气垫原理(空气置换)气垫移液器由执行实际测量的活塞-气缸系统组成(图 1)。气垫将吸入塑料吸头的样品与移液器内的活塞隔开。活塞向上运动会在吸头中产生部分真空,从而将液体吸入吸头。活塞移动的气垫就像一个弹性弹簧,吸头中的液体体积由此悬浮。由于该空气体积的膨胀,活塞移动的体积比所需吸入的液体体积大约大 2% 到 4%。这种膨胀通过考虑死体积和移液器吸头的提升高度的系数来补偿。必须通过设计措施将温度、气压和湿度对气垫移液器的影响降至最低,以免影响分配精度。
6. 用 2 mL 电解缓冲液填充 Neon NxT 管(对于 10 μ L Neon NxT 吸头,使用缓冲液 E10)。 7. 将 Neon NxT 管插入 Neon NxT 移液器站。 8. 在设备上设置所需的电穿孔方案和脉冲条件。 9. 将预热的细胞培养板从培养箱移到生物安全柜 10. 要将 Neon NxT 吸头插入 Neon NxT 移液器,请按下移液器上的按钮至第二档以打开夹子。 11. 按照下面的板图或表格对样品进行电穿孔。移取样品溶液,将移液器停靠在站上,然后应用相应的电穿孔方案(11a)。每次电穿孔运行完成后,将样品转移到
用途:EpiNext™ DNA 文库制备试剂盒 (Illumina) 适用于使用 Illumina 测序仪为下一代测序应用制备 DNA 文库,包括基因组 DNA 测序、ChIP 测序、MeDIP/hMeDIP 测序、亚硫酸盐测序和靶向重测序。该试剂盒的优化方案和组件允许快速构建非条形码 (单重) 和条形码 (多重) DNA 文库,并减少偏差。起始材料和输入量:起始材料可以包括从各种组织或细胞样本中分离的碎片 dsDNA、从 ChIP 反应、MeDIP/hMeDIP 反应或外显子捕获中富集的 dsDNA。DNA 应相对不含 RNA,因为大量的 RNA 会损害末端修复和 dA 尾部,从而降低连接能力。DNA 的输入量可以是 5 ng 到 1 ug。为了获得最佳制备效果,输入量应为 100 ng 到 200 ng。对于无扩增,需要 500 ng 或更多。注意事项:为避免交叉污染,请小心地将样品或溶液移入试管/小瓶中。使用气溶胶屏障移液器吸头,并在液体转移之间始终更换移液器吸头。整个过程中都要戴手套。如果手套和样品接触,请立即更换手套。
用途:EpiQuik™ 8-OHdG DNA 损伤定量直接试剂盒(比色法)适用于直接使用从任何物种(例如哺乳动物、植物、真菌、细菌和病毒)中分离的 DNA 检测氧化 DNA 损伤(8-OHdG)状态,这些 DNA 以多种形式存在,包括但不限于培养细胞、新鲜和冷冻组织、石蜡包埋组织和体液样本。输入 DNA:每次检测的 DNA 量可以为 100 ng 至 300 ng。为了获得最佳定量,输入 DNA 量应为 300 ng,因为基础 8-OHdG 通常少于总 DNA 的 0.01%。起始材料:起始材料可以包括各种组织或细胞样本,例如来自烧瓶或微孔板培养细胞的细胞、新鲜和冷冻组织、石蜡包埋组织、血液、体液样本等。内部控制:该试剂盒提供阴性和阳性 DNA 对照。可以绘制标准曲线(范围:5 至 200 pg 的 8-OHdG)或使用单一数量的 8-OHdG 作为阳性对照。因为 8-OHdG 含量在不同组织、正常和患病状态以及治疗和未治疗条件下会有所不同,所以建议运行重复样本以确保产生的信号得到验证。该试剂盒将允许用户量化 8-OHdG 的绝对量并确定两个不同 DNA 样本的相对 8-OHdG 状态。注意事项:为避免交叉污染,请小心地将样品或溶液移液到试纸条孔中。使用防气溶胶移液器吸头,并在每次液体转移之间更换吸头。在整个过程中都要戴手套。如果手套和样品接触,请立即更换手套。
• 建议戴上手套并使用无核酸酶试管和试剂以避免 RNase 污染。 • 始终保持无菌技术,并使用无菌过滤移液器吸头。 • 所有 EditCo 试剂应根据制造商的建议储存。 • 合成 sgRNA 应溶解在 TE 缓冲液中,并使用无核酸酶水稀释至工作浓度。请参阅 EditCo.com/resources 以查找与溶解和储存合成 sgRNA 相关的最佳实践。 • RNP 可直接在 Nucleofector™ 溶液中形成。 • RNP 复合物在室温下可稳定保存长达 1 小时(可在 4°C 下保存长达一周,或在 -20°C 下保存长达 1 个月)。请注意,在 4°C 下储存的 RNP 可能会在长时间后受到微生物生长的污染。
