1 1,大阪大学医学院,日本大阪苏萨医学院研究生院,2临床基因组学系,大阪大学医学院,日本大阪市苏亚,大阪,日本大阪,3临床研究支持中心,Wakayama医科医院,Wakayama,Wakayama,Wakayama,日本Wakayama,日本Wakayama,4 5繁殖医学系东京繁殖诊所东京诊所,日本东京北部,日本6号生物医学统计司,大阪大学医学院综合医学系,大阪苏卡,日本大阪苏亚卡,日本环境医学和人口服务部7司1,大阪大学医学院,日本大阪苏萨医学院研究生院,2临床基因组学系,大阪大学医学院,日本大阪市苏亚,大阪,日本大阪,3临床研究支持中心,Wakayama医科医院,Wakayama,Wakayama,Wakayama,日本Wakayama,日本Wakayama,4 5繁殖医学系东京繁殖诊所东京诊所,日本东京北部,日本6号生物医学统计司,大阪大学医学院综合医学系,大阪苏卡,日本大阪苏亚卡,日本环境医学和人口服务部7司
排卵诱导是对需要生育援助的PCOS患者的成功治疗方法,因为排卵功能障碍是该病情诊断的标准之一。在后一个成熟阶段时,低水平的FSH和肛门卵泡生长的停止与PCOS患者的发型有关。这种机制可能直接或间接地受到一种或另一种方式的雄激素,LH和胰岛素的过量产生,从而促进类固醇生成,但会抑制卵泡发育。Clomiphene Citrate,这是一种仅是部分选择性的雌激素受体调节剂,仍然是排卵诱导的首选药物(10)。作为雌激素受体拮抗剂,克罗米芬柠檬酸盐反对雌激素信号传导途径的负反馈,从而增加了FSH的可用性。通过FSH的升高增强了卵泡的生长,这在LH潮和排卵过程中达到了顶峰。 此外,低剂量促性腺激素治疗可以促进单粉状形成和排卵诱导(11)。通过FSH的升高增强了卵泡的生长,这在LH潮和排卵过程中达到了顶峰。此外,低剂量促性腺激素治疗可以促进单粉状形成和排卵诱导(11)。
体外研究证实,M07可以在胃肠道内生存和增殖。balb/c小鼠在卵蛋白(OVA)Challenge之前和之后均给予M07。评估了OVA特异性免疫球蛋白(IG)E和IgG1的血清水平,以及支气管肺泡灌洗液中的炎性细胞和细胞因子以及肺组织的组织病理学检查。与安慰剂(PLA)组相比,用M07处理的小鼠表现出明显较低的OVA特异性IgE和IgG1(P <0.01)。与PLA组相比,预处理(PER)组和经后处理后(POS)组的嗜酸性粒细胞和中性粒细胞的计数也显着降低(P <0.01)。对肺组织的组织学分析验证了M07对炎症的保护作用,示例表现为炎症细胞的浸润降低。 此外,PE和POS组中的小鼠的IL-10水平显着增加(P <0.01),并且显着降低了IL-5,IL-13,MCP-1,Eotaxin,Eotaxin和肿瘤坏死因子-α的水平(P <0.01)。对肺组织的组织学分析验证了M07对炎症的保护作用,示例表现为炎症细胞的浸润降低。此外,PE和POS组中的小鼠的IL-10水平显着增加(P <0.01),并且显着降低了IL-5,IL-13,MCP-1,Eotaxin,Eotaxin和肿瘤坏死因子-α的水平(P <0.01)。
