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CRISPR/CAS9基于杂交瘤细胞中免疫球蛋白基因座的工程。加尔，C.M。 le; F.L. Fennemann； Schoot，J.M.S。 van der; Scheeren，F.A。； Verdo
Köhler和Milstein（1975）对杂交瘤技术的开发通过在研究和开发工作中的常规使用单克隆抗体（MAB）来彻底改变了免疫学领域，从而导致了他们今天在诊所的成功应用。 尽管需要重组良好的制造实践生产技术来生产临床级别的mAB，但学术实验室和生物技术公司仍然依靠原始的杂交瘤系列来稳定而轻松地以适度的价格生产高抗体产量。 在我们自己的工作中，我们在使用杂交瘤衍生的mAB时面临着一个主要问题：无法控制产生的抗体形式，这是重组产生确实允许的灵活性。 我们着手通过直接在杂交瘤细胞的免疫球蛋白（IG）基因座中的基因工程抗体来消除这一障碍。 我们使用了簇状的定期间隔短的短膜重复序列（CRISPR）/CRISPR相关蛋白9（CAS9）和同源指导修复（HDR）来修改抗体的格式[mAb或抗原结合片段（FAB'）]和同型。 本协议在几乎没有动手的时间内描述了一种直接的方法，导致稳定的细胞系分泌高水平的工程抗体。 亲本杂交瘤细胞保持在培养中，并用针对IG基因座感兴趣的指导RNA（GRNA）转染了IG基因座和HDR模板，以敲击所需的插入物和抗生素耐药性基因。 通过施加抗生素压力，在遗传和蛋白质水平上扩展并表征抗性克隆，以产生改良的mAb而不是亲本蛋白。Köhler和Milstein（1975）对杂交瘤技术的开发通过在研究和开发工作中的常规使用单克隆抗体（MAB）来彻底改变了免疫学领域，从而导致了他们今天在诊所的成功应用。尽管需要重组良好的制造实践生产技术来生产临床级别的mAB，但学术实验室和生物技术公司仍然依靠原始的杂交瘤系列来稳定而轻松地以适度的价格生产高抗体产量。在我们自己的工作中，我们在使用杂交瘤衍生的mAB时面临着一个主要问题：无法控制产生的抗体形式，这是重组产生确实允许的灵活性。我们着手通过直接在杂交瘤细胞的免疫球蛋白（IG）基因座中的基因工程抗体来消除这一障碍。我们使用了簇状的定期间隔短的短膜重复序列（CRISPR）/CRISPR相关蛋白9（CAS9）和同源指导修复（HDR）来修改抗体的格式[mAb或抗原结合片段（FAB'）]和同型。本协议在几乎没有动手的时间内描述了一种直接的方法，导致稳定的细胞系分泌高水平的工程抗体。亲本杂交瘤细胞保持在培养中，并用针对IG基因座感兴趣的指导RNA（GRNA）转染了IG基因座和HDR模板，以敲击所需的插入物和抗生素耐药性基因。通过施加抗生素压力，在遗传和蛋白质水平上扩展并表征抗性克隆，以产生改良的mAb而不是亲本蛋白。最后，修饰的抗体在功能测定中的表征。To demonstrate the versatility of our strategy, we illustrate this protocol with examples where we have (i) exchanged the constant heavy region of the antibody, creating chimeric mAb of a novel isotype, (ii) truncated the antibody to create an antigenic peptide-fused Fab' fragment to produce a dendritic cell–targeted vaccine, and (iii) modified both the constant heavy (CH)1 domain of the heavy chain （HC）和恒定的Kappa（Cκ）轻链（LC）引入位点选择性修饰标签，以进一步衍生纯化的蛋白质。仅需要标准的实验室设备，这有助于其在各种实验室中的应用。我们希望该协议能够进一步传播我们的技术并帮助其他研究人员。
