结果:在这里,我们介绍了QuantPrime,这是一种直观且用户友好的全自动工具,用于小型至大规模的QPCR分析中的引物对设计。QuantPrime可以通过Internet http://www.quantprime.de/在线使用,也可以在下载后在本地计算机上使用;它提供具有高度可自定义参数的设计和特异性检查,并准备与许多重要的高等真核模型生物和植物作物的公开转录组一起使用(目前总共有295种),同时受益于外显子边框和可用基因组注释中的替代剪接变体信息。模型植物拟南芥,作物Hordeum vulgare和模型绿色Alga Chlamydomonas Reinhardtii的实验结果显示,设计的底漆对的成功率超过96%。
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在可编程 DNA 热循环仪 (Perkin Elmer Cetus) 中进行 1000 个循环。每个循环中,反应混合物加热至 93 °C 持续 0.5 分钟,冷却至 55 °C 持续 1 分钟,然后在 72 °C 下孵育 2 min。在最后一个循环中,72 °C 孵育时间延长至 7 分钟。