生物危害废弃物包括也称为传染性或生物医学废弃物的废弃物。这包括病原体、锐器、人类病理废弃物、血液和其他潜在传染性物质 (OPIM)、重组和合成核酸以及与生物危害材料接触过的实验室废弃物。这还包括但不限于:一次性实验室个人防护设备(例如手套、防护服、鞋套、口罩);一次性实验室塑料器皿(例如培养皿、培养板和烧瓶、移液器和移液器吸头);血液样本管;用于转移、接种和混合培养物的设备;以及与培养物和病原体库存接触过的纸和布。生物危害废弃物类别如下所述。IWC 可与 IBC 协商后自行决定添加其他生物危害废弃物类别。
BOECO 电子移液器 A 重量轻、符合人体工程学的设计,操作舒适,有助于避免重复性劳损 (RSI) A 彩色编码吸头弹出器,易于识别 A 高分辨率彩色图形界面,可实时显示移液操作。A 用户友好直观的界面。轻松选择所有模式。A 最可靠的 3 点校准方法,确保长时间内移液结果的准确性和一致性。A 具有密码保护的安全校准 A 如果长时间不使用移液器,则通过切换到待机模式来节省电量。A 收藏程序可以存储常用的序列步骤,以实现更顺畅的操作和复杂的过程。A 底部组件可高压灭菌 A 通过带 USB 电缆的充电器快速充电。
材料和步骤 微量离心管 20g/l CTAB 研钵和研杵 1.4M NaCl 离心机 0.1M Tris-HCl pH 计 20mM Na2EDTA 称重天平 dH2O 移液器吸头 硼酸 刮铲 Tris 碱 称量皿/纸 EDTA 移液器 DNA 大小标准(Ladder DNA) 烧杯-烧瓶 样品(生菜叶) 6x 凝胶上样缓冲液 琼脂糖 溴化乙锭(0.5 ug /ml) 1X TBE 缓冲液 A. 制备 0.5 M EDTA 原液(500 ml) 称量 93.05 g EDTA 并将其溶解在 200 ml dH 2 O 中,同时用磁力搅拌。用 NaOH 将 pH 值调节至 8.4。用 dH 2 O 将体积调节至 500 ml。
使用 RNA 和 RNP • 建议戴上手套并使用无核酸酶的试管和试剂,以避免 RNase 污染。 • 始终保持无菌技术,并使用无菌过滤移液器吸头。 • 所有 Synthego 和 Nucleofector™ 试剂均应根据制造商的建议储存。 • 合成的 sgRNA 应溶解在 TE 缓冲液中,并使用无核酸酶的水稀释至工作浓度。请参阅 Synthego 快速入门指南,了解溶解和储存合成 sgRNA 的最佳实践。 • RNP 可直接在 Nucleofector™ 溶液中形成。 • RNP 复合物在室温下可稳定保存长达 1 小时(可在 4°C 下保存长达一周,或在 -20°C 下保存长达 1 个月)。请注意,在 4°C 下储存的 RNP 长时间后可能会受到微生物生长的污染。
用途:EpiNext™ CUT&RUN Fast Kit 旨在从低输入细胞/染色质中快速富集与蛋白质(组蛋白或转录因子)复合的特定 DNA,并通过下一代测序使用 Illumina 平台或 qPCR 等其他方法识别或绘制体内蛋白质-DNA 相互作用。该试剂盒的创新工作原理、优化的协议和组件允许在最小化非特异性背景水平的情况下捕获目标蛋白质/DNA 复合物。捕获的 DNA 特别适合构建非条形码(单重)和条形码(多重)文库,以更少的偏差和更高的分辨率绘制目标蛋白质-DNA 相互作用区域。输入量:对于细胞,通常,每个反应的量可以是 2 x 10 3 到 2 x 10 5 个细胞。为了获得最佳制备效果,细胞输入量应为 1 x 10 5 ,尽管从 EpiNext™ CUT&RUN Fast Kit 获得的修饰组蛋白测序数据只需 500 个细胞即可获得。对于从细胞或组织中分离的染色质,每个反应的量可以是 0.1 µg 至 5 µg 的染色质。为了获得最佳制备效果,染色质输入量应为 2 µg。起始材料:起始材料可以包括各种哺乳动物细胞样本,例如来自烧瓶或培养皿的培养细胞、原代细胞或从血液、体液、新鲜/冷冻组织(预制备的染色质)中分离的稀有细胞群,以及从整个细胞群和胚胎细胞中分选出的特定细胞等。抗体:抗体应为 ChIP 级,以便识别与 DNA 或其他蛋白质结合的蛋白质。如果您使用的抗体尚未经过 ChIP 验证,则应使用适当的对照抗体(例如抗 RNA 聚合酶 II、抗 H3K4me3 或抗 H3K27me3)来证明抗体适用于 ChIP。内部对照:此试剂盒中提供了阴性和阳性 ChIP 对照。注意事项:为避免交叉污染,请小心地将样品或溶液移入 PCR 管中。使用气溶胶屏障移液器吸头,并在液体转移之间始终更换移液器吸头。整个过程中都要戴手套。如果手套和样品接触,请立即更换手套。