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优化 ErCas12a 以实现拟南芥中的高效基因编辑
摘要 Er Cas12a 核酸酶，也称为 MAD7，是来自直肠真杆菌的 CRISPR/Cas 系统的一部分，与 Cas12a 核酸酶有远亲关系。由于它与常用的 As Cas12a 仅有 31% 的序列同源性，其知识产权可能不受 Cas12a 核酸酶授予的专利权的保护。因此，Er Cas12a 成为实际应用的一个有吸引力的替代品。然而，Er Cas12a 的编辑效率强烈依赖于靶序列和温度。因此，通过蛋白质工程优化酶活性对于其在植物中的应用尤其有吸引力，因为它们是在较低温度下培养的。基于从 Cas12a 核酸酶优化中获得的知识，我们选择通过引入类似的氨基酸交换来提高 Er Cas12a 的基因编辑效率。有趣的是，这些与 As Cas12a 增强版或 Ultra 版类似的突变均未导致拟南芥中 Er Cas12a 的编辑显著增强。然而，酶假定的 α 螺旋结构中的两个不同突变 V156R 和 K172R 显示出可检测到的编辑改善。通过结合这两个突变，我们获得了改进的 Er Cas12a (im Er Cas12a) 变体，与拟南芥中的野生型酶相比，其活性增加了几倍。该变体在 22°C 时具有很强的编辑效率，通过将培养温度升高到 28°C 可以进一步提高，甚至可以编辑以前无法接近的目标。此外，没有检测到增强的场外活动。因此，im Er Cas12a 是一种经济上有吸引力且有效的植物基因组工程其他 CRISPR/Cas 系统的替代方案。
Bruce Schneier的应用密码学
应用密码学：Bruce Schneier在C中的协议，算法和源代码介绍了现代密码学的全面概述。本书演示了程序员如何应用加密技术来保护计算机数据免受未经授权的访问。它提供了各种算法的详细描述，在软件中实施它们的实用建议，以及如何使用它们来解决安全问题的示例。此更新版本包括新内容，例如其他算法，协议和源代码，同时还包含了上一版中的更正和更新。这本书因其权限和可访问性而受到赞扬，这是寻求建立安全软件和系统的程序员和安全专业人员的宝贵资源。Applied Cryptography是一本备受推崇的书籍，可深入了解加密技术，使其成为需要掌握数字签名等能力的开发人员的重要资源。本书提供了一般类别的加密协议和特定技术的全面概述，包括现实世界中的内部运作方式，例如数据加密标准和RSA public-key密钥密码系统。凭借有关加密实施的实际方面的广泛建议，例如生成真正的随机数并确保钥匙安全，该高级版被称为其领域最有权威的作品之一。该出版物已广泛地成为其领域领域的领先权威。这本书提供了对密码学在维持计算机数据机密性方面的应用程序的深入探索。它涵盖了许多加密算法，提供了将它们实施到软件中的动手指导，并证明了它们解决安全问题的潜力。文本旨在教育程序员创建应用程序，网络和存储系统，以如何将安全功能集成到其设计中。作者的新介绍伴随着这一增强版，这使其成为专门从事计算机和网络安全的人的宝贵纪念品。
韦尔弗利特能源与气候行动委员会
远程参与 出席者：Suzanne Ryan-Ishkanian（主席）、Carol Magenau、Lilli Ann Green、Steve Burke、Nancy Gralla、Gorham Brigham、Patricia Taylor、Richard Emmet 嘉宾：Beth Pyles，韦尔弗利特镇规划师 会议于晚上 7:17 开始，随后进行点名。会议已录音。[19:18] Brigham 提出并由 Emmet 附议的批准上次会议记录的动议，以 6-0-1 票赞成通过，Green 弃权，Taylor 尚无投票资格。[19:19] Ryan-Ishkanian 介绍了新成员 Richard Emmet，他介绍了自己与韦尔弗利特和开普敦的关系，并分享了自己在银行和公司金融方面的背景，以及在教育方面的志愿者经历。[19:23] Ryan-Ishkanian 介绍了我们的嘉宾，新任城镇规划师 Beth Pyles，她回答了我们提前发给她的问题。她最初于 11 月被聘为保护代理人。在过去的几个月里，她一直在处理保护事务和她作为城镇规划师的新角色，但该镇最近聘请了一位新的保护代理人。她预计将与规划委员会和分区上诉委员会以及镇行政官、助理 TA（一旦聘用）和镇部门负责人密切合作。她的目标之一是加强沟通和协调。规划、分区和住房是优先事项。之前的经验包括担任波士顿的分区和土地使用律师。为了及时了解设施和设备需求，她建议我们应该浏览规划委员会等议程并与建筑检查员保持联系。与当地综合规划委员会合作将是优先事项。该镇正在努力参与 OpenGov，它将提供有关某些市政职能的公开信息。Green 谈到了每年按计划申请补助金的可取性，并希望这可以成为城镇规划师职位的一个特点。Emmet 谈到了他制定年度运营计划和 3-5 年战略计划的经验，并询问战略规划是否是一项工作职责。Magenau 询问分区与规划职责有何关系。派尔斯回答说，她与分区委员会合作，并与规划委员会一起审查条例和法规，特别是考虑经济适用房。派尔斯强调她愿意帮助我们提出的问题，而且她的职位是新的和不断发展的。格林对加入该计划表示保留，[19:54] Ryan-Ishkanian 谈到了我们为获得 Selectboard 批准申请气候领袖社区 (CLC)（绿色社区计划的增强版）所做的努力。申请截止日期为 7 月 22 日，但 Selectboard 拒绝立即批准该计划，部分原因是申请免费顾问的时间太短（4 月 22 日）。