The members of the board (the “ Board ”) of directors (the “ Directors ”) of Hangzhou Jiuyuan Gene Engineering Co., Ltd. ( 杭州九源基因工程股份有限公司 ) (the “ Company ”) are set out below:
农杆菌是一种杆状土壤细菌,以其将肿瘤诱导质粒 (Ti 质粒) 片段转移到植物细胞的独特能力而闻名。这种机制已广泛应用于植物基因工程。本综述深入探讨了农杆菌与植物细胞之间复杂的生物相互作用,包括细菌附着、毒力 (Vir) 基因的激活、T 复合物的产生和运输以及 T-DNA 整合到植物染色体中的关键步骤。此外,本综述还研究了农杆菌作为转化工具的工程化,重点研究了 Ti 质粒的修饰以创建二元和共整合载体系统,这大大提高了转化方案的效率和多功能性。本文还重点介绍了农杆菌介导的转化在可食用疫苗生产中的应用。通过详细研究农杆菌介导转化的生物学、技术和实践方面,本综述旨在为优化该技术以用于各种植物生物技术应用提供见解。最终,了解和改进农杆菌介导转化对于推进植物生物技术至关重要。
摘要 CRISPR/Cas9 系统是最近发现的一种针对病毒和外来 DNA 进入细菌细胞的获得性细菌免疫反应。 CRISPR/Cas9 系统在外来 DNA 进入细菌细胞后识别并降解它。在这个过程中,一部分外来DNA被整合到生物体自身的基因组中,留下了外来DNA的“记忆”,以便在再次感染时能够迅速识别和摧毁。该系统的本质是通过与互补的短RNA序列和Cas9内切酶结合来识别外来DNA短序列,Cas9内切酶在识别和结合后降解外来DNA。这种细菌免疫系统的发现为其在生物技术用途中的应用开辟了广泛的可能性。在过去的十年中,人们已经开发出各种方法来敲除、沉默和激活几乎任何生物体中的任何基因。 CRISPR/Cas9 系统可以实现快速、高效、特定的基因组编辑。在这篇评论文章中,我们介绍了 CRISPR/Cas9 细菌免疫反应的作用机制及其在生物技术和生物医学用途中的应用潜力。关键词:CRISPR/Cas9、基因编辑、基因治疗、基因敲除 摘要 CRISPR/Cas9 系统是最近发现的一种针对进入细菌细胞的病毒和外来 DNA 的细菌适应性免疫反应。 CRISPR/Cas9 系统进入细菌细胞后能够识别并降解自身 DNA。同时,该系统将部分外来DNA纳入自身基因组,使其保留为外来DNA的“记忆”,以便在重复感染的情况下能够快速识别和降解。该系统的本质是通过互补的RNA短序列和内切酶Cas9识别外来DNA,Cas9识别外来DNA,并将其结合并降解。随着这种细菌免疫系统的发现,其在生物技术用途中的应用已变得非常广泛。在过去的十年中,已经开发出了用于敲除、敲低和激活生物体中的基因的方法。 CRISPR/Cas9 系统能够快速、高效地
基因工程一直在彻底改变分子生物学的研究已有30多年的历史。大肠杆菌一直是用于恢复该体外基因工程产物的标准宿主。自1990年代后期以来,已经出现了新的体内技术,可以极大地简化,加速和扩展大肠杆菌,沙门氏菌和其他生物的基因工程。现在,在一周内,研究人员几乎可以以任何方式修改任何选择的核苷酸。此外,这些基因工程技术不依赖于限制酶和DNA连接酶进行的体外反应。相反,他们利用噬菌体L同源重组蛋白共同称为“红色”,以直接修饰细菌细胞中的DNA。重要的是,红蛋白只需要50个碱基
