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World File Search System愈伤
CRISPR/RNPS- ...
结果：这项研究表明，土壤生长的叶子或愈伤组织衍生的胡椒原生质体是筛选有效的CRISPR/CAS9或CRISPR/CAS12A（CPF1）的有效指南RNA的有用系统。crispr/cas9或cpf1作为纯化的内切核酸酶的CRISPR/RNP复合物与设计的单个指南RNA混合在一起，可以编辑靶基因，camlo2，camlo2，在两个辣椒品种中，具有整个基因组测序，capsicum nuuum nuuum'cm334'和C. annuum'和annuum'dempsey'。在CM334和Dempsey和dempsey和Cleave Camlo2的体外，设计的Guide RNA（Cas9或CRRNA的SGRNA或CRRNA）在Camlo2中保守。crispr /cas9-或 /cpf1-RNP复合物被转染到热胡椒cm334的纯粹分离的原生质体中，并通过PEG介导的递送转染了甜辣椒dempsey。有针对性的深层测序分析表明，根据应用的CRISPR/RNP，在两个品种中都差异地编辑了靶向的Camlo2基因。
快速且高效的形态学基因介导的六倍小麦转化
成功使用了形态学调节基因，ZM-BABY BOOM（ZMBBM）和ZM-WUSCHEL2（ZMWUS2），用于农杆菌介导的玉米（Zea Mays L.）和高粱（Sorghum Bicolor L.）的玉米转化（Zea Mays L.在这里，我们报告了两种形态学基因介导的小麦转化方法，无论是否有或没有形态学和标记基因切除。这些方法分别产生高达58％和75％的独立转化效率。在这两种情况下，用于产生转基因植物的组织培养时间从80天显着降低到近50天。此外，通过消除了消除胚胎轴切除的需求，绕开了延长愈伤组织形成的双重选择步骤的必要性，从而使该过程减少了劳动密集型，更高的劳动力，更高的劳动力，更高的劳动力，更高的劳动力，更具成本效益。此外，我们证明了这些方法的灵活性，并使用除草剂（磷酸素，乙酰硫磺磺酮）和抗生素（G418）选择了多种基因型的高质量转基因事件。
MRFT植物学/生命的教学大纲...
植物细胞，组织和器官培养：整数，形态发生的基本方面：器官发生和体细胞胚发生，克隆传播，人造种子。单倍体，愈伤组织和细胞悬浮培养物的雄激素作用和产生，somaclonal变体的产生，培养物中二级代谢产物的产生，冷冻保存。Somatic hybridization and cybridization : Factors affecting protoplast isolation, culture and plant regeneration, Protoplast fusion-chemical fusion & electrofusion mechanism & techniques, Selection of heterokaryotic fusion products, biochemical selection and physical selection (micromanipulation, flow cytometric characterization and cell sorting), Analysis of hybrids, Somatic hybrids and cybrids for crop improvement.重组DNA技术：基因克隆 - 原理，克隆载体 - 质粒，噬菌体，cosmids＆Phagemids；人工染色体，聚合酶链反应 - 原理，类型和应用，RT- PCR；基因组和C DNA库；重组DNA分子的构建及其动员到细菌中；重组克隆的分析，DNA测序。
通过结构多样的生物活性植物化学物质对糖尿病伤口中巨噬细胞的免疫调节
