参 数 名 称 符 号 条 件 最小 最大 单 位 电源电压 V CC — -0.5 +7 V 输入钳位电流 I IK V I <-0.5V 或 V I >V CC +0.5V — ± 20 mA 输出钳位电流 I OK V O <-0.5V 或 V O >V CC +0.5V — ± 20 mA 输出电流 I O -0.5V
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靶标 引物/探针 序列 5′ → 3′ 参考 18S rDNA SSUF1 AACCTGGTTGATCCTGCCAGTAGTC ( 1 ) SSUR1 TGATCCTTCTGCAGGTTCACCTACG 28S rDNA 28SF1 AAGCATATCAATAAGCGGAGG ( 2 ) 635 GGTCCGTGTTTCAAGACGG 细胞色素 B cytB_F1 GYGTWGAACAYATTATGAGAG ( 3 ) cytB_R2 WACCCATAARAARTACCATTCWGG 附表 2. 18S rDNA 核糖体亚基、28S rDNA 核糖体亚基 D1/D2 区和部分细胞色素 B 基因的序列分析。使用基本局部比对搜索工具 (BLAST) 查询 NCBI 数据库(访问于 2024 年 7 月)
1。pormidium。camptonemaplanktothrixOscillas ......................................................................... Tychonema lyngbya 134 6。 pleurocapsa 134 7。 Pseudanaaaaena 135 8。 leptolyngby 135Oscillas .........................................................................Tychonemalyngbya 134 6。pleurocapsa 134 7。Pseudanaaaaena 135 8。leptolyngby 135
摘要:微藻可以分别利用大气中的二氧化碳和阳光作为碳源和能量来源,产生工业相关的代谢物。开发用于高通量基因组工程的分子工具可以加速产生具有改良性状的定制菌株。为此,我们开发了一种基于 Cas12a 核糖核蛋白 (RNP) 和同源定向修复 (HDR) 的基因组编辑策略,以产生微藻 Nannochloropsis oceanica 的无疤痕和无标记突变体。我们还开发了一种基于附加质粒的 Cas12a 系统,用于在目标位点有效地引入插入/缺失。此外,我们利用 Cas12a 处理相关 CRISPR 阵列的能力来执行多路复用基因组工程。我们在一次转化中有效地靶向宿主基因组中的三个位点,从而朝着微藻的高通量基因组工程迈出了重要一步。此外,还开发了一种基于 Cas9 和 Cas12a 的 CRISPR 干扰 (CRISPRi) 工具,用于有效下调目标基因。我们观察到在 N. oceanica 中用 dCas9 执行 CRISPRi 后,转录水平降低了 85%。总体而言,这些发展大大加速了 N. oceanica 的基因组工程工作,并可能为改良其他微藻菌株提供通用工具箱。关键词:Nannochloropsis、微藻、基因组编辑、CRISPR-Cas、基因沉默、核糖核蛋白、Cas9、Cas12a ■ 介绍
Aureus Volvox EHR。人类地(NOTH)Shihira的Shihira和坠毁的CraulsdönnzGrach Tetraedron(Reinsch)Hansg最低四重奏(A. Br)hansg hansg hansg hansg korsikov terrobulastic Tetraedron(Renesch。)hansg。tumulgor四卫(Reinsch)Hans oocystaceae孤立性。愤怒的焦虑。循环单磷酰(NYGAARD)NYGAARD水理网状(L)网状lagerh。双工踩踏变量。亚晶raCib Pediatum(Ehrenb)A。Br。 键入pedest(ehrenb)ralfs。 儿科测试。 fritsch。 至关重要的十字无限(Wolle)O。Kuntze。 异性和北海峡。) 云。 史密斯的史密斯(Chod)GM Smith。 Armatus场景。 bicaudatus(gugelmet)场景Mus cadal-authentics chdodat。 kutz的Dimorphth。 长场景 oblycils(turp)kutz。 穿孔方案var。 主要(Turner)Cob。 nov。场景Quadrica。 渴望(Chod)G.M Smith。 场景Quadraspiina Chodad。 