![vaxzevria，covid-19疫苗（chadox1-s [重组]）](/simg/5\50164265f219e6541c7a75fda55d400724778f53.webp)
vaxzevria，covid-19疫苗（chadox1-s [重组]）
该药物需要进行额外的监测。这可以快速识别有关安全的新知识。您可以通过报告发生的每个副作用来提供帮助。注释有关副作用的消息，请参见第4部分。在使用此疫苗之前，请仔细阅读整个软件包插入物，因为它包含重要信息。- 使用包装插入。也许您想稍后再阅读。- 如果您还有其他问题，请与您的医生，药剂师或医务人员联系。- 如果您注意到副作用，请与您的医生，药剂师或医务人员联系。这也适用于此软件包插入中未指定的副作用。请参阅第4节。此软件包中的内容插入1。什么是vaxzevria，它是用什么？2。在获得Vaxzevria之前，您应该知道什么？3。如何使用vaxzevria？4。可能有什么副作用？5。如何保存Vaxzevria？6。包装的内容和更多信息1。什么是vaxzevria，它是用什么？vaxzevria用于预防由SARS-COV-2病毒引起的冠状病毒19疾病（Covid-19）。vaxzevria用于18岁及以上的成年人。该疫苗的任何成分都无法触发COVID-19。疫苗意味着免疫系统（人体的自然防御系统）产生抗体和专门的白色血细胞，从而攻击病毒，从而防止COVID-19。2。在获得Vaxzevria之前，您应该知道什么？不得使用疫苗： - 如果您对第6节中提到的该疫苗的活性成分或其他成分之一过敏； - 如果您在使用Vaxzevria（血栓形成 - 细胞 - 脑膜细胞综合征，TTS）之后出现低水平的血液； - 如果您曾经诊断出毛细血管泄漏综合征（一种从小血管中逸出的疾病）。警告和预防措施，请在收到Vaxzevria之前与您的医生，药剂师或医务人员交谈： - 如果您在另一次疫苗注射后或过去使用Vaxzevria后，您曾经对过敏性反应很难。
b"oxygen diffusion, creating an oxygen gradient throughout the coculture chamber. Basolateral gas flow containing 10% oxygen enters through the gas inlet , spreading evenly through the asymmetric coculture chamber with a magnetic stirrer . Exhaust gas is discharged through the gas outlet , completing the system's airflow (Fofanova et al., 2019). The figure was created using BioRender. (B) A physical picture of不对称的共培养室（C）在24小时内将FITC-二克的荧光强度添加到含有TIGK单层的Transwells的顶端腔室后的基底外侧。 \ XE2 \ X80 \ X9CNOROMOXIC \ XE2 \ X80 \ X9D与不对称培养条件下的差异化Tigks进行了比较（称为\ XE2 \ X80 \ x80 \ x9casymmmetric \ xe2 \ xe2 \ x80 \ x80 \ x9d）。在切换到含有Ca 2+的分化培养基之前，未分化的TIGK单层在正常氧条件下培养。 （N.S。：P> 0.05，***：P <0.001，n = 2技术重复，n = 3个生物重复序列）。 （d）在固定培养培养基培养基培养基中，在常氧培养基中维持的Transwell插入物中的Tigk单层的形态或在非对称共培养室中培养的24小时。已知胶原蛋白会影响明亮的田间成像
