2018)。 7。 Frati,G。等。 CRISPR-CAS9治疗镰状细胞病的安全性和功效研究突出了特异性疾病的反应。 mol ther s1525-0016(24)00470–2(2024)doi:10.1016/j.ymthe.2024.07.015。 8。 Anzalone,A。V。等。 搜索和重新固定基因组编辑,无需双链断裂或供体DNA。 自然576,149–157(2019)。 9。 Coleman,M。B.等。 am。 J. Hematol。 42,186–190(1993)。 10。 Chen,P。J.等。SCI。850,38–44(1998)。 3。 Wienert,B。等。 KLF1在英国HPFH中驱动胎儿血红蛋白的表达。 血液130,803–807(2017)。 4。 Wienert,B。等。 编辑基因组,以引入与胎儿球蛋白增加有关的有益天然发生的突变。 NAT COMUM 6,7085(2015)。 5。 Martyn,G。E.等。 近端启动子中的自然调节突变通过创建从头GATA1部位来提高胎儿球蛋白表达。 血液133,852–856(2019)。 6。 Martyn,G。E.等。 自然调节突变通过破坏BCL11A或ZBTB7A结合来提升胎儿球蛋白基因。 nat Genet 50,498–503(2018)。 7。 Frati,G。等。 CRISPR-CAS9治疗镰状细胞病的安全性和功效研究突出了特异性疾病的反应。 mol ther s1525-0016(24)00470–2(2024)doi:10.1016/j.ymthe.2024.07.015。 8。 Anzalone,A。V。等。 搜索和重新固定基因组编辑,无需双链断裂或供体DNA。 自然576,149–157(2019)。 9。 Coleman,M。B.等。 am。 J. Hematol。 42,186–190(1993)。 10。 Chen,P。J.等。850,38–44(1998)。3。Wienert,B。等。 KLF1在英国HPFH中驱动胎儿血红蛋白的表达。 血液130,803–807(2017)。 4。 Wienert,B。等。 编辑基因组,以引入与胎儿球蛋白增加有关的有益天然发生的突变。 NAT COMUM 6,7085(2015)。 5。 Martyn,G。E.等。 近端启动子中的自然调节突变通过创建从头GATA1部位来提高胎儿球蛋白表达。 血液133,852–856(2019)。 6。 Martyn,G。E.等。 自然调节突变通过破坏BCL11A或ZBTB7A结合来提升胎儿球蛋白基因。 nat Genet 50,498–503(2018)。 7。 Frati,G。等。 CRISPR-CAS9治疗镰状细胞病的安全性和功效研究突出了特异性疾病的反应。 mol ther s1525-0016(24)00470–2(2024)doi:10.1016/j.ymthe.2024.07.015。 8。 Anzalone,A。V。等。 搜索和重新固定基因组编辑,无需双链断裂或供体DNA。 自然576,149–157(2019)。 9。 Coleman,M。B.等。 am。 J. Hematol。 42,186–190(1993)。 10。 Chen,P。J.等。Wienert,B。等。KLF1在英国HPFH中驱动胎儿血红蛋白的表达。血液130,803–807(2017)。4。Wienert,B。等。 编辑基因组,以引入与胎儿球蛋白增加有关的有益天然发生的突变。 NAT COMUM 6,7085(2015)。 5。 Martyn,G。E.等。 近端启动子中的自然调节突变通过创建从头GATA1部位来提高胎儿球蛋白表达。 血液133,852–856(2019)。 6。 Martyn,G。E.等。 自然调节突变通过破坏BCL11A或ZBTB7A结合来提升胎儿球蛋白基因。 nat Genet 50,498–503(2018)。 7。 Frati,G。等。 CRISPR-CAS9治疗镰状细胞病的安全性和功效研究突出了特异性疾病的反应。 mol ther s1525-0016(24)00470–2(2024)doi:10.1016/j.ymthe.2024.07.015。 8。 Anzalone,A。V。等。 搜索和重新固定基因组编辑,无需双链断裂或供体DNA。 自然576,149–157(2019)。 9。 Coleman,M。B.等。 am。 J. Hematol。 