在第一步中,将六个金门入口向量合并为目标向量。有各种可以使用的金门目标向量,其中包含可以使用的不同植物和/或视觉标记物(请参阅补充数据集1中的金门目标矢量(CCDB +)1)。第一个入口向量(AB)包含组织特异性表达的启动子。第三个入口矢量(CD)包含核酸酶,可以与N末端(BC)或C末端标签(DE)结合使用。另外,如果不需要标签,则使用链接序列。第五入口矢量(EF)包含工厂终结器。选择的第六个黄金入口向量(FG)取决于最终目标。要克隆与一个或两个GRNA兼容的矢量,请使用未武装的GRNA进入矢量PGG-F-F-ATU6-26-AARI-AARI-AARI-G(请参阅补充数据集1中的未武装GRNA进入向量1)。要克隆与多个GRNA兼容的矢量,请使用可变的链接器PGG-F-a-aari-sacb-aari-g-g(请参阅补充数据集1中的可变链接器)。由于我们的克隆策略使用限制酶Bsai和Aari,因此要求所有向量都需要无BSAI和AARI-FIME(除了克隆位点)。
摘要:众所周知,海洋恐龙植物属的种类会产生各种有效的生物毒素,并会形成有害的花朵,从而引起鱼和壳的质量。迄今为止,韩国已经报道了K. Mikimotoi物种的有害花朵,但K. papilionacea最近在韩国南部海岸记录了。在这里,我们开发了一种定量的实时PCR(QRT-PCR)测定法,并具有特定的引物对,以精确检测和量化这两个外观外观相似的未武装物种K. Mikimotoi和K. papilionacea,并研究了其在韩国沿海水域的分布和动态。总体而言,K。papilionacea不仅具有更大的分布,而且比在地表水中的K. mikimotoi(3–122细胞L -1)的细胞丰度更高(15–2553细胞L -1)。在18个采样地点中,发现两个karenia物种在两个地点共存。在固定站(S5)进行监测期间,K。Papilionacea通常比K. Mikimotoi占主导地位。但是,这两个物种表现出相似的动力学,偶尔同时发生。两种karenia物种均对温度和盐度的生理反应相似,需要相似的最佳生长条件。这些结果表明,这两个物种的开花可能会同时发生并引起对海洋环境的协同不利影响。