1个百夫长技术与管理大学跨学科科学系，库尔达752050，印度奥里萨邦； Krisskrishnendu@gmail.com 2 B. C. Roy专业课程博士，Bidhannagar博士，Bidhannagar，Bidhannagar，Durgapur，Durgapur 713212，印度西孟加拉邦，印度3号食品加工部，印度工程科学与技术研究院，北印度711111111111111.杜尔加普尔713212，印度西孟加拉邦5号土壤科学系，百夫长技术与管理大学，Paralakhemundi 761211，印度奥里萨邦6印度6日生理学系，Bankura基督教学院，Bankura 722101，印度西孟加拉邦； rajkumar@bankurachristiancolge.in 7纽约市技术学院，纽约市技术学院，纽约市大学（CUNY），布鲁克林，纽约州，11201，美国8美国艺术与科学学院，艺术与科学学院，阿德尔夫大学，阿德尔夫大学，纽约州加德市阿德尔夫大学，美国纽约州11530，纽约州9530，吉多利亚教育，吉多尔。美国纽约州11530，美国10号药物科学系，药学学院，德克萨斯州南部大学，德克萨斯州休斯敦，德克萨斯州77004，美国11号，美国宾夕法尼亚州匹兹堡大学手术系77004 ）; banerjeepradipto.123@gmail.com（P.B.） †这些作者为这项工作做出了同样的贡献。1个百夫长技术与管理大学跨学科科学系，库尔达752050，印度奥里萨邦； Krisskrishnendu@gmail.com 2 B. C. Roy专业课程博士，Bidhannagar博士，Bidhannagar，Bidhannagar，Durgapur，Durgapur 713212，印度西孟加拉邦，印度3号食品加工部，印度工程科学与技术研究院，北印度711111111111111.杜尔加普尔713212，印度西孟加拉邦5号土壤科学系，百夫长技术与管理大学，Paralakhemundi 761211，印度奥里萨邦6印度6日生理学系，Bankura基督教学院，Bankura 722101，印度西孟加拉邦； rajkumar@bankurachristiancolge.in 7纽约市技术学院，纽约市技术学院，纽约市大学（CUNY），布鲁克林，纽约州，11201，美国8美国艺术与科学学院，艺术与科学学院，阿德尔夫大学，阿德尔夫大学，纽约州加德市阿德尔夫大学，美国纽约州11530，纽约州9530，吉多利亚教育，吉多尔。美国纽约州11530，美国10号药物科学系，药学学院，德克萨斯州南部大学，德克萨斯州休斯敦，德克萨斯州77004，美国11号，美国宾夕法尼亚州匹兹堡大学手术系77004）; banerjeepradipto.123@gmail.com（P.B.）†这些作者为这项工作做出了同样的贡献。
从无DNA编辑的葡萄植物原生质体中的非晶体植物再生
新育种技术（NBT）在Vitis Vinifera中的应用非常需要引入有价值的特征，同时保留了精英品种的基因型。然而，由于外源性DNA的稳定整合，欧洲和其他国家 /地区的公众舆论和法律法规对NBT的广泛应用被公众舆论和法律法规所接受，这会导致可能受到嵌合的转基因植物。一种基于单细胞的方法，再加上CRISPR/CAS编辑机械的无DNA转染，构成了克服这些问题并保持整个生物体中原始遗传化妆的强大工具。我们在这里描述了一种成功的基于单细胞的无DNA无DNA方法，以获取编辑的葡萄植物，并从两个表格葡萄藤品种的胚胎愈伤组织中分离出来的原生质体（V. vinifera cv。深红色无籽和sugraone）。分别将重生的非晶体植物编辑为单个或双突变体，分别在腐烂的和粉状的米尔德易感基因，VVIDMR6和VVIMLO6上。
Crotalaria spp. 组织培养提取物作为
Crotalaria 属植物以其对线虫的拮抗作用而闻名。研究发现，吡咯里西啶生物碱是参与这种拮抗作用的主要代谢物。为了获得生物碱含量更高、作为生物杀线虫剂的潜力更大的提取物，我们研究了通过微繁体外培养的 Crotalaria juncea 和 Crotalaria ochroleuca 提取物的化学成分和杀线虫活性。值得注意的是，C. ochroleuca（致死浓度 95% (LC 95 ) = 157.7 μg mL -1 ）和 C. juncea（LC 95 = 189.9 μg mL -1 ）愈伤组织提取物对爪哇根结线虫表现出高毒性。超高效液相色谱与四极杆飞行时间高通量质谱 (UPLC-QTOF-MS E ) 分析表明，其中含有吡咯里西啶生物碱、黄酮、黄酮苷和异黄酮。这些发现凸显了与传统栽培植物相比，组织培养从 Crotalaria 物种中获取提取物的潜力，并且提供了具有杀线虫作用的更高浓度的代谢物，为可持续农业铺平了道路。
水稻中靶向、高效的序列插入和替换
