摘要:高效的植物转化和组织培养方法对于植物的遗传工程和先进的分子育种至关重要,但在栽培的八倍体草莓 (Fragaria × ananassa) 中,这两种方法都尚未得到很好的建立。在本研究中,针对两个基因不同的草莓品种 Sweet Sensation VR Florida 127 (FL127) 和 Florida Brilliance (FB) 建立并优化了一种芽再生方法。从温室生长的植物中获得的尖端、节点和叶柄的匍匐茎段被用作外植体,用于比较芽再生率。'FL127' 在优化条件下显示出最高的芽再生频率,而'FB' 在相同培养基类型中对较低浓度的 N6-苄基腺苷 (BA) (0.01 mg/L) 的反应最佳。 'FL127' 和 'FB' 中体细胞胚从匍匐茎尖 (RT) 向芽再生的平均转化频率分别为 42.8% 和 56.9%。利用这些优化的组织培养条件,进行农杆菌介导的 CRISPR/Cas9 基因编辑,以检查品种 FL127 中八氢番茄红素去饱和酶 FaPDS 的转化和靶基因编辑效率。总共 234 个外植体接种了含有 Cas9-FaPDS 的农杆菌,导致愈伤组织诱导效率为 80.3%,其中 13.3% 的再生植物表现出部分或完全的白化表型。编辑子代的扩增子测序表明,所有 FaPDS 同源拷贝的向导 RNA (gRNA) 靶位点或侧翼区域均发生了突变(替换、插入和缺失)。我们的研究结果为草莓功能基因组学研究和基因编辑指导的品种改良提供了有效的组织培养和转化方法。
c。当愈伤组织或外植体暴露于细胞分裂素的正确组合,有时是低的生长素浓度时,射击诱导开始形成。芽可能像植物或愈伤组织上的小芽一样出现。在此阶段,植物细胞开始分化为芽分生组织,这些分生组织成长为功能性芽。d。射击伸长一旦形成不定的芽,就需要将其拉长并发展成可行的植物。这通常涉及将新形成的芽转移到低细胞分裂素和高营养含量的培养基中。e。芽伸长后生根,将植物体转移到可能含有生长素的生根培养基中,以鼓励根部形成。在将植物性转移到土壤或适应外部条件之前,必须建立根。
- 通过未成熟叶片外植体的体细胞胚胎发生,为肯尼亚木薯 (Manihot esculenta) 开发一种可重复的体外再生方案 - 为农杆菌定向转化肯尼亚木薯基因型开发一种可重复的方案 - 利用 RNA 干扰生成无氰肯尼亚木薯 - 优化实验模型,以在实验室动物模型中诱导肥胖、痴呆、癫痫和焦虑 - 成功指导了 29 名硕士生和 15 名博士生 - 在同行评审的期刊上发表了 53 篇论文 - 参加了科学会议 - 获得了研究补助金 - 参与和合作开发肯雅塔大学法医学文凭和研究生文凭课程 - 在该部门实施文凭和研究生文凭课程
为癌症患者临床管理提供指导的精准医疗方法正在逐步发展。患者来源的外植体 (PDE) 提供了一个患者近端离体平台,可用于评估对标准护理 (SOC) 疗法和新药物的敏感性。与目前的临床前模型相比,PDE 作为患者近端模型有几个优势,因为它们保留了单个肿瘤的表型和微环境。然而,PDE 的寿命与纳入通过患者肿瘤全外显子组测序 (WES) 确定的候选治疗方案所需的时间范围不相容。本综述探讨了 PDE 寿命在不同肿瘤流中的差异以及组织制备对其的影响。提高 PDE 的寿命将实现个性化治疗测试,从而有助于改善癌症患者的预后。
图 1 . (a) 3D 打印钛合金全膝关节置换术修复近端胫骨。[15] (b) 3D 打印患者匹配的 Ti6Al4V 脊柱笼。[16] (c) 3D 打印合金设计。Ti-Ta 合金具有固有微孔隙度和纳米级表面孔隙度,这是通过生长的二氧化钛纳米管实现的。[20] (d) 对 Spurr 嵌入的大鼠股骨外植体的 300µm 薄切片进行组织学评估,结果显示 5 周时 10Ta-P-NT 和 25Ta-P-NT 中均有早期类骨质形成。类骨质的存在通过改良 Masson Goldner 染色的红色标记。在 TNT-P(对照)中观察到沿骨-植入物界面的不均匀类骨质形成。比例尺为 200µm。[20]
引言植物组织培养是一种无菌技术,用于快速对健康,无病原体和真实型植物的微繁殖。1目前,在商业植物组织培养实验室中常规大量批量生产及其方案是通过器官发生或胚胎发生建立的。然而,这种方法仍然面临一些局限性,例如微繁殖过程的耗时性质和每个生产的植物的成本高成本。导致成本增加的主要因素是劳动力,材料和化学物质。2此外,许多小型文化船的清洁,归档和处理需要更多的时间和劳动。此外,在适应和转移到土壤期间可能会丢失一些植物。已努力降低成本并提高再生植物的质量和数量。3最有希望的方法是光自养微繁殖(带有无琼脂培养基)和生物反应器。琼脂是昂贵的成分之一,它被添加为胶凝剂,用于凝固培养基并防止外植体浸没。在植物组织培养中测试了不同的支撑矩阵作为琼脂的替代品,例如木薯粉,玉米粉,煮土豆,