b“氧扩散，在整个共培养室中产生氧梯度。含有10％氧气的基底外侧气流通过气体入口进入，并用磁性搅拌器均匀地通过不对称的共培养室扩散。排气通过气体插座排放，完成了系统的气流（Fofanova等，2019）。该图是使用生物者创建的。（b）不对称共培养室的物理图片。（c）在将FITC-DEXTRAN添加到包含Tigk单层的Transwells的顶端室后，在24小时内比较了基底外侧室内FITC-脱骨的荧光强度。在常规氧培养条件下未分化（阴性对照）和分化的Tigks（称为\ XE2 \ X80 \ X9CNORMOXIC \ XE2 \ X80 \ X9D）与在不对称培养条件下的分化Tigk（称为AS AS AS） \ xe2 \ x80 \ x9casymmetric \ xe2 \ x80 \ x9d）。对于每种条件，减去空白培养基的背景荧光强度。未分化的TIGK单层在正常氧状态下培养，然后切换为包含Ca 2+的分化培养基，用作负面对照。（N.S.：p> 0.05，***：p <0.001，n = 2技术重复，n = 3个生物重复序列）。（e）在常氧和不对称培养条件下培养的TIGK单层中细胞活力的比较。热处理细胞是阴性对照（N.S.：p> 0.05，**：p <0.01，n = 3，n = 3）。（d）Transwell插入物中的Tigk单层的形态在正常氧化条件下维持在细胞培养培养基中，或在不对称的共培养室中培养24小时。已知胶原蛋白由于胶原纤维的存在而影响明亮的田间成像，与未涂层的表面相比，该胶原纤维可能会掩盖所观察到的细胞或结构的细节（Hashimoto等，2020）。
肺炎球菌缀合物疫苗 - 20 Valent（Pneu-C-20）
肺炎球菌疾病是由细菌链球菌（S.）肺炎引起的。肺炎球菌感染的范围从耳朵和鼻窦感染到肺炎和血流感染。侵袭性肺炎球菌疾病（IPD）会引起更严重的疾病，并且在幼儿，老年人以及具有潜在的医疗或生活状况的患者中，疾病的频率更高。IPD是全球疾病和死亡的主要原因。2。PNEU-C-20疫苗的含量是什么？这种疫苗通过帮助人体制造自身的抗体来保护肺炎球菌疾病。该疫苗含有与与载体蛋白（白喉毒素）相关的肺炎球菌细菌的蛋白质材料，可保护20种类型的肺炎球菌细菌。它是一种灭活的疫苗，不含任何活细菌。存在非中性成分的痕迹，以保持疫苗稳定，无菌并帮助其更有效。产品插入物中包含了目录的完整清单，可以从免疫提供者请求。疫苗内没有抗生素，在用于疫苗的预注射器中没有乳胶。3。这种疫苗可能有什么反应？如何管理？最常见的副作用发生在注射后24-48小时内，包括注射部位的肿胀，发红和压痛。降低食欲，烦躁，腹泻，呕吐，皮疹，头痛，肌肉或关节疼痛，睡眠方式变化，嗜睡和发烧也可能发生。不必在每种免疫下给予对乙酰氨基酚。如果一个人在接受疫苗后会出现不适或发烧，则对乙酰氨基酚可以缓解这些症状。免疫接种后有时可能会发生其他副作用 - 如果您遇到上面未列出的任何副作用，或者有疑问或疑虑与您的医疗保健专业人员交谈。最严重但最罕见的副作用是一种严重的过敏反应（过敏反应），可能会威胁生命，通常发生在接种疫苗后的15-20分钟内。可以通过肾上腺素来快速响应过敏反应的程序。