CRISPR–Cas9 方法已被用于在植物中产生随机插入和缺失、大量缺失、短序列的靶向插入或替换以及精确的碱基变化 1 – 7 。然而，用于功能基因组学研究和作物性状改良所需的长序列和基因的靶向插入或替换的通用方法很少，并且很大程度上取决于选择标记的使用 8 – 11 。基于在哺乳动物细胞中开发的方法 12 ，我们利用化学修饰的供体 DNA 和 CRISPR–Cas9 将长达 2,049 个碱基对 (bp) 的序列（包括增强子和启动子）插入水稻基因组，效率为 25%。我们还报道了一种依赖于同源性定向修复、化学修饰的供体 DNA 和目标位点串联重复序列的基因替换方法，以 6.1% 的效率实现了长达 130 bp 的序列的替换。在哺乳动物细胞中，使用平端的、5'-磷酸化的双链寡脱氧核苷酸 (dsODN)，在两条 DNA 链的 5' 和 3' 端带有两个硫代磷酸酯键，可导致寡脱氧核苷酸 12 的强有力靶向整合。硫代磷酸酯键修饰旨在稳定细胞中的寡核苷酸，而 5'-磷酸化可促进非同源末端连接 (NHEJ)，这是修复双链断裂 (DSB) 的主要途径，尤其是在培养细胞中。在用于再生小植株的培养植物细胞中，例如水稻愈伤组织细胞，NHEJ 也是主要的 DSB 修复途径 10,13。因此，这种类型的修饰 dsODN 可能会提高植物细胞中靶向插入的效率。为了验证这一假设，从水稻ADH1（酒精脱氢酶1）14 的5′非翻译区（UTR）中取出一个60bp的翻译增强子（ADHE）作为供体DNA，插入水稻的主要耐盐基因座SKC1（补充表1）15。如图1a所示，体外合成的ADHE供体DNA两侧有两个带有硫代磷酸酯键和5′-磷酸化修饰的核苷酸（ADHE；见补充图1b）。为了与传统供体DNA进行比较，还合成了未修饰的单链和双链寡脱氧核苷酸（ssADHE和dsADHE），带有三核苷酸多态性以供检测（图1b和补充图1b）。设计了一个针对 5 ʹ UTR 的单向导 RNA (sgRNA) (sgRNA-1)，并将其构建到 CRISPR–Cas9 载体 pCBSG032 中（图 1c 和补充图 1a）。将三个供体 DNA 寡核苷酸按等摩尔比例混合，然后通过粒子轰击法将其与 CRISPR–Cas9 质粒 DNA (sgRNA-1) 一起引入中花 11 (ZH11) 水稻愈伤组织中。
一种高效的基于原生质体的葡萄属植物基因组编辑方案
CRISPR-Cas 技术可以对植物基因组进行精确修改，有望彻底改变农业。这些技术依赖于将编辑组件递送到植物细胞中以及再生完全编辑的植物。在无性繁殖植物（例如葡萄）中，原生质体培养是生产非嵌合和无转基因的基因组编辑植物的最佳途径之一。然而，植物从原生质体再生能力较差，阻碍了其用于基因组编辑的实施。在这里，我们报告了一种从来自多个葡萄品种的原生质体再生植物的有效方案。通过将原生质体封装在海藻酸钙珠中并与饲养层培养物共培养，原生质体分裂形成愈伤组织菌落，再生成胚胎并最终再生为植物。该方案成功应用于酿酒葡萄和鲜食葡萄（Vitis vinifera）品种，以及葡萄砧木和葡萄树野生近缘种 Vitis arizonica。此外，通过用 CRISPR-质粒或核糖核蛋白 (RNP) 复合物转染原生质体，我们在三个品种和 V. arizonica 中再生了 VvPHYTOENE DESATURASE 基因经过编辑的白化植物。结果揭示了该平台在促进葡萄属物种基因组编辑方面的潜力。
he愈的草药：Bacopa Monnieri（L.）Pennell的纯化和表征A乙酰胆碱酯酶抑制活性IM
Bacopa Monnieri（L。）Pennell（Brahmi）是一种用于减轻神经退行性疾病的药用植物。Monnieri的神经保护作用主要归因于Bacoside A的存在，Bacoside A是一种抑制阿尔茨海默氏病患者的主要植物核苷酸a，抑制淀粉样蛋白的聚集已知。由于Bacoside A也具有其他较少探索的生物活性，因此目前的研究旨在研究其乙酰胆碱酯酶抑制活性。基于溶剂极性梯度提取方法和二氧化硅 - 凝胶柱色谱法，已经开发了有效的高收益过程来获得纯化的Bacoside A。通过HPTLC量化了Bacoside A含量，并以93％的纯度获得了每克粗婆罗米提取物的34.6 mg Bacoside A含量。纯化的Bacoside A的特征是FT-IR和HR-ESI-MS。纯化的Bacoside a将42蛋白的聚集降低了78％。这也表现出高乙酰胆碱酯酶抑制活性，IC 50值为9.91µg/ ml。该化合物还显示出强大的DPPH自由基清除活性，IC 50值为29.22 µg/ml，而原始提取物为70.16 µg/ml，标准为259.68 µg/ml。它在硅测试中没有毒性。因此，通过抑制乙酰胆碱酯酶和A42聚集，纯化的Bacoside A作为药物成分具有双重潜力，可改善阿尔茨海默氏病的发作和进展。