42,186–190(1993)。 10。 Chen,P。J.等。Wienert,B。等。编辑基因组,以引入与胎儿球蛋白增加有关的有益天然发生的突变。NAT COMUM 6,7085(2015)。 5。 Martyn,G。E.等。 近端启动子中的自然调节突变通过创建从头GATA1部位来提高胎儿球蛋白表达。 血液133,852–856(2019)。 6。 Martyn,G。E.等。 自然调节突变通过破坏BCL11A或ZBTB7A结合来提升胎儿球蛋白基因。 nat Genet 50,498–503(2018)。 7。 Frati,G。等。 CRISPR-CAS9治疗镰状细胞病的安全性和功效研究突出了特异性疾病的反应。 mol ther s1525-0016(24)00470–2(2024)doi:10.1016/j.ymthe.2024.07.015。 8。 Anzalone,A。V。等。 搜索和重新固定基因组编辑,无需双链断裂或供体DNA。 自然576,149–157(2019)。 9。 Coleman,M。B.等。 am。 J. Hematol。 42,186–190(1993)。 10。 Chen,P。J.等。NAT COMUM 6,7085(2015)。5。Martyn,G。E.等。近端启动子中的自然调节突变通过创建从头GATA1部位来提高胎儿球蛋白表达。血液133,852–856(2019)。6。Martyn,G。E.等。自然调节突变通过破坏BCL11A或ZBTB7A结合来提升胎儿球蛋白基因。nat Genet 50,498–503(2018)。7。Frati,G。等。CRISPR-CAS9治疗镰状细胞病的安全性和功效研究突出了特异性疾病的反应。mol ther s1525-0016(24)00470–2(2024)doi:10.1016/j.ymthe.2024.07.015。8。Anzalone,A。V。等。搜索和重新固定基因组编辑,无需双链断裂或供体DNA。自然576,149–157(2019)。9。Coleman,M。B.等。am。J. Hematol。42,186–190(1993)。 10。 Chen,P。J.等。42,186–190(1993)。10。Chen,P。J.等。Chen,P。J.等。g伽玛A伽马(β+)胎儿血红蛋白的遗传持久性:g伽玛-158 c-> t在顺式中与-175 t-> c c gamma-lobin基因的突变会导致G Gama-- gamma基因的增加导致G Gama-Globobin的增加。通过操纵细胞决定因素的编辑结果来增强质量编辑系统。Cell 184,5635-5652.E29(2021)。 11。 Ravi,N。S.等。 通过CRISPR基础编辑来识别新型HPFH样突变,从而提高了胎儿血红蛋白的表达。 Elife 11,E65421(2022)。 12。 Kim,H。K.等。 预测人类细胞中主要编辑指南RNA的效率。 nat Biotechnol(2020)doi:10.1038/s41587-020-0677-y。 13。 Nelson,J。W.等。 设计的Pegrnas提高了主要的编辑效率。 NAT生物技术40,402–410(2022)。 14。 Habib,O.,Habib,G.,Hwang,G.-H。 &Bae,S。人类胚胎干细胞中主要编辑结果的全面分析。 核酸Res 50,1187–1197(2022)。 15。 Lee,J。等。 prime用真正的cas9 nickases编辑最大程度地减少了不需要的indels。 nat Commun 14,1786(2023)。 16。 Antoniou,P。等。 基础编辑介导的γ-球蛋白顺式调节元件的解剖,用于胎儿血红蛋白表达的治疗重新激活。 nat Commun 13,6618(2022)。 17。 Pavani,G。等。 通过人类造血干细胞中α-珠蛋白基因座的CRISPR/CAS9编辑对β-丘脑的抗性。 血液Adv 5,1137–1153(2021)。 18。Cell 184,5635-5652.E29(2021)。11。Ravi,N。S.等。 通过CRISPR基础编辑来识别新型HPFH样突变,从而提高了胎儿血红蛋白的表达。 Elife 11,E65421(2022)。 12。 Kim,H。K.等。 预测人类细胞中主要编辑指南RNA的效率。 nat Biotechnol(2020)doi:10.1038/s41587-020-0677-y。 