史密斯史密斯。 Rabenhorst的亚ulotrichales。 班级CLS俱乐部(Linn)Kutz。亚晶raCib Pediatum(Ehrenb)A。Br。键入pedest(ehrenb)ralfs。儿科测试。fritsch。至关重要的十字无限(Wolle)O。Kuntze。异性和北海峡。)云。史密斯的史密斯(Chod)GM Smith。Armatus场景。bicaudatus(gugelmet)场景Mus cadal-authentics chdodat。kutz的Dimorphth。长场景oblycils(turp)kutz。穿孔方案var。主要(Turner)Cob。 nov。场景Quadrica。 渴望(Chod)G.M Smith。 场景Quadraspiina Chodad。 史密斯史密斯。 Rabenhorst的亚ulotrichales。 班级CLS俱乐部(Linn)Kutz。主要(Turner)Cob。nov。场景Quadrica。渴望(Chod)G.M Smith。场景Quadraspiina Chodad。史密斯史密斯。Rabenhorst的亚ulotrichales。班级CLS俱乐部(Linn)Kutz。
1.9a,2.2b和2.1a)分别向甲状腺素,Nodosilinea和Microcoleus属。属于这些属的蓝细菌经常在土壤/生物群中发现(Couradeau等人2019; Mehda等。2021; Mühlsteinová等。2014; Radzi等。2019; Roncero-Ramos等。2019; Samolov等。2020),例如trichocoleus菌株在沙漠土壤中很常见(Mühlsteinová等。2014;张等。2016),微弹性被认为是国际化生物分类单元之一(M. chaginatus通常是生物库的主要成员)(Couradeau等人。2019; Mehda等。2021; Roncero-Ramos等。2019),以及在土壤/生物群中也发现了Nodosilinea属的代表,即荒漠和南极地区(Mehda等人。2021; Perkerson等。2011; Radzi等。2019)。丝状分离物2.1b属于绿色藻类klebsormidium,也
微藻作为光合生物,有可能生产用于食品,饲料,化妆品,营养素,燃料和其他应用的生物分子。更快的增长率以及更高的蛋白质和脂质含量使微藻成为许多工业应用的流行底盘。但是,诸如低生产率和高生产成本之类的挑战限制了其商业化。为了克服这些挑战,已经采用了生物工程方法,例如基因工程,代谢工程和合成生物学,以提高基于微藻的产品的生产率和质量。采用基因组编辑工具(例如CRISPR/CAS)的基因工程允许精确且有针对性的遗传修饰。CRISPR/CAS系统目前用于修改微藻的遗传组成,以增强特定生物分子的产生。但是,由于某些局限性,这些工具尚未在微藻中明确探索。尽管基于CRISPR的生物工程方法取得了进展,但仍然需要进一步研究以优化基于微藻的产品的生产。这包括提高基因组编辑工具的效率,了解微藻代谢的调节机制以及优化生长条件和培养策略。此外,解决与微藻的遗传修饰有关的道德,社会和环境问题对于基于微藻的产品的负责发展和商业化至关重要。审查将帮助研究人员了解进度并启动微藻中的基因组编辑实验。本评论总结了基于CRISPR的生物工程的进步,用于生产具有工业重要的生物分子的生产,并提供了在微藻中使用CRISPR/CAS系统的关键注意事项。
进行了本研究,以评估三种不同饮食中的微藻对生长,肠道组织学,免疫生物标志物以及对细菌病原体(Vibrio Anguillarum)少年彩虹鳟鱼,Oncorhyhhynchus mykiss的影响。制备了四种实验饮食,包括基础饮食(CON)和三种含有小球藻的饮食。(CHL),sp。(hae)或schizochytrium sp。(SCH),每个Microalga的含量为0.5%,在基础饮食中补充。最初体重为12.16±0.01 g(平均值±SD)的180个少年彩虹鳟鱼被随机分配到12个储罐中,并通过半电流系统饲养。在进食试验的六周后,体重增加(99.4%),特定的生长速率(1.92%/天)和骨过氧化物酶活性(5.08)(5.08)的HAE明显高于其他饮食饮食的鱼(p <0.05)。喂食HAE饮食的鱼的肠绒毛长度(1.34 µm)明显高于喂食CHL(1.13 µm)和CON(1.14 µm)饮食的肠道。在腹膜内注射细菌病原体V. anguillarum后27天记录累积存活率(CSR)。喂养HAE饮食的鱼类的企业社会责任(75%)明显高于喂养其他饮食的饮食。建议sp。(饮食中纳入0.5%)可能会提高体重增加,特异性生长速率,肠绒毛长度和骨髓氧化酶活性,并提高针对V. anguillarum挑战的青少年彩虹鳟鱼的存活率。