生物技术。51基本植物组织培养1+1 SEM。II历史和植物组织培养的发展。 引入,范围和植物组织培养的重要性。 体外繁殖的优点和缺点。 体外培养物的营养要求。 母植物的选择,收集,制备,表面灭菌和外植体接种。 通过增强腋芽的释放,体外传播。 器官发生和体细胞生成。 体外繁殖的经济学和商业潜力。 在视野,林业和园艺植物的体外传播中的进展。 实用:放在体外繁殖单元中。 在体外传播单元内部工作。 实验室组织,设备,工具和技术。 实验室污染物 - 其控制措施。 培养基制备:主要营养素,少量营养素,有机物和其他成分。 植物生长调节剂。 固化剂,灭菌方法,接种和培养培养物。 植物学的前视频建立,其现场测试,组织培养植物的现场种植和管理。II历史和植物组织培养的发展。引入,范围和植物组织培养的重要性。体外繁殖的优点和缺点。体外培养物的营养要求。母植物的选择,收集,制备,表面灭菌和外植体接种。通过增强腋芽的释放,体外传播。 器官发生和体细胞生成。 体外繁殖的经济学和商业潜力。 在视野,林业和园艺植物的体外传播中的进展。 实用:放在体外繁殖单元中。 在体外传播单元内部工作。 实验室组织,设备,工具和技术。 实验室污染物 - 其控制措施。 培养基制备:主要营养素,少量营养素,有机物和其他成分。 植物生长调节剂。 固化剂,灭菌方法,接种和培养培养物。 植物学的前视频建立,其现场测试,组织培养植物的现场种植和管理。通过增强腋芽的释放,体外传播。器官发生和体细胞生成。体外繁殖的经济学和商业潜力。在视野,林业和园艺植物的体外传播中的进展。实用:放在体外繁殖单元中。在体外传播单元内部工作。实验室组织,设备,工具和技术。实验室污染物 - 其控制措施。培养基制备:主要营养素,少量营养素,有机物和其他成分。植物生长调节剂。固化剂,灭菌方法,接种和培养培养物。植物学的前视频建立,其现场测试,组织培养植物的现场种植和管理。
遗传转化是一个复杂且资源密集型的过程,它是产生GMO(转基因生物)或基因编辑作物的关键瓶颈。1许多研究人员探索了激素和植物发育调节基因来增强植物再生,从而提高了组织培养依赖性遗传转化的效率。2先前,我们开发了无组织培养的“切割浸入”(CDB)方法来进行遗传转化,利用农杆菌根源基因根源诱导和转化来自外植体切割部位的毛根。3遗传转化的植物是从具有芽形成能力的转化的毛根中生长的。CDB方法极大地简化了遗传转化和基因编辑(包括Taraxacum Kok-Saghyz Rodin(TKS))的实验工作流程。在这里,我们通过省略了毛茸茸的根形成过程,在CDB方法中开发了一个极为简化的过程,从而大大节省了人工和时间。
摘要 CRISPR/Cas9 和 Cas12a (Cpf1) 工具已大规模用于基因组编辑。最近建立了一种具有单个核酸酶结构域、相对较小尺寸、低频率脱靶效应和高温下切割能力的新效应物,并将其命名为 CRISPR/Cas12b (C2c1)。Cas12b 还表现出在哺乳动物系统中的温度诱导性。因此,该系统对于编辑耐高温植物物种(如棉花)的基因组具有潜在价值。利用这种新系统,在一系列温度下通过农杆菌介导的遗传转化成功生成了陆地棉突变体。暴露在 45°C 下 4 天的转化子(被农杆菌感染的外植体)显示出最高的编辑效率。全基因组测序未检测到脱靶突变。T0 代中 AacCas12b 进行的基因组编辑忠实地传递给了 T1 代。综上所述,CRISPR/Cas12b 是一种高效、精确的棉花基因组编辑工具。
膀胱膨胀是一种具有挑战性的外科手术,专门提供了泌尿科泌尿外科。因此,实验和临床研究集中在膀胱的组织工程上。1这些研究主要涵盖了膀胱组织的体外扩张,并评估它们在膀胱重建中的使用。2-4膀胱壁的组织工程涉及进行活检,扩展细胞,将其播种在合成或天然基质上,并将细胞矩阵复合物植入宿主中。5分别报道了成人组织和胎儿组织替代物的实验用途,以分别报道了膀胱不足或故障。 6-9然而,这些成年和胎儿细胞种群的相互作用尚未得到充分研究。我们以前已经证明,胎儿膀胱平滑肌细胞(SMC)在播种后早早从外植体中出现。然而,成人膀胱SMC的人口加倍时间(PDT)和S相比例比胎儿衍生的细胞短,这表明对这些细胞进行了初步研究