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2021年欧洲术的欧洲轨道病（...
Graves的轨道病（GO）是坟墓疾病（GD）的主要手感外表现。治疗的选择应基于对GO的临床活动和严重程度的评估。早期转诊至专业中心对于大多数GO患者而言至关重要。危险因素包括吸烟，甲状腺功能障碍，高血清甲状腺蛋白受体抗体，放射性碘（RAI）治疗和高胆固醇血症。在轻度和活跃的GO中，控制危险因素，局部治疗和硒（硒缺陷区域）通常足够；如果选择RAI治疗来管理GD，则需要低剂量的口服泼尼松预防，尤其是在危险因素并存的情况下。对于主动中度到重度和视力危及的GO，在管理坟墓的甲状腺功能亢进时，首选抗甲状腺药物。在中度至重度和活动性GO中糖皮质激素比口服糖皮质激素更有效，更耐受。基于当前的证据和功效/安全性，成本和报销，药物的可用性，长期有效性以及在广泛咨询后的患者选择，i.v.甲基泼尼松龙和霉酚酸钠建议作为一线治疗。累积剂量为4.5克。每周12次输注中的甲基促苯甲酮是最佳方案。或者，在大多数严重的情况下，较高的累积剂量不超过8 g可以用作单一疗法，并且可以用作恒定/不变复视。中度至重度和主动GO的二线治疗包括（a）i.v.的第二个课程。甲基泼尼松酮（7.5 g），后来进行了仔细的眼科和生化评估，（b）口服泼尼松/泼尼松龙与环孢素或硫唑氨酸相结合； （c）轨道放疗与口服或静脉糖皮质激素，（D）Teprotumumab; （e）利妥昔单抗和（f）tocilizumab。视力威胁的GO用几种高剂量的i.v.治疗。每周甲基丙糖酮，如果不反应，则需要紧急轨道减压。康复手术（轨道减压，斜视和眼睑手术）用于无活性残留GO表现。
治疗诊断学 致癌非V600突变逃避...
Ser/Thr 激酶 RAF，特别是 BRAF 亚型是致癌突变的主要靶点，在各种癌症中都发现了许多突变。然而，除 V600E 之外的这些突变如何逃避 RAF 蛋白的调节机制并因此引发其致癌性仍不清楚。方法：在本研究中，我们使用诱变、肽亲和力测定、免疫沉淀、免疫印迹和互补分裂荧光素酶测定以及小鼠异种移植肿瘤模型来研究 RAF 的功能如何由 Cdc37/Hsp90 分子伴侣和 14-3-3 支架协同调节，以及这种调节机制如何被普遍的非 V600 突变逃避。结果：我们发现 Cdc37/Hsp90 分子伴侣与成熟的 BRAF 蛋白结合，与 14-3-3 支架一起促进 BRAF 蛋白从活性开放二聚体转变为非活性封闭单体。大多数非 V600 突变富集在 BRAF 的 Cdc37/Hsp90 结合片段上或周围，这会削弱 CDc37/Hsp90 分子伴侣与 BRAF 的结合，从而使 BRAF 处于有利于二聚化的活性开放构象中。这些具有高二聚体倾向的 BRAF 突变体维持了长时间的 ERK 信号传导，并且在体外和体内被 RAF 二聚体破坏剂 plx8394 有效靶向。相反，CRAF 和 ARAF 以未成熟单体的形式存在，与 Cdc37/Hsp90 分子伴侣高度包装，在 RAS-GTP 与其 N 端结合以及 14-3-3 支架与其 C 端结合的驱动下，二聚化后释放。成熟的 CRAF 和 ARAF 二聚体也像非 V600 BRAF 突变体一样维持了长时间的 ERK 信号传导，这是由于缺乏 C 端 Cdc37/Hsp90 结合片段。结论：Cdc37/Hsp90 分子伴侣和 14-3-3 支架协同促进 RAF 蛋白从开放活性二聚体转变为封闭无活性单体。非 V600 突变会破坏这种调节机制，并将 RAF 困在二聚体中，而二聚体可能成为 RAF 二聚体破坏剂的目标。
严重而持久的神经性厌食症
基因表达可以使用CRISPR -CAS9系统激活或抑制。然而，缺乏无需使用外源转录调节蛋白的基因表达激活的剂量依赖性激活的工具。在这里，我们描述了化学表观遗传学修饰剂（CEMS），旨在通过募集内源性染色质激活机械的合并来激活靶基因的表达，从而消除了对外源转录激活器的需求。该系统有两个部分：与FK506结合蛋白（FKBP）复合的催化无活性CAS9（DCAS9）和由与细胞表观遗传机械相互作用的分子相关的FK506的CEM。我们表明，根据基因，CEM在目标内源性基因座的基因表达上调高达20倍或更多。我们还证明了对转录激活的剂量依赖性控制，跨多种基因的功能，CEM活性的可逆性以及我们在整个基因组中最佳一流CEM的特异性。真核基因组被组织并包装成不同程度的压实，这有助于基因表达的调节。蛋白质 - 蛋白质和蛋白质-DNA相互作用的网络调节基因表达的适当水平。对该法规网络的破坏驱动了许多人类疾病，包括癌症1、2。雕刻染色质景观的重要因素是翻译后组蛋白尾巴修饰。赖氨酸乙酰化是一种具有生物物理和间接蛋白质摄取效应的修饰。受这些研究的启发，我们试图开发一种能够作家（组蛋白乙酰转移酶（帽子）），橡皮擦（组蛋白脱乙酰基酶（HDACS））和读取器（例如，溴结构域和染色体域）的蛋白质家族均匀控制基因表达3，4。几个小组已经证明了募集外来染色质修饰机械的能力，以一种以基因特异性方式控制扩张水平的一种方式5 - 11。随着CAS9和DCAS9技术的重大进展，精确诱导表达变化的能力迅速发展。Liszczak及其同事的开创性工作证明了使用DCAS9系统结合染色质调节蛋白的抑制剂12募集内源性机械的能力。ANSARI及其同事的其他工作使用了可编程的DNA结合配体，并结合了溴结构域抑制剂来调节转录13。
“一种用于研究替代方案的 CRISPR-dCas13 RNA 编辑工具......