b'听力测试纯音测听（听力测试）此测试确定您能听到声音的音量必须达到多大。测试期间，将以不同音量呈现低频和高频音调。您将被要求确认何时能够听到声音。测试将单独评估每个频率。测试将使用插入式耳机（放入耳道的泡沫插入物）、耳罩和/或耳后骨头进行。这允许测试确定听力问题是源于内耳故障（感音神经性听力损失）还是源于声波传输到内耳的问题（传导性听力损失）或两者兼而有之（混合性听力损失）。在许多情况下，有必要将声音或噪音引入未测试的耳朵。这种分散注意力的方式使听力学家能够确保在评估的耳朵中听到测试音。 （时间 20 到 30 分钟）言语听力测试 这些测试用于评估您的耳朵对所听到内容的理解能力。 通过耳机或扬声器呈现两组不同的单词列表。 一种测试以不同的响度级别管理单词列表。 它用于确定您的耳朵第一次接收语音的声级。（言语接收阈值） 第二组单词使用纯音听力检查中确定的阈值来设置呈现的声级。 这样，我们可以确定您的耳朵听到了这些单词。 然后，通过呈现一组单词，我们可以确定您的耳朵对所听到内容的理解能力。（言语辨别分数）（时间 15 到 20 分钟） 阻抗和声反射测试 这组测试用于评估中耳结构和听觉神经的声音传输特性、耳咽管的工作情况、中耳肌肉的工作情况以及中耳压力的状态。 将一个小耳塞插入耳道。耳中会传来低沉的嗡嗡声。嗡嗡声的响度可能有所不同，有时听起来可能很大。此外，还会引入微小的压力变化。这些测试中获得的信息不需要您的回应。（时间 15-20 分钟）'
b'听力测试纯音测听（听力测试）此测试确定您能听到声音的音量必须达到多大。测试期间，将以不同音量呈现低频和高频音调。您将被要求确认何时能够听到声音。测试将单独评估每个频率。测试将使用插入式耳机（放入耳道的泡沫插入物）、耳罩和/或耳后骨头进行。这允许测试确定听力问题是源于内耳故障（感音神经性听力损失）还是源于声波传输到内耳的问题（传导性听力损失）或两者兼而有之（混合性听力损失）。在许多情况下，有必要将声音或噪音引入未测试的耳朵。这种分散注意力的方式使听力学家能够确保在评估的耳朵中听到测试音。 （时间 20 到 30 分钟）言语听力测试 这些测试用于评估您的耳朵对所听到内容的理解能力。 通过耳机或扬声器呈现两组不同的单词列表。 一种测试以不同的响度级别管理单词列表。 它用于确定您的耳朵第一次接收语音的声级。（言语接收阈值） 第二组单词使用纯音听力检查中确定的阈值来设置呈现的声级。 这样，我们可以确定您的耳朵听到了这些单词。 然后，通过呈现一组单词，我们可以确定您的耳朵对所听到内容的理解能力。（言语辨别分数）（时间 15 到 20 分钟） 阻抗和声反射测试 这组测试用于评估中耳结构和听觉神经的声音传输特性、耳咽管的工作情况、中耳肌肉的工作情况以及中耳压力的状态。 将一个小耳塞插入耳道。耳中会传来低沉的嗡嗡声。嗡嗡声的响度可能有所不同，有时听起来可能很大。此外，还会引入微小的压力变化。这些测试中获得的信息不需要您的回应。（时间 15-20 分钟）'
休眠肿瘤通过通过DKK3
引言Gaucher病（GD）在Ashkenazi犹太人中有800名中的1例，在一般人群中有1,000-50,000中的1个。它是由GBA基因中的突变引起的，该突变编码为葡萄糖酶酶（GCASE）。gcase参与糖磷脂分解代谢，从葡萄糖基层（GLCCCER）裂解葡萄糖以产生神经酰胺（CER）。GLCCER也可以通过酶酸神经酰胺酶转化为葡萄糖基肾上腺素（GLC-SPH）（2）。在GD中，表示不足的GCASE，导致GLCCER和GLCSPH的积累（3-5）。GD的特征是肝肾上腺肿，细胞质，贫血和骨骼疾病（1、6、7）。GD的最低严重表现，1型GD通常与神经系统症状无关，而这种疾病类型的个体寿命最长。但是，GD类型2和3是神经性的。2型GD是最严重的疾病类型，可以导致肝肾上腺全球，蛋白石，呼吸暂停，鳞茎症状，囊瘫痪和肌阵挛性癫痫，但骨骼疾病不存在（1，7）。症状发作往往在3-6个月大时发生，中位寿命为9个月（1，7）。