用途:EpiNext™ CUT&RUN Fast Kit 旨在从低输入细胞/染色质中快速富集与蛋白质(组蛋白或转录因子)复合的特定 DNA,并通过 Illumina 平台的下一代测序或 qPCR 等其他方法识别或绘制体内蛋白质-DNA 相互作用。该试剂盒的创新工作原理、优化的协议和组件允许在最小化非特异性背景水平的情况下捕获目标蛋白质/DNA 复合物。捕获的 DNA 特别适合构建非条形码(单重)和条形码(多重)文库,以更少的偏差和更高的分辨率绘制目标蛋白质-DNA 相互作用区域。输入量:对于细胞,通常,每个反应的量可以是 2 x 10 3 到 2 x 10 5 个细胞。为了获得最佳制备效果,细胞输入量应为 1 x 10 5 ,尽管从 EpiNext™ CUT&RUN Fast Kit 获得的修饰组蛋白测序数据只需 500 个细胞即可获得。对于从细胞或组织中分离的染色质,每个反应的量可以是 0.1 µg 至 5 µg 的染色质。为了获得最佳制备效果,染色质输入量应为 2 µg。起始材料:起始材料可以包括各种哺乳动物细胞样本,例如来自烧瓶或培养皿的培养细胞、原代细胞或从血液、体液、新鲜/冷冻组织(预制备的染色质)中分离的稀有细胞群,以及从整个细胞群和胚胎细胞中分选出的特定细胞等。抗体:抗体应为 ChIP 级,以便识别与 DNA 或其他蛋白质结合的蛋白质。如果您使用的抗体尚未经过 ChIP 验证,则应使用适当的对照抗体(例如抗 RNA 聚合酶 II、抗 H3K4me3 或抗 H3K27me3)来证明抗体适用于 ChIP。内部对照:此试剂盒中提供了阴性和阳性 ChIP 对照。注意事项:为避免交叉污染,请小心地将样品或溶液移入 PCR 管中。使用气溶胶屏障移液器吸头,并在液体转移之间始终更换移液器吸头。整个过程中都要戴手套。如果手套和样品接触,请立即更换手套。
循环!) 50280 EED,FLAG 标签 10 µg -80°C 52170-A 4x HMT 分析缓冲液 2A 4 ml -20°C 要求但未提供的材料或仪器: Anti-FLAG AlphaLISA ® 受体珠,5 mg/ml(PerkinElmer #AL112C) AlphaScreen ® 谷胱甘肽供体珠,5 mg/ml(PerkinElmer #6765300) Optiplate-384(PerkinElmer #6007290) AlphaScreen ® 微孔板读数仪可调节微量移液器和无菌吸头 应用: 用于研究 EZH2 结合试验、筛选抑制剂和选择性分析。禁忌症: DMSO 浓度高于 0.5%。吸收 AlphaScreen ® 信号发射范围 (520-620 nm) 内的光的绿色和蓝色染料,例如台盼蓝。避免使用强效单线态氧猝灭剂,例如叠氮化钠 (NaN 3 ) 或金属离子 (Fe 2+ 、Fe 3+ 、Cu 2+ 、Zn 2+ 和 Ni 2+ )。>1% RPMI 1640 培养基中存在过量生物素和铁会导致信号减弱。缺乏这些成分的 MEM 不会影响 AlphaScreen ® 检测。稳定性:按说明储存,自收到之日起至少可保存一年。参考文献:Kong, X., et al., J. Med. Chem. 2014; 57 :9512。
a. 95% 乙醇(Sigma E7023 或同等溶液) b. 不含 DNase/RNase 的水(Life Technologies AM9937 或同等溶液) c. 去离子水/蒸馏水/Milli-Q 水 d. NaCl(Sigma S3014 或同等溶液) e. NaOH(Sigma S5881 或同等溶液) f. HCl(Sigma H1758 或同等溶液) g. 甘氨酸(Sigma G7126 或同等溶液) h. 10X PBS 组织培养 (tc) 级(Sigma P5493)稀释至 1X i. KCl(Sigma P9541 或同等溶液) j. 磷酸二氢钾(Sigma P9791 或同等溶液) k. 磷酸氢二钠(Sigma S5011 或同等溶液) l. 甘油(Sigma G5516 或同等溶液) m.无 DNase/RNase 微量离心管,不粘连、低吸附、硅化 0.5 ml(Life Technologies AM12350 或同等产品) n. 无 DNase/RNase 微量离心管 1.5 ml,不粘连、低吸附、硅化(Life Technologies AM12450 或同等产品) o. 无 DNase/RNase 微量离心管 2.0 ml,不粘连、低吸附、硅化(Life Technologies AM12475 或同等产品) p. 过滤屏障防气溶胶微量移液器吸头,无 DNase/RNase(0.2 – 1000 µl) q. Qiagen QIAamp 病毒 RNA 小量试剂盒(Qiagen 52904) r. Qiagen 收集管(Qiagen 19201) s. OneStep™ PCR 抑制剂去除试剂盒(Zymo Research D6030) t. 2.0 mL 微量离心管,不含 DNase/RNase(USA Scientific 1620-2799 或同等产品) u. OneStep RT-PCR 试剂盒(Qiagen 210210 或 210212) v. Ambion Superase·In RNase 抑制剂(20 单位/µl);Life Technologies AM2694 (2,500 U) 或 AM2696 (10,000 U) w. Eppendorf DNA LoBind Tubes 5.0 mL Fisher Scientific 0030108310 或同等产品 x. 15 ml 聚丙烯锥形管(Fisher Scientific 14-959-70C 或同等产品) y. 50 mM MgCl 2(BioRad 1708872 或同等产品)或 25 mM MgCl 2(ThermoFisher Scientific AB0359 或同等产品)z.内部对照 RNA(BioGX 目录号 750-0001 - 联系公司)aa. 所有 RTqPCR 检测的标准脱盐引物和 HPLC 探针(Integrated DNA Technologies 或同等公司)bb. RT-qPCR 阳性对照(甲型流感病毒的定量基因组 RNA