13。 Nelson,J。W.等。 设计的Pegrnas提高了主要的编辑效率。 NAT生物技术40,402–410(2022)。 14。 Habib,O.,Habib,G.,Hwang,G.-H。 &Bae,S。人类胚胎干细胞中主要编辑结果的全面分析。 核酸Res 50,1187–1197(2022)。 15。 Lee,J。等。 prime用真正的cas9 nickases编辑最大程度地减少了不需要的indels。 nat Commun 14,1786(2023)。 16。 Antoniou,P。等。 基础编辑介导的γ-球蛋白顺式调节元件的解剖,用于胎儿血红蛋白表达的治疗重新激活。 nat Commun 13,6618(2022)。 17。 Pavani,G。等。 通过人类造血干细胞中α-珠蛋白基因座的CRISPR/CAS9编辑对β-丘脑的抗性。 血液Adv 5,1137–1153(2021)。 18。Ravi,N。S.等。通过CRISPR基础编辑来识别新型HPFH样突变,从而提高了胎儿血红蛋白的表达。Elife 11,E65421(2022)。12。Kim,H。K.等。 预测人类细胞中主要编辑指南RNA的效率。 nat Biotechnol(2020)doi:10.1038/s41587-020-0677-y。 13。 Nelson,J。W.等。 设计的Pegrnas提高了主要的编辑效率。 NAT生物技术40,402–410(2022)。 14。 Habib,O.,Habib,G.,Hwang,G.-H。 &Bae,S。人类胚胎干细胞中主要编辑结果的全面分析。 核酸Res 50,1187–1197(2022)。 15。 Lee,J。等。 prime用真正的cas9 nickases编辑最大程度地减少了不需要的indels。 nat Commun 14,1786(2023)。 16。 Antoniou,P。等。 基础编辑介导的γ-球蛋白顺式调节元件的解剖,用于胎儿血红蛋白表达的治疗重新激活。 nat Commun 13,6618(2022)。 17。 Pavani,G。等。 通过人类造血干细胞中α-珠蛋白基因座的CRISPR/CAS9编辑对β-丘脑的抗性。 血液Adv 5,1137–1153(2021)。 18。Kim,H。K.等。预测人类细胞中主要编辑指南RNA的效率。nat Biotechnol(2020)doi:10.1038/s41587-020-0677-y。13。Nelson,J。W.等。设计的Pegrnas提高了主要的编辑效率。NAT生物技术40,402–410(2022)。14。Habib,O.,Habib,G.,Hwang,G.-H。 &Bae,S。人类胚胎干细胞中主要编辑结果的全面分析。 核酸Res 50,1187–1197(2022)。 15。 Lee,J。等。 prime用真正的cas9 nickases编辑最大程度地减少了不需要的indels。 nat Commun 14,1786(2023)。 16。 Antoniou,P。等。 基础编辑介导的γ-球蛋白顺式调节元件的解剖,用于胎儿血红蛋白表达的治疗重新激活。 nat Commun 13,6618(2022)。 17。 Pavani,G。等。 通过人类造血干细胞中α-珠蛋白基因座的CRISPR/CAS9编辑对β-丘脑的抗性。 血液Adv 5,1137–1153(2021)。 18。Habib,O.,Habib,G.,Hwang,G.-H。 &Bae,S。人类胚胎干细胞中主要编辑结果的全面分析。核酸Res 50,1187–1197(2022)。15。Lee,J。等。 prime用真正的cas9 nickases编辑最大程度地减少了不需要的indels。 nat Commun 14,1786(2023)。 16。 Antoniou,P。等。 基础编辑介导的γ-球蛋白顺式调节元件的解剖,用于胎儿血红蛋白表达的治疗重新激活。 nat Commun 13,6618(2022)。 17。 Pavani,G。等。 通过人类造血干细胞中α-珠蛋白基因座的CRISPR/CAS9编辑对β-丘脑的抗性。 血液Adv 5,1137–1153(2021)。 18。Lee,J。等。prime用真正的cas9 nickases编辑最大程度地减少了不需要的indels。nat Commun 14,1786(2023)。16。Antoniou,P。等。