在3型GD中，症状通常为20岁，其中一半的患者在2（7）之前出现。具有3型GD的人可能会活到成年早期（1）。症状差异很大，可能包括肝脾肿大，细胞质，贫血，骨骼疾病，眼科，眼科，脑畸形，脑畸形，小脑共济失调，肌阵挛性癫痫和痴呆症（7）。在小鼠中，GLCCER向CER的转化对于表皮成熟至关重要（9）。在小鼠中，GLCCER向CER的转化对于表皮成熟至关重要（9）。首次尝试在小鼠中建模GD的尝试导致出生后不久导致的致死性，这是由于整个皮肤屏障的迅速流失（8）。GBA-NULL等位基因阻止了这种转换，从而阻碍了表皮屏障的发展。插入物的寿命相似，由于皮肤缺陷相似（10）。其他点突变（V394L，D409H和D409V）导致寿命更长
使用元基因组采矿方法从高山土壤的质体中寻找新的降解酶
塑料材料，包括微塑料，即使在欧洲阿尔卑斯山等偏远和寒冷的环境中也积聚在所有类型的生态系统中。这种污染对环境和人类构成了风险，需要解决。使用大约3,000 m a.s.l.的东部瑞士阿尔卑斯山收集的土壤的shot弹枪DNA宏基因组学，我们确定了可能降解塑料的基因及其蛋白质。我们通过差异丰度分析筛选了质体和大块土壤的宏基因组，并与专门针对推定的塑料降解基因的特定数据库进行了基于相似性的筛选，并选择了具有信号肽的高概率的基因，用于信号肽的细胞外导出和高信任的功能率。此过程导致了9个候选基因的最终列表。预测蛋白的长度在425至845个氨基酸之间，预测产生这些蛋白质的属主要属于Caballeronia和Bradyrhizobium。我们使用异源表达进行了功能验证，然后进行上清液的酶测定。测试的九种蛋白质中的五种显示出我们使用酯酶测定时的活性显着增加，而从候选基因（一种水解酶型酯酶）中的五种蛋白质中的一种显然具有最高的活性，高于双倍以上。，我们仅用来自酯化酯酶测定中五个候选基因的蛋白质对塑料类型的塑料降解和生态®进行荧光测定，但是像阴性对照一样，这些蛋白质并未显示出任何偶尔的活性。相比之下，阳性对照的活性（包含文献中已知的Pla降解基因插入物）是阴性对照的20倍以上。这些发现表明，在计算机筛选中进行功能验证，适合查找新的降解酶。尽管我们只发现了一种新的酯酶酶，但我们的方法有可能应用于任何类型的土壤和各种生态系统中的塑料，以快速有效地寻找新的塑料降解酶。
RS3PE综合征，其随后由长期DPP-4抑制剂使用
在MRI和高血清血管内皮生长因子（VEGF> 1,000 pg/mL）上流动的流动组织。我们的案例满足了RS3PE的以下诊断标准：双边手的背面上有斑点水肿，年龄> 50岁和血清牙性[2,9,10]。rs3pe综合征已报道是糖尿病的并发症[5]和DPP-4I的副作用[10]。在2015年6月，日本DPP-4i的包装插入物添加了副作用。美国食品药品监督管理局还警告说，服用DPP-4I时疼痛[11]。涉及口服西他列汀，萨克萨拉汀，林格列汀和阿伏丁素的病例，在停职后一个月内消失了联合症状[10]。AS DPP-4与各种免疫功能有关，尽管该机制的细节仍然未知，但已假设了与PMR等胶原蛋白疾病（如PMR）的关联。DPP-4是CD26分子的组成部分，它是参与T细胞激活的共同刺激分子，存在于淋巴细胞T细胞，血管内皮，皮肤，肠和肾脏的表面上。AS CD26在外细胞膜上包含DPP-4，裂解趋化因子和肽（例如肠凝结蛋白），并在T细胞激活中发挥作用，人们担心其对免疫系统功能的影响。DPP-4抑制作用可能导致基质衍生因子1（SDF-1）和VEGF表达的增加，与RS3PE综合征的滑膜炎症特征有关[12]。DPP-4I是常见的2型糖尿病治疗。糖尿病患者的血液水平高1DF-1，类风湿关节炎的风险更高。因此，与健康个体相比，糖尿病患者患RS3PE综合征的风险也被认为升高了[13]。因此，RS3PE综合征的发生率（目前很少）以及其他风湿病的发生率将增加。以前的文献没有报道由DPP-4抑制剂随后发展到PMR引起的RS3PE综合征之间的关联。其他风湿病并发症的后来出现表明，即使停产DPP-4I，持续监测对于RS3PE综合征患者也很重要。
