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World File Search System敲门
AI正在敲门网络研讨会议程
与我们一起与Beebot AI进行了深刻的见解，在那里他们将介绍他们为儿童服务设计和提供AI驱动的前门服务的创新方法，以及如何将这些解决方案改编和转化为成人社会护理。发现所面临的挑战，所学到的教训以及AI带来的机会提高社会护理的效率和有效性。Beebot AI还将分享现实世界中的例子和成功案例，从而全面概述他们的旅程及其技术对地方当局的影响。
CRISPR/CAS-9在西尼罗河病毒载体culex quinquefasciatus中通过同源性维修介导的敲门
culex quinquefasciatus说是在世界的热带和亚热带地区分布的蚊子。这是一种夜间活性的，机会性的血液源，媒介是许多动物和人类疾病，包括西尼罗河病毒和禽类疟疾。当前向量控制方法（例如物理/化学）越来越无效；杀虫剂的使用还对人类和生态系统健康构成危害。基因组编辑的进步允许开发遗传昆虫控制方法，这些方法是特异性物种特异性的，从理论上讲，非常有效。crispr/cas9是一种细菌衍生的可编程基因编辑工具，可在一系列物种中起作用。我们描述了Quinquefasciatus中同源性修复的第一个成功的种系基因基因概括。使用CRISPR/CAS9，我们将编码荧光蛋白荧光团（HR5/IE1 -DSRED，CQ7SK -SGRNA）编码的SGRNA表达盒和标记基因集成到kynurenine 3 − 3-单核酶（KMO）基因中。我们达到的最小转化率为2.8％，类似于其他蚊子物种的速率。确定了预期基因座的精确敲门in。插入纯合子在早期幼虫中表现出白眼表型，并且通过化合物表现出隐性致命表型。这项工作为工程C. Quinquefasciatus提供了一种有效的方法，为该向量开发遗传控制工具提供了一种新工具。
通过供体的体内 - 线性化和DNA聚合酶θ/DNA-PK的瞬时抑制，在小鼠胚胎干细胞中有效双重敲门
（未通过同行评审认证）是作者/资助者。保留所有权利。未经许可就不允许重复使用。此预印本版的版权持有人于2021年5月30日发布。 https://doi.org/10.1101/2021.05.30.446338 doi：Biorxiv Preprint
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CRISPR/CAS9技术在永生化的人类细胞系中的单基因编辑策略
摘要CRISPR/CAS9系统的使用在过去几年中迅速增长。在这里，描述了在人类非机智的体细胞系（NTHY-ORI）中的单核苷酸多态性的优化，突出了以克服有关递送和脱靶的问题的策略。，我们同时使用慢病毒和化学脂质作为递送剂以及两种创建双链断裂（DSB）的策略。前者通过经典的Cas9核酸酶（标准策略）诱导了DSB，而第二个则采用了修改后的CAS9产生单链破裂（SSB）。使用单链供体寡核苷酸或HR410-PA供体矢量（HR）进行敲门。可以通过将双镍酶系统与HR载体化学转染相结合来获得所需的细胞。此结果可能是由于DSB的类型造成的，这可能主要是由于Blunt（标准策略）和伸出时HR（Double Nickase）时的非同源末端连接而进行的。我们的结果表明，双镍酶适合在永生的NTHY-ORI细胞系中敲门，而标准CRISPR/ CAS9系统适合在/ DEL突变中创建基因敲除基因敲除。
使用AAV介导的2- ...
CRISPR-CAS基因组编辑技术的最新进展在提高效率方面产生了重要的作用，以产生基因修饰的动物模型。在这项研究中，我们结合了四种非常有前途的方法，以提出高效的管道来产生敲击小鼠和大鼠模型。四种组合方法包括：AAV介导的DNA递送，单链DNA供体模板，2细胞胚胎修饰和CRISPR-CAS核糖核蛋白（RNP）电穿孔。使用这种新的组合方法，我们能够成功地产生含有CRE或FLP重组酶序列的成功靶向敲击大鼠模型，具有超过90％的敲击效率。此外，我们能够产生一个含有CRE重组酶靶向插入的敲门小鼠模型，其效率超过50％，将效率直接比较与其他常用方法。我们使用2细胞胚胎CRISPR-CAS9 RNP电穿孔技术进行了修改的AAV介导的DNA递送，已证明对生成敲入小鼠和敲门大鼠模型非常有效。