基因组编辑有可能彻底改变生物学和医学领域的许多研究和治疗策略。在再生医学领域,基因组工程技术的主要应用之一是生成免疫逃避型多能干细胞衍生的体细胞以供移植。特别是,随着许多实验室生产出功能性和治疗相关性更强的人类多能干细胞衍生胰岛 (SCDI) 并在临床试验中进行研究,人们对研究这些细胞的免疫原性以及调节同种异体和自身免疫反应以获得治疗益处产生了浓厚的兴趣。重要的实验工作已经表明,消除人类白细胞抗原 (HLA) 表达和过度表达免疫调节基因会影响多种多能干细胞衍生的体细胞类型的存活。迄今为止发表的有限研究主要关注干细胞衍生的胰岛,许多实验室的研究工作正在进行中。人类多能干细胞及其后代的基因组编辑正在迅速取得进展,主要是为了在移植模型中逃避免疫系统的破坏,虽然仍需要大量研究,但毫无疑问,基因组编辑和干细胞治疗的结合技术将对未来的移植医学产生深远的影响。
如何评估 NK 激活后的最佳转座天数?通常,NK 细胞的转座率最依赖于生长方式。开发团队会根据激活情况来设计转基因表达。例如,如果 K562s 被用作饲养细胞系,并且每 7 天刺激一次,通常情况下,刺激后一至两天观察转基因表达会发现刺激后七天会出现一些变化,并且转基因表达百分比会低于刺激后两至三天。在多轮刺激中也是如此。在检测方面,细胞周期的一部分会发挥作用。
CRISPR 衍生的生物技术彻底改变了基因工程领域,并已广泛应用于基础植物研究和作物改良。常用的农杆菌或粒子轰击介导的转化方法用于传递质粒编码的 CRISPR 试剂,可导致外源重组 DNA 的整合和潜在的脱靶诱变。编辑效率也高度依赖于表达盒及其基因组插入位点的设计。使用 CRISPR 核糖核蛋白 (RNP) 进行基因工程已成为一种有吸引力的方法,具有许多优势:无 DNA/转基因编辑、最小的脱靶效应、由于 RNP 快速降解而降低毒性以及能够在保持高编辑效率的同时滴定其剂量。尽管 RNP 介导的基因工程已在许多植物物种中得到证实,但其编辑效率仍然不高,并且由于植物再生和选择的困难,其在许多物种中的应用受到限制。在这篇综述中,我们总结了 RNP 介导的植物基因工程的当前发展和挑战,并提供了未来的研究方向,以扩大该技术的使用。
最初在1960年代引入了基因疗法的概念。自1990年代初以来,已经进行了1900多项临床试验,以治疗遗传疾病,并且可以主要使用病毒载体。尽管还为治疗恶性神经胶质瘤进行了多种方法,但很难靶向侵袭性神经胶质瘤细胞。为了克服这个问题,永生的神经干细胞(NSC)和非绵羊,两性逆转录病毒补充载体(RRV)引起了人们对基因递送至浸润性神经胶质瘤的关注。最近,在特定地点的基因组编辑技术靶向插入已经提高了;在特殊的ULAR中,已经开发了定期间隔的palindromic重复序列/ CRISPR相关-9(CRISPR/ CAS9)。自2015年以来,使用基因组编辑技术进行了30多次临床试验,结果表明有可能达到阳性患者预后。使用CRISPR技术用于治疗多种疾病的基因疗法预计将在未来不断发展。
哺乳动物大脑的神经元亚型众多且相互联系紧密,这对那些试图破译其功能的人来说是一个重大挑战。虽然几种神经元功能的分子机制仍未得到充分研究,但新一代测序 (NGS) 和基因编辑技术的进步已经开始弥补这一空白。成簇的规律间隔短回文重复序列 (CRISPR) 相关蛋白 (CRISPR-Cas) 系统已成为一种强大的遗传工具,能够操纵几乎任何生物体和细胞类型的基因组。该技术通过快速生成新的与疾病相关的体外和转基因动物模型,提高了我们对复杂神经系统疾病的理解。在这篇综述中,我们讨论了快速发展的 CRISPR 介导的基因组工程领域的最新进展。我们首先概述了 CRISPR 平台的典型功能,然后对其许多改编进行了功能回顾,重点介绍了其在治疗