基于虚拟计算机断层扫描系统
摘要。本文介绍了一种估算从重建的CT图像本身的诊断能量范围内计算机断层扫描（CT）的X射线能谱的方法。为此，开发了一个虚拟CT系统，并生成了由相应能量光谱标记的γ幻影的CT图像。使用这些数据集，对人工神经网络（ANN）模型进行了训练，从而从伽马克式插入物中的CT值重现了能量谱。在实际应用中，在虚拟CT系统中使用了基于铝的弓形滤波器，并且还开发了带有弓箭滤波器的ANN模型。没有/带有弓形滤波器的ANN模型都可以估计协议中的X射线频谱，该X射线频谱被定义为减去绝对误差，平均超过80％。 协议随着管电压的增加而增加。 当CT图像上的噪声量相当大时，估计偶尔会不准确。 的图像质量具有超过10的信号噪声比，对于γ幻影的基本材料，需要准确预测光谱。 基于从Acivion16（日本佳能医疗系统）获得的实验数据，带有弓形滤波器的ANN模型通过同时优化弓箭滤网的形状，从而产生了合理的能量谱。没有/带有弓形滤波器的ANN模型都可以估计协议中的X射线频谱，该X射线频谱被定义为减去绝对误差，平均超过80％。协议随着管电压的增加而增加。当CT图像上的噪声量相当大时，估计偶尔会不准确。的图像质量具有超过10的信号噪声比，对于γ幻影的基本材料，需要准确预测光谱。基于从Acivion16（日本佳能医疗系统）获得的实验数据，带有弓形滤波器的ANN模型通过同时优化弓箭滤网的形状，从而产生了合理的能量谱。目前的方法仅需要用于伽马克式幻影的CT图像，并且没有特殊的设置，因此预计它将很容易应用于临床应用中，例如梁硬化减少，CT剂量管理和材料分解，所有这些都需要有关X射线能量频谱的精确信息。
senvelgo deleder.pdf
重要的安全信息：Senvelgo®（Velagliflozin口服溶液）被指出可以改善以前未用胰岛素治疗的糖尿病健康猫的血糖控制。在使用此产品之前，重要的是阅读整个产品插入物，包括盒装警告。用senvelgo治疗的猫可能会增加患糖尿病性酮症酸中毒或尿糖症糖尿病性酮症酸中毒的风险，这两者都可能导致死亡。应及时治疗这些疾病的发展，包括胰岛素给药和中断Senvelgo。请勿在糖尿病中使用senvelgo，这些猫以前曾接受过接受胰岛素或胰岛素依赖性糖尿病的猫治疗的糖尿病。在患有胰岛素依赖性糖尿病的猫中使用senvelgo，或戒除胰岛素和开始的开始，与糖尿病性酮症酸中毒或eug糖症糖尿病性酮症酸酸病和死亡的风险增加有关。突然发作症患者/厌食症，嗜睡，嗜睡，脱水或体重减轻，无论血糖水平如何，接受senvelgo的猫应立即促使对senvelgo立即中断和评估糖尿病性酮症酸中毒。senvelgo不应在患有酮尿，酮症，胰腺炎，胰腺炎，厌食症，脱水或嗜睡的猫中启动，因为它可能表明存在其他并发性疾病并增加糖尿病酸病的风险。将Senvelgo留在一个安全的位置，远离儿童，狗，猫和其他动物，以避免意外摄入或过量服用。有关更多安全信息，请参考包装插入。重要的安全信息：Prozinc®（精神锌重组人胰岛素）仅用于猫和狗。患有严重酮症酸中毒，厌食症，嗜睡和/或呕吐的动物应使用短作用胰岛素和适当的支持疗法稳定，直到稳定病情。与所有胰岛素产品一样，仔细的患者监测低血糖和高血糖对于获得和维持足够的血糖控制并防止相关并发症至关重要。过量会导致深远的低血糖症和死亡。应避免孕激素和糖皮质激素使用。prozinc胰岛素在低血糖症和对精蛋白锌重组人胰岛素敏感的猫和猫中禁忌症。有关更多信息，请参阅猫的封闭式完整处方信息。