CHMP 采纳积极意见,建议批准针对 COVID-19 的自扩增 mRNA 疫苗 KOSTAIVE®
使用凝胶提取的扩增子产物可能会导致测序性能降低,这是因为插入染料(如溴化乙锭)和暴露于紫外线辐射会造成固有的损坏。如果使用已用染料染色的凝胶提取产物,建议在文库制备和测序之前对其进行额外的扩增,以去除损坏和/或染料。
1美国约翰·霍普金斯大学生物物理学系,马里兰州巴尔的摩21218,美国2霍华德·休斯医学研究所和蜂窝和分子医学的医学研究所和计划约翰·霍普金斯大学生物学,马里兰州巴尔的摩,21218,美国5 Sharp Diagnostics,1812 Ashland Avenue,Baltimore,马里兰州21205,美国6美国6儿科学院,马萨诸塞州波士顿,马萨诸塞州,美国马萨诸塞州,02115,美国,美国,美国02115 (PCR)需要热循环以熔化DNA,并进行随后的指数扩增所需的DNA合成循环。以前,我们以增强的加工性和速度设计了一种超螺旋酶,以替代酶促DNA替代这种传统的PCR熔融步骤,同时保留所需的PCR特性,例如多-KB扩增子大小以及对克隆和基因编辑结果评估的适用性。这种等温扩增方法被称为Sharp(SSB-螺旋酶辅助快速PCR),因为单链DNA结合蛋白(SSB)和超螺旋酶被添加到标准的PCR试剂中。在这里,我们表明Sharp对于PCR无法放大或产生副产物的DNA序列有效。夏普被证明能够扩增多达601个核小体定位序列的六个相同的重复序列,并最多可扩大35个相同的Ankyrin序列重复序列。我们还表明,可以使用SHARP进行扩增91%AT-含量的序列,并且可以使用单分子光学镊子实验来验证放大产品。
从 700,000 名生物库参与者的数据中深入了解 DNA 重复扩增的原因和后果 Margaux LA Hujoel 1,2,3,*、Robert E. Handsaker 3,4,5、Nolan Kamitaki 1,2,3,6、Ronen E. Mukamel 1,2,3、Simone Rubinacci 1,2,3、Pier F. Palamara 7,8、Steven A. McCarroll 3,4,5、Po-Ru Loh 1,2,3,* 1 美国马萨诸塞州波士顿布莱根妇女医院和哈佛医学院医学系遗传学分部 2 美国马萨诸塞州波士顿布莱根妇女医院和哈佛医学院数据科学中心 3 美国马萨诸塞州剑桥麻省理工学院和哈佛大学布罗德研究所医学和群体遗传学项目 4 美国马萨诸塞州波士顿麻省理工学院和哈佛大学布罗德研究所斯坦利精神病学研究中心。 5 美国马萨诸塞州波士顿哈佛医学院遗传学系。 6 美国马萨诸塞州波士顿哈佛医学院生物医学信息学系 7 英国牛津大学统计学系 8 英国牛津大学人类遗传学中心* 通讯作者:mhujoel@broadinstitute.org (MLAH),poruloh@broadinstitute.org (P.- RL) 摘要串联 DNA 重复的扩增和收缩是人类群体和人类组织中遗传变异的来源:一些扩增的重复会导致遗传疾病,一些还会造成体细胞不稳定。我们分析了来自英国生物银行和“我们所有人”研究计划中 700,000 多名参与者的血细胞的 DNA 序列数据,并开发了新的计算方法来识别、测量和学习 15 个高度多态性的 CAG 重复位点的 DNA 重复不稳定性。我们发现,即使对于相同长度的等位基因,这 15 个基因座的扩张和收缩率也差异很大;不同基因座的重复序列在生殖系和血液中也表现出差异很大的相对突变倾向。TCF4 重复序列的高度体细胞不稳定性使得全基因组关联分析成为可能,该分析确定了七个基因座,在这些基因座上,遗传变异会调节血细胞中的 TCF4 重复不稳定性。其中三个相关基因座所含基因( MSH3 、 FAN1 和 PMS2 )也会调节亨廷顿氏病的发病年龄以及血液中 HTT 重复的体细胞不稳定性;然而,特定的遗传变异及其效应(不稳定性增加或减少)似乎是组织特异性和重复特异性的,这表明不同组织中的体细胞突变(或同一组织中不同重复的体细胞突变)是独立进行的,并受截然不同的遗传变异的控制。其他修饰基因位点包括 DNA 损伤反应基因 ATAD5 和 GADD45A。分析 DNA 重复扩增并结合临床数据显示,谷氨酰胺酶 (GLS) 基因 5' UTR 中的遗传重复与 5 期慢性肾脏疾病 (OR=14.0 [5.7–34.3]) 和肝脏疾病 (OR=3.0 [1.5–5.9]) 相关。这些结果和其他结果都指出了人类群体和整个人类生命周期中 DNA 重复的动态。