基础编辑介导的γ-球蛋白顺式调节元件的解剖,用于胎儿血红蛋白表达的治疗重新激活。nat Commun 13,6618(2022)。17。Pavani,G。等。通过人类造血干细胞中α-珠蛋白基因座的CRISPR/CAS9编辑对β-丘脑的抗性。血液Adv 5,1137–1153(2021)。18。Everette,K。A.等。在体内造血干细胞的体内质量编辑促进小鼠植入后镰状细胞疾病表型。nat Biomed Eng 7,616–628(2023)。19。Peterka,M。等。利用DSB修复以促进有效的同源性依赖性和 - 独立的质量编辑。nat Commun 13,1240(2022)。20。Magnani,A。等。对镰状细胞疾病的同种异体移植后混合嵌合体患者进行了广泛的多系数分析:对基因治疗的造血和植入阈值的见解。Haematologica 105,1240–1247(2020)。21。Sun,Y。等。 在小鼠中耐用基因校正的肺部干细胞的体内编辑。 科学384,1196–1202(2024)。 22。 Doman,J。L.等。 噬菌体辅助进化和蛋白质工程产生紧凑,有效的主要编辑者。 单元格186,3983-4002.E26(2023)。 23。 Wimberger,S。等。 同时抑制DNA-PK和POLθ提高了基因组编辑的整合效率和精度。 nat Commun 14,4761(2023)。 24。 Yan,J。等。 用内源性的小RNA结合蛋白改善原始编辑。 自然628,639–647(2024)。 25。 Levesque,S.,Cosentino,A.,Verma,A.,Genovese,P。&Bauer,D。E.通过调节核苷酸代谢,增强造血干和祖细胞中的质量编辑。 nat Biotechnol(2024)doi:10.1038/s41587-024-02266-4。 26。 核酸res。Sun,Y。等。在小鼠中耐用基因校正的肺部干细胞的体内编辑。 科学384,1196–1202(2024)。 22。 Doman,J。L.等。 噬菌体辅助进化和蛋白质工程产生紧凑,有效的主要编辑者。 单元格186,3983-4002.E26(2023)。 23。 Wimberger,S。等。 同时抑制DNA-PK和POLθ提高了基因组编辑的整合效率和精度。 nat Commun 14,4761(2023)。 24。 Yan,J。等。 用内源性的小RNA结合蛋白改善原始编辑。 自然628,639–647(2024)。 25。 Levesque,S.,Cosentino,A.,Verma,A.,Genovese,P。&Bauer,D。E.通过调节核苷酸代谢,增强造血干和祖细胞中的质量编辑。 nat Biotechnol(2024)doi:10.1038/s41587-024-02266-4。 26。 核酸res。在小鼠中耐用基因校正的肺部干细胞的体内编辑。科学384,1196–1202(2024)。22。Doman,J。L.等。噬菌体辅助进化和蛋白质工程产生紧凑,有效的主要编辑者。单元格186,3983-4002.E26(2023)。23。Wimberger,S。等。同时抑制DNA-PK和POLθ提高了基因组编辑的整合效率和精度。nat Commun 14,4761(2023)。24。Yan,J。等。 用内源性的小RNA结合蛋白改善原始编辑。 自然628,639–647(2024)。 25。 Levesque,S.,Cosentino,A.,Verma,A.,Genovese,P。&Bauer,D。E.通过调节核苷酸代谢,增强造血干和祖细胞中的质量编辑。 nat Biotechnol(2024)doi:10.1038/s41587-024-02266-4。 26。 核酸res。Yan,J。等。用内源性的小RNA结合蛋白改善原始编辑。自然628,639–647(2024)。25。Levesque,S.,Cosentino,A.,Verma,A.,Genovese,P。&Bauer,D。E.通过调节核苷酸代谢,增强造血干和祖细胞中的质量编辑。nat Biotechnol(2024)doi:10.1038/s41587-024-02266-4。26。核酸res。Brinkman,E。K.,Chen,T.,Amendola,M。&Van Steensel,B。通过序列痕量分解对基因组编辑的易于定量评估。42,E168(2014)。 27。 Brusson,M。等。 