比较 EnGen Spy Cas9 NLS、EnGen Spy Cas9 HF1 和其他市售高保真 Cas9 变体的引导 RNA 序列与靶 DNA 序列之间的错配容忍度。允许编码与荧光标记的 dsDNA 底物单、双或三错配的几种引导 RNA 之一与五种 Cas9 变体中的每一种形成核糖核蛋白 (RNP) 复合物。包括完全匹配的引导 RNA 作为对照。将 RNP 与底物以 2:1 的比例在 37°C 下孵育 5 分钟。通过毛细管电泳测量每个 RNP 复合物的底物裂解百分比。结果绘制为热图,白色表示无裂解,蓝色强度增加表示裂解百分比增加。每行均标明引导 RNA 序列,错配以绿色表示。 DNA 原型间隔序列为 5´ – AGAACTGGCAGAGGAGGTAG – 3´,原型间隔相邻基序 (PAM) 为 5´– TGG – 3´。EnGen Spy Cas9 HF1 显示出最高的靶向切割与平均脱靶切割比率,从而表明对错配的敏感性增加。
基因组科学,定期更新课程,不断增加新课程,为学生做好全球水平的准备。边做边学的学生主要倾向于在国内和国际上进行高等教育。根据数据,到目前为止,已有 45 名国内学生和 12 名国际学生选择了博士学位。该系成立已十年,我们的校友正在全球知名机构做博士后研究。在研究方面,基于教师的专业知识,建立了植物基因组、动物基因组、宏基因组、干细胞和生物信息学实验室等研究主题,并具备基础设施,并在全球范围内开展研究。结果,过去五年,发表了 125 篇同行评审期刊文章,并从 DST、DBT 和 ICMR 获得了 2.5 千万卢比的资金。课程成果:III。课程成果:1. GEN 5101 细胞和分子生物学
1)山本2018 2)Jinek M,Chylinski K,Fonfara I等。适应性细菌免疫中可编程的双RNA引导的DNA内切酶。Science,337(6096):816-821,2012 3)Nishimasu H,Shi X,Ishiguro S等。工程CRISPR-CAS9核酸酶,具有扩展的靶向空间。Science,361(6408):1259-1262,2018 4)RAN FA,HSU PD,LIN CY等。通过RNA引导的CRISPR CAS9进行双重划痕,以增强基因组编辑特异性。Cell,154(6):1380-1389,2013 5)Vakulskas CA,Dever DP,Rettig GR等。作为核糖核蛋白复合物传递的高保真CAS9突变体可以在人造血茎和祖细胞中有效地编辑。nat Med。24(8),1216-1224,2018 6)Suzuki K,Tsunekawa Y,Hernandez-Benitez R等。通过CRISPR/CAS9介导的同源性靶向整合进行体内基因组编辑。 自然,540(7631):144-149,2016 7)Sakuma T,Nakade S,Sakane Y等。 使用Talens和CRISPR-CAS9与音高系统进行 MMEJ辅助基因敲入。 自然方案,11(1),118–133,2016 8)Sakuma T,Nishikawa A,Kume S等,使用多合一的CRISPR/CAS9矢量系统在人类细胞中的多重基因组工程。 科学报告,4:5400,2014)Nishida K,Arazoe T,Yachie N等。 使用杂种p ro kar yotic yotic and d ver teb速率自适应IM MU N E系统进行靶向核苷酸编辑。 Science,353(6305):AAF8729,2016 10)Anzalone AV,Randolph PB,Davis JR等。 搜索和重新定位基因组编辑通过CRISPR/CAS9介导的同源性靶向整合进行体内基因组编辑。自然,540(7631):144-149,2016 7)Sakuma T,Nakade S,Sakane Y等。MMEJ辅助基因敲入。自然方案,11(1),118–133,2016 8)Sakuma T,Nishikawa A,Kume S等,使用多合一的CRISPR/CAS9矢量系统在人类细胞中的多重基因组工程。科学报告,4:5400,2014)Nishida K,Arazoe T,Yachie N等。使用杂种p ro kar yotic yotic and d ver teb速率自适应IM MU N E系统进行靶向核苷酸编辑。Science,353(6305):AAF8729,2016 10)Anzalone AV,Randolph PB,Davis JR等。搜索和重新定位基因组编辑
DNA合成技术已经发展到现在合成整个基因组是实际的。已经进行了多种方法,首先是为了合成单个基因,但最终是从划痕整个基因组中大量编辑或写入的。合成基因组本质上可以是天然序列的克隆,但是这种方法并没有教会我们许多新的生物学。具有新型特性的赋予基因组的能力为您提供了特殊的希望,可以使问题不容易通过常规的基因 - AT-AT-AT-AT-AT-ATI-ATIPED方法接近。这些包括有关进化的问题以及基因组在从根本上进行信息,代谢和遗传上的有线方式。在这里回顾了与如何在基因组量表上设计,建造和交付大型DNA有关的技术和技术。对这些原则的更深入的理解可能有一天会导致从头开始设计基因组的能力。