摘要:(1)背景:马α疱疹病毒-1(EHV-1)是一种在全球大多数马群中流行的高度传染性病毒病原体。CRISPR/Cas9 等基因组编辑技术已成为精准 RNA 引导基因组修饰的有力工具;(2)方法:设计了单向导 RNA(sgRNA)以靶向三个必需基因(ORF30、ORF31 和 ORF7)和一个非必需基因(ORF74),并确定其对体外病毒复制动力学的影响;(3)结果:我们证明靶向必需溶解基因的 sgRNA 降低了 EHV-1 复制,而靶向 ORF74 的 sgRNA 的影响可忽略不计。靶向 ORF30 的 sgRNA 对抑制 EHV-1 复制表现出最强的效果,病毒基因组拷贝数和传染性子代病毒产量均有所减少。下一代测序鉴定出选择性sgRNA特定切割位点缺失的变异体,并评估了不同sgRNA之间的组合,发现靶向ORF30和ORF7的sgRNA双重组合与使用单个sgRNA相比,能显著抑制病毒复制至较低水平,表明存在协同效应;(4)结论:数据表明sgRNA引导的CRISPR/Cas9可用于体外抑制EHV-1复制,表明这种可编程技术可用于开发一种新颖、安全、有效的EHV-1治疗和预防方法。
亚油酸(LA,18:2N-6)是最佳婴儿生长和脑发育的必不可少的营养。LA在大脑中的作用被认为是由称为氧化的LA代谢产物(Oxlam)的LA的氧化代谢产物介导的,但是缺乏直接支持这一假设的证据。这项研究调查了Oxlams是否调节关键神经发育过程,包括轴突生长,树突状树皮化,细胞活力和突触连通性。在产后第0-1天,雄性和雌性大鼠的原发性皮质神经元 - 培养物暴露于以下oxlams:1)13-羟基二十二核酸(13-hode); 2)9-羟基涂蛋白酸(9-hode); 3)9,10-二羟基二十二烯酸(9,10-dihome); 4)12(13) - 环氧二烯酸(12(13) - epome); 5)9,10,13-三羟基二十二烯酸(9,10,13-Trihome); 6)9-氧化二糖二烯酸(9-氧化酸); 7)12,13-二羟基二十二烯酸(12,13-dihome)。通过TAU-1免疫染色评估的轴突产物增长增加了9- hode,但在雄性神经元中降低了12,13-dihome。树突植物受到男性神经元中9- hode,9-oxoode和12(13)的影响,在雌性神经元中受到12(13) - epome的影响。Oxlams都没有显着改变细胞活力和突触连通性。总的来说,这项研究表明,选择的OXLAM以性别依赖性的方式调节神经元的形态,男性神经元更容易受到影响。