新型的慢病毒载体,用于结合基因添加和基因沉默策略的镰状细胞疾病基因治疗。 mol the核酸32,229–246(2023)。 28。 Gaudelli,N。M.等。 腺嘌呤基础编辑者的定向演变,活动增加和42,E168(2014)。27。Brusson,M。等。 新型的慢病毒载体,用于结合基因添加和基因沉默策略的镰状细胞疾病基因治疗。 mol the核酸32,229–246(2023)。 28。 Gaudelli,N。M.等。 腺嘌呤基础编辑者的定向演变,活动增加和Brusson,M。等。新型的慢病毒载体,用于结合基因添加和基因沉默策略的镰状细胞疾病基因治疗。mol the核酸32,229–246(2023)。28。Gaudelli,N。M.等。腺嘌呤基础编辑者的定向演变,活动增加和
1实体瘤,病理学和癌症学的生物学实验室,中心医院的蒙彼利埃大学,法国34000蒙彼利埃; p-blateau@chu-montpellier.fr(p.b.); b-beganton@chu-montpellier.fr(B.B.); v-ducros@chu-montpellier.fr(V.D.); g-chauchard@chu-montpellier.fr(G.C.); j-vendrell@chu-montpellier.fr(J.A.V.)2 Institute for research in the Cancan é rologie de Montpellier, Inserm, University of Montpellier, Institut du Cancer de Montpellier, University of Montpellier, 34000 Montpellier, France 3 Laboratory Prot omique r e ponse in fl ammmattoire spectromé de mass (Prism), Inserm U1192, University Center,里尔(Lille),F-59000 Lille,法国; coyleud@gmail.com(E.C。); estellelaurent81@gmail.com(E.L。) *通信:j-soletol@chu-montpellier.fr;这样的。: + 33-467-33-58-71
1 四川农业大学园艺学院,成都 611130;2021305054@stu.sicau.edu.cn(WH);zhengaihong@stu.sicau.edu.cn(AZ);hh820423@163.com(HH);2021205028@stu.sicau.edu.cn(XL);2022205029@stu.sicau.edu.cn(QL);201906195@stu.sicau.edu.cn(LL);2022205026@stu.sicau.edu.cn(RL);huangzhi@sicau.edu.cn(ZH);13185@sicau.edu.cn(YQ);13920@sicau.edu.cn(YT);10650@sicau.edu.cn(HL); zhangf@sicau.edu.cn (FZ) 2 遵义师范学院生物与农业技术学院,遵义 563006,浙江;czf810@163.com 3 毕节市农业科学研究所,毕节 551700,浙江;majie_011@126.com 4 浙江大学园艺系,杭州 310058,浙江 * 通讯地址:qmwang@zju.edu.cn (QW); bsun@sicau.edu.cn (BS); 电话:+86-571-88982278 (QW); +86-28-86291848 (BS) † 这些作者对本文贡献相同。
v600e),或RAS突变或RET -PTC融合,而大多数FTC具有PAX8 -PPARγ融合或RAS突变,但很少表现出改变的BRAF。同时,BRAF和RAS突变都经常出现在PDTC和ATC中,并且抑制肿瘤抑制剂TP53的失活很常见,尤其是在ATC中(7,9,10)。此外,在大约三分之一和十分之一的ATC中看到了其他肿瘤抑制剂(包括CDKN2A-RB1和PTEN)的畸变(7,9)。与分化的FTC或PTC相比,肿瘤抑制器的失活显然是未分化的PDTC和ATC的定义特征。总体而言,上面的基因组和表观遗传改变以及对患者特定临床特征的认识的越来越多,使TC护理中的精确药物成为疾病诊断,风险分层,预后和治疗决策或靶向治疗药物的实现范式。
