大段

新闻通讯

几年前，宾夕法尼亚大学医学院资助了创建专用的老鼠胚胎冷冻保存设施。该设施位于解剖学化学大厦中的有安全房间中，并由核心监督。该设施目前包含9个液体N 2储罐（加上微型注射室中的工作罐），并带有警报和一个用于液体N 2补充的源罐。核心负责维持N 2 Dewar的完整性，并维护P.I.S.可以实时访问的最新计算机存储记录。每年对此冷冻仪服务的核心用户每年收费适中（中心成员$ 24/lin/yr）。该费用将根据用户提供的帐号通过我们的数据库每季度收集。用户可以监视其库存并与核心安排，以将样本发送给合作者。用户只需要为收件人提供联系信息，以及要发送的行的名称，核心将负责运输过程。两年前，转基因和嵌合小鼠的设施开始使用CRISPR-CAS9技术提供直接的基因组编辑服务。crisprs（群集定期散布的短底滴体重复序列）编码RNA（指导RNA）靶向与CRISPR相关的蛋白（CAS9）以特异性方式裂解DNA序列。在双链断裂之后，非同源末端连接产生了随机大小的目标缺失。这些基于CRISPR/CAS9的方法可显着减少产生转基因小鼠线的时间和资源。DNA裂解也可用于使用共同注射的单链或双链DNA模板来增强高保真同源重组。基于CRISPR-CAS9的直接基因组修饰服务在2014年纳入了核心服务，并迅速增加了其利用率。绝大多数项目使用或没有模板DNA的Cas9 RNA和SGRNA的注射组合。混合物被注入用户要求的选择菌株的受精小鼠卵母细胞的细胞质中。与DNA注射服务类似，注射的卵被培养为O/N，并将胚胎手术转移到假雌性中，并被允许延长。对于“敲入”和靶向序列修饰项目，在存在50 UM SCR7的情况下，将卵培养为O/N，这是一种连接酶IV的抑制剂，以增强同源重组（相对于非同源最终结合）事件。KO项目的成功率范围为5％-50％的活出生，并且经常出现双行性突变。KI项目仍然不太成功（3-10％），并且基于项目中的多个变量（基本替换，LOXP或TAG插入，大段插入），成功频率差异很大。核心继续监视所有项目的结果并收集有助于提高该技术效率的数据。http://www.med.upenn.edu/genetics/tcmf/http://www.med.upenn.edu/genetics/tcmf/