“一种用于研究可变剪接的 CRISPR-dCas13 RNA 编辑工具” Yaiza Núñez-Álvarez 1§*、Tristan Espie--Caullet 1,2,6§、Géraldine Buhagiar 2,6、Ane Rubio-Zulaika 3、Josune Alonso-Marañón 3、Elvira Perez-Luna 2,6、Lorea Blazquez 3-5、Reini F. Luco 1,2,6 * 1. 蒙彼利埃大学人类遗传学研究所，CNRS UMR9002，法国蒙彼利埃。 2. 巴黎萨克雷研究大学居里研究所，CNRS UMR3348，91401 奥赛，法国。 3. 西班牙Biogipuzkoa健康研究所神经科学系，20014圣塞瓦斯蒂安 4. 西班牙巴斯克科学基金会Ikerbasque，48009毕尔巴鄂5. CIBERNED，ISCIII（CIBER，西班牙科学与创新部卡洛斯三世研究所），28031 马德里，西班牙 6. 由抗癌联盟支持的团队。 § 这些作者贡献相同* 通讯作者：：ynunez@biotech-foods.com 和 reini.luco@curie.fr 摘要 可变剪接允许从同一基因产生多个转录本，从而使蛋白质库多样化，并在编码基因组有限的情况下获得新的功能。它可以影响多种生物过程，包括疾病。然而，由于在生理背景下剖析每个剪接异构体的精确作用的局限性，其重要性长期以来一直被低估。此外，识别关键调控元件以纠正有害的剪接异构体也同样具有挑战性，这增加了解决可变剪接在细胞生物学中的作用的难度。在这项工作中，我们利用 dCasRx（一种靶向 CRISPR-dCas13 直系同源物的催化无活性 RNA），以经济高效的方式有效地切换内源转录物的可变剪接模式，而不会影响整体基因表达水平。此外，我们展示了 dCasRx 剪接编辑系统的一个新应用，用于识别特定剪接事件的关键调控 RNA 元素。通过这种方法，我们正在扩展 RNA 工具包，以更好地了解可变剪接的调控机制及其在各种生物过程（包括病理状况）中的生理影响。关键词 可变剪接； CRISPR-dCas13，dCasRx；剪接编辑；顺式调节 RNA 元件、RNA 基序。
利用内皮唾液酸蛋白 (...) 针对活化的微环境
摘要 背景 由于缺乏合适的肿瘤特异性抗原，以及免疫抑制和促纤维化肿瘤微环境阻碍了 CAR-T 细胞的浸润、活性和持久性，嵌合抗原受体 (CAR)-T 细胞靶向实体癌的应用受到限制。我们假设，靶向由肿瘤相关周细胞和血管周围癌症相关成纤维细胞强烈表达的内皮唾液酸蛋白 (CD248) 受体将避免这些挑战，并为 CAR-T 细胞疗法提供令人兴奋的抗原，因为靶细胞与肿瘤血管距离很近，正常组织中内皮唾液酸蛋白表达有限，并且内皮唾液酸蛋白敲除小鼠缺乏表型。方法我们从三种免疫活性小鼠品系 BALB/c、FVB/N 和 C57BL/6 中生成了内皮唾液酸蛋白靶向的 E3K CAR-T 细胞。评估了 E3K CAR-T 细胞组成（CD4 + / CD8 + 比例）、体外对内皮唾液酸 + 和内皮唾液酸 – 细胞的活性，以及在同源肿瘤模型以及未接受肿瘤治疗的健康和受伤小鼠和携带肿瘤的内皮唾液酸基因敲除小鼠中的体内扩增和活性。结果 E3K CAR-T 细胞在体外对小鼠和人类内皮唾液酸 + 细胞均有活性，但对内皮唾液酸 – 细胞无活性。过继转移的 E3K CAR-T 细胞在内皮唾液酸基因敲除小鼠、未接受肿瘤治疗的内皮唾液酸野生型小鼠或伤口愈合模型中均无活性，表明不存在脱靶和在靶/脱肿瘤活性。相比之下，将 E3K CAR-T 细胞过继转移到携带同基因乳腺癌或肺癌系的 BALB/c、FVB/N 或 C57BL/6 小鼠体内，会耗尽肿瘤基质中的靶细胞，导致肿瘤坏死增加、肿瘤生长减缓和转移性生长显著受损。结论这些数据共同强调了内皮唾液酸蛋白是 CAR-T 细胞疗法的可行抗原，并且靶向与肿瘤血管密切相关的基质细胞可避免 CAR-T 细胞不得不在严酷的免疫抑制肿瘤微环境中生存。此外，E3K CAR-T 细胞识别和靶向小鼠和人内皮唾液酸蛋白 + 细胞的能力使人性化和优化的 E3K CAR 成为适用于多种实体瘤类型临床开发的有希望的候选药物。