开花时间的控制对于生殖成功至关重要,并且对农作物中种子和果实产量以及其他重要的农业特征具有重大影响。核因子Y(NF -ys)是形成异三聚体蛋白复合物的转录因子,以调节各种生物过程所需的基因表达,包括植物中的开花时间控制。据我们所知,尚无关于促进植物早期开花表型的单个NF-YA亚基突变体的报道。在这项研究中,我们确定了编码NF-Y转录因子家族成员的SLNF-YA3B,是调节番茄开花时间的关键基因。NF-YA3B的敲除导致番茄的早期开花表型,而NF-YA3B的过表达延迟了转基因番茄植物的开花。NF-YA3B被证明在酵母三杂化测定中与多个NF-YB/NF-YC异二聚体形成异三聚体蛋白复合物。生化证据表明,NF -YA3B直接与单个花桁架(SFT)启动子的CCAAT顺式元素结合以抑制其基因表达。这些发现发现了NF-YA3B在调节番茄开花时间中的关键作用,并且可以应用于农作物中开花时间的管理。
开花时间的控制对于生殖成功至关重要,并且对农作物中种子和果实产量以及其他重要的农业特征具有重大影响。核因子Y(NF -ys)是形成异三聚体蛋白复合物的转录因子,以调节各种生物过程所需的基因表达,包括植物中的开花时间控制。据我们所知,尚无关于促进植物早期开花表型的单个NF-YA亚基突变体的报道。在这项研究中,我们确定了编码NF-Y转录因子家族成员的SLNF-YA3B,是调节番茄开花时间的关键基因。NF-YA3B的敲除导致番茄的早期开花表型,而NF-YA3B的过表达延迟了转基因番茄植物的开花。NF-YA3B被证明在酵母三杂化测定中与多个NF-YB/NF-YC异二聚体形成异三聚体蛋白复合物。生化证据表明,NF -YA3B直接与单个花桁架(SFT)启动子的CCAAT顺式元素结合以抑制其基因表达。这些发现发现了NF-YA3B在调节番茄开花时间中的关键作用,并且可以应用于农作物中开花时间的管理。
图9:哺乳动物转录的调节。通过形成染色体环的形成,使DNA的活跃增强子调节区域可与靶基因的启动子DNA区域相互作用。这可以通过RNA聚合酶II(RNAP II)启动Messenger RNA(mRNA)合成,并在基因的转录开始位点与启动子结合。通过锚定在增强子上的一个结构蛋白稳定环,一个固定在启动子上的蛋白质,将这些蛋白固定在启动子上,并连接到形成二聚体(红色锯齿形)。特定的调节转录因子与增强子上的DNA序列基序结合。一般转录因子与启动子结合。当转录因子被信号激活时(此处指示为增强子上的转录因子上的小红色星形所示的磷酸化),增强子被激活,现在可以激活其目标启动子。通过绑定的RNAP IIS在相反的方向上在DNA的每条链上转录活性增强子。介体(一个由相互作用结构中约26个蛋白质组成的复合物)将调节信号从增强子DNA结合的转录因子传达给启动子。
启动子是基因上游的那些基因组区域,这些区域受RNA聚合酶的启动基因转录绑定。因为它是基因表达的最关键要素,因此启动子的识别对于理解基因表达的调节至关重要。这项研究旨在开发基于机器学习的模型,以预测tumefaciens(A. tumefaciens)菌株C58中的启动子。在模型中,启动子序列由三种不同类型的特征描述符编码,即累积的核苷酸频率,k-mer核苷酸组成和二进制编码。使用相关和基于MRMR的算法优化了所获得的特征。这些优化的特征被输入到一个随机森林(RF)分类中,以区分A. tumefaciens菌株C58中的非促进序列的启动子序列。对10倍交叉验证的检查表明,所提出的模型可以产生0.837的整体精度。该模型将为A. tumefaciens C58菌株中启动子的研究提供帮助。
启动子。为了研究热诱导的indels是否是启动子特异性的,我们测试了三个常用的本构启动子35S,RPS5A和Zmubi以驱动Cas9表达[34-36]。我们筛选了每个启动子-CAS9组合的9-14独立分离T2种群,以两到四个不同的GRNA靶向PDS3。我们观察到3xHS处理后,PDS3表型的数量和/或严重程度增加了Zmubi-Cas9(6/9独立线),RPS5A-CAS9(14/14独立线),35S- Cas9(6/12独立线)和PCUBI-CAS9和PCUBI-CAS9(7/9 Independed Line Independent lineption;图S4)。尽管表型对于35S-CAS9线的表型相对温和,但我们的数据与其他报道相一致,即热应力会提高与驱动CAS9的启动子序列无关的ideel效率[17,18,26]。热休克提高了烟草中的基因组编辑效率