bitBiome Inc. 电子邮件:service@bitbiome.co.jp 网站:https://www.bitbiome.co.jp/ 日本东京新宿区早稻田鹤卷町 513 号 162-0041 早稻田大学第 121 栋 415 室
摘要#1875257 Sarah B Kingan 1、Guilherme De Sena Brandine 1、Jocelyne Bruand 1、Jeff Zhou 1、Valeriya Gaysinskaya 1、Janet Aiyedun 1、Julian Rocha 1、Duncan Kilburn 1、Egor Dolzhenko 1、Zoi Kontogeorgiou 2、Anita Szabo 3, Christina Zarouchlioti 3, Robert Thaenert 4, Pilar Alvarez Jerez 5, Kimberley Billingsley 5, Sonia Lameiras 6, Sylvain Baulande 6, Alice Davidson 3, Georgios Koutsis 7, Georgia Karadima 2, Stéphanie Tomé 8, Michael A Eberle 1 1. Pacific Biosciences (PacBio),门洛帕克,美国、2. 雅典国立卡波迪斯特里安大学,第一神经病学系,希腊雅典,3. 伦敦大学学院,眼科研究所,英国,4. Quest Diagnostics,马尔伯勒,美国,5. 美国国立卫生研究院,阿尔茨海默病和相关痴呆症中心,国家老龄化研究所,贝塞斯达,美国,6. 居里研究所,PSL 研究大学,ICGex 下一代测序平台,法国巴黎,7. 雅典国立卡波迪斯特里安大学,神经遗传学科,第一神经病学系,Eginition 医院,医学院,希腊雅典 8. 索邦大学,法国国家健康与医学研究院,肌肉学研究所,肌肉学研究中心,法国巴黎
1 法国图卢兹图卢兹大学医院心脏病学系,心脏医学研究所,临床生物治疗研究中心 1436,INSERM I2MC 1297;2 法国蒙彼利埃蒙彼利埃大学医院心脏病学系;3 法国斯特拉斯堡中央医院公共卫生中心 GMRC;4 意大利米兰 Monzino IRCCS 心脏病学中心血管生物学和再生医学科;5 意大利米兰大学生物医学、外科和牙科科学系;6 法国佩萨克 Haut-Leveque 医院介入心脏病学和重症监护系;7 法国米卢斯 CellProthera;8 法国卡昂大学医院心脏病学系; 9 诺曼底大学核医学系,UNICAEN,CHU de Caen Normandie,法国卡昂; 10 核医学和 Nancyclotep 实验平台,CHRU-Nancy,洛林大学,南锡,法国; 11 西奈山富斯特心脏医院,西奈山伊坎医学院,纽约州,美国; 12 哈佛医学院布莱根妇女医院心血管科,美国马萨诸塞州波士顿; 13 法国巴黎 Pitié- Salpêtrière 医院心脏病科; 14 英国心脏基金会卓越研究中心,爱丁堡大学,英国爱丁堡; 15 洛林大学,Inserm,Centre d ' Investigations Cliniques Pluithématique 1433,Centre Hospitalier Régional Universitaire de Nancy,南锡,法国
• 对整个实验室进行消毒,包括移液器的内部和外部(对移液器进行消毒时应特别小心,例如确保所有清洁步骤后都进行多次蒸馏水冲洗步骤,以确保消除抑制剂残留物)、实验室设备和仪器,并按照其清洁程序进行擦拭测试。重复此操作,直到实验室所有区域均为阴性。
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