抑制素是一种二聚体糖蛋白,由𝛼和两个亚基组成。针对二聚体抑制素的免疫主要用于辅助生殖技术中以诱导超排卵。但免疫反应性的游离抑制素𝛼亚基的具体功能仍不清楚。在本研究中,使用针对游离抑制素𝛼亚基(Pro-𝛼 N-𝛼 C)的新型单克隆抗体进行了两项主要研究(第一项研究排卵,另一项研究受精)。排卵研究重复进行了 6 次,共涉及 48 只 4-6 周龄雌性 CD1 小鼠。在每个重复中,4 只对照小鼠接受 PMSG/hCG 治疗,4 只治疗小鼠接受含有 mAb-游离𝛼亚基的 PMSG/hCG。受精研究重复进行了 3 次,共涉及 22 只雌性 CD1 小鼠。在每个重复实验中,对照组和治疗组分别有 4、3 和 4 只小鼠。在这两项研究中,雌性小鼠腹膜内注射 50 单位/毫升孕马血清促性腺激素 (PMSG),单独注射或与 400ug mAb-Free 𝛼 亚单位联合注射,然后在 48 小时后注射 50 单位/毫升人绒毛膜促性腺激素 (hCG)。注射后 17 小时,所有组的雌性小鼠都被处死,并从输卵管中收集排卵的卵母细胞。对于受精研究,使用雄性 CD1 小鼠的新鲜精子进行体外受精。结果表明,与对照组相比,游离抑制素 𝛼 亚基的中和显著降低了排卵率 47.29%,而与对照组相比,免疫中和显著提高了受精率 55.68%,囊胚发育率 43.85%。这项研究表明,与二聚体抑制素的免疫中和效果相反,针对游离抑制素 𝛼 亚基的免疫会减少排卵。作者假设游离 𝛼 亚基可能起到抑制素拮抗剂的作用,与抑制素竞争与其共受体的结合。关键词:激活素、β-聚糖、受精、免疫中和、抑制素、排卵
• LH 诱导的 NPR2 去磷酸化可能不是由 PPP 家族磷酸酶活性的变化介导的。 • GSK3A/B 是 NPR2 调节位点的候选激酶。 • LH/PKA 信号传导使 GSK3A/B 上的抑制位点磷酸化。 • GSK3 的抑制剂会导致 NPR2 去磷酸化和 NEBD。 未来方向 • 使用 GSK3A(全局);GSK3B(颗粒特异性)敲除小鼠来测试 GSK3 是否是维持 NPR2 磷酸化所必需的。 • 使用 GSK3A-S21A/S21A;GSK3B-S9A/S9A 12 突变小鼠来测试 GSK3A/B 磷酸化是否是 LH 诱导的 NPR2 去磷酸化和减数分裂恢复所必需的。
Judy Hallett 在基因编辑小鼠模型领域拥有 25 年的从业经验,在生殖生理学领域拥有 33 年的从业经验。在获得麦吉尔大学物理学和生殖生理学学位后,她管理了昆士兰州的转基因动物服务中心,专门从事转基因小鼠的原核注射。她在普渡大学拓展了自己的专业知识,管理转基因小鼠核心设施,并采用了各种技术。Judy 还在托马斯·杰斐逊研究所工作过一段时间,专注于大鼠的原核微注射。她的研究涵盖 ZFN、TALEN 和 CRISPR 技术。
超排卵和体外受精 (IVF) 等生殖技术已广泛用于产生转基因动物。目前小鼠超排卵的黄金标准是使用马绒毛膜促性腺激素 (eCG) 和人绒毛膜促性腺激素 (hCG) 的一致治疗。最近报道了一种使用抑制素抗血清 (IAS) 代替 eCG 的替代方法。在这里,我们评估了 C57BL/6J 和 B6D2F1 小鼠中的不同超排卵策略。首先,我们发现使用 5 周大的 C57BL/6J 和 4 周大的 B6D2F1 捐赠者可以获得更好的超排卵结果。然后,我们比较了两种小鼠品系中不同剂量的 eCG - hCG、IAS - hCG 和 eCG - IAS - hCG。使用 IAS - hCG 和 eCG - IAS - hCG 方法获得的卵母细胞数量显著增加。然而,自然交配时受精率较低(36.3 – 38.8%)。我们随后证实,IVF 可以显著提高受精率,最高可达 89.1%。最后,我们进行了 CRISPR-Cas9 介导的基因组编辑,以 Scn11a 和 Kcnh1 基因座为目标,并成功使用 eCG – hCG 和 IAS – hCG 诱导的受精卵获得了突变幼崽,这些幼崽通过自然交配或 IVF 受精。我们的结果表明,IAS 是一种很有前途的超排卵试剂,使用 IAS 诱导的受精卵不太可能影响基因组编辑的效率。