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在牛模型中通过 CRISPR/Cas9 技术修饰 TFAM 基因的后编辑细胞的表征
为了增加知识，必须深入研究大型动物模型中的基因编辑，以便将来将其应用于转化医学和食品生产。线粒体转录因子 A（TFAM）是 HMGB 亚家族的成员，可与 mtDNA 启动子结合。该基因维持 mtDNA，并且对于 mtDNA 转录的起始至关重要。最近，我们通过 CRISPR/Cas 9 技术破坏牛成纤维细胞中的 TFAM 基因，生成了一种新的细胞系。我们通过生成杂合突变克隆证明了 CRISPR/Cas9 设计是有效的。在这种情况下，一旦该基因调节 mtDNA 复制特异性，该研究旨在确定后编辑细胞是否能够在体外维持，并评估它们在培养中连续传代后是否会出现 mtDNA 拷贝数和线粒体膜电位的变化。编辑后的细胞在培养中扩增，我们进行了生长曲线、倍增时间、细胞活力、线粒体 DNA 拷贝数和线粒体膜电位测定。编辑过程并没有使细胞培养变得不可行，尽管与对照组相比，细胞生长率和活力有所下降，因为我们观察到在补充有尿苷和丙酮酸的培养基中培养时，细胞生长良好。它们还表现出典型的成纤维细胞样外观。用于确定 mtDNA 拷贝数的 RT-qPCR 表明，与不同细胞代次中未编辑的克隆（对照）相比，编辑后的克隆有所减少。用 Mitotracker Green 和 red 进行细胞染色表明，与未编辑的细胞相比，编辑后的细胞中的红色荧光有所减少。因此，通过表征，我们证明了 TFAM 基因对于线粒体的维持至关重要，因为它会干扰不同细胞传代中线粒体 DNA 拷贝数和膜电位的稳定性，从而证实了杂合编辑的细胞中线粒体活性的降低。
针对布鲁格达综合征、心律失常和轻度心肌病小鼠模型的蛋白质运输调节剂 MOG1 的基因治疗
布鲁格达综合征 (BrS) 是一种致命的心律失常，在高发地区约占所有猝死的 4%。SCN5A 编码心脏钠通道 Na V 1.5，并导致 25% 至 30% 的 BrS 病例。本文，我们报告了一种 BrS 敲入 (KI) 小鼠模型 (Scn5a G1746R/+)。杂合 KI 小鼠重现了 BrS 的一些临床特征，包括心电图上的 ST 段异常（明显的 J 波）和自发性室性心动过速 (VT)、癫痫发作和猝死。VT 是由心脏动作电位时限缩短和 3 期晚期早期后去极化引起的，同时伴有钠电流密度 (I Na) 降低以及 Kcnd3 和 Cacna1c 表达增加。我们开发了一种基因疗法，使用腺相关病毒血清型 9 (AAV9) 载体介导的 MOG1 递送来上调 MOG1，MOG1 是一种与 NaV 1.5 结合并将其运送到细胞表面的伴侣分子。之所以选择 MOG1 进行基因治疗，是因为 SCN5A 编码序列 (6048 个碱基对) 很大，超过了 AAV 载体的包装能力。AAV9-MOG1 基因疗法增加了 NaV 1.5 和心室 I Na 的细胞表面表达，逆转了 Kcnd3 和 Cacna1c 表达的上调，使心脏动作电位异常正常化，消除了 J 波，并阻断了 Scn5a G1746R/+ 小鼠的 VT。基因疗法还挽救了具有 SCN5A 突变 p.D1275N 的杂合人源化 KI 小鼠的心律失常和收缩功能障碍的表型。使用小型伴侣蛋白可能对于靶向超出 AAV 载体大小容量的致病基因具有广泛的意义。
PRALUENT处方信息
--—————————————迹象和用法--———————————————促蛋白转化蛋白转化酶枯脂蛋白Kexin kexin 9型（PCSK9）抑制剂：•降低患有成年患有成年患者的不稳定的ANGINA的心肌症状，中风，中风，中风，不稳定的ANGINA的风险。（1）•作为饮食的辅助性，或与其他低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）较低的疗法相结合，在患有原发性高脂血症的成年人中，包括杂合家族性高胆固醇血症（HEFH），以减少LDL-C。 （1）•作为纯合家族性高胆固醇血症（HOFH）的成年患者的其他LDL-C降低疗法的辅助，以减少LDL-C。 （1）•作为饮食和其他LDL-C降低疗法的辅助，患有HEFH 8岁及以上的儿科患者，以减少LDL-C。 （1）
使用无细胞胎儿DNA
RH（Rhesus）系统包括RBC上发现的100多个抗原品种。RHD是最常见和最免疫原性的。当人们在RBC上有RHD抗原时，它们被认为是RHD阳性的；如果他们的RBC缺乏抗原，则将其视为RHD阴性。RHD抗原是以自染色体主导的方式遗传的，一个人可能是杂合的（DD； RHD阳性人群的60％）或纯合子（DD； rhd阳性阳性人群的40％）。纯合子总是将RHD抗原传递到其后代，而杂合子有50％的机会将抗原传递到其后代。RHD阴性的人没有RH抗原。尽管命名法是指rhd阴性为DD，但没有小的D抗原（即，它们缺乏RHD基因和相应的RHD抗原）。
Zolgensma-临床准则
a。 SMN1基因的纯合缺失（例如，SMN1基因的缺失）； b。 SMN1基因中的纯合突变（例如，外显子7的双重突变）； c。 SMN1基因中的复合杂合突变（例如SMN1外显子7（等位基因1）和SMN1突变（等位基因2））； 4。由或与以下儿科专业之一或咨询有关：神经病学，肺病学，骨科，新生儿 - 拘留医学，临床遗传学和基因组学，物理医学和康复，神经肌肉症，神经肌肉医学，或神经传播不适； 5。成员已达到完整的胎龄； 6。年龄<2岁； 7。如有必要，已审查并修改了经过处方验证的疫苗时间表； 8。以下基线得分之一的文档（请参阅附录D）（A或B）：
慢性粘膜念珠菌病
1。ch慢性更多候选人。J Acad Dermatol Acad。1994; 3：PS14-S7 2。 Verdonk FL的Van，Plant TS，Hoischen A，Smeekens SP，Joosten Lab，Gilissen C和Al。 STAT1自加体慢性癌症中的突变。 n Engel J Med。 2011; 34：54：-6 3。 K，St.S，Rombold S，Seidl H，Birth H，Hope H等。 患有更多念珠菌病的患者支持IL-17和IL-2的产生 J投资者Dermatol。 2008; 128：260--5 4。 van到5月JWM，Kullberg bj的CAA，MG的游泳，IPH，您的RH Morsche。 候选特定的干扰和candisis的TOL样接收器多态性。 neth J Med。 2003; 61：365--9 5。 Toubana J，Okada S，Hiller J，Oleastro ML，MCA的Bederra和Al。 杂合STAT1无功能突变是意外的PhonType临床肉汤。 血。 2016; 127：3154--64。 6。 ch 慢性更多候选人。 dis J. 感染儿科 2001; 20：197--206。 7。 egri n，街头A，Deyon-Martine A，IO，Vlagea A，Garci AP和Al。 摘要原发性和慢性慢性病念珠菌病：病原体，真实和治疗学。 免疫疾病神秘（制造）。 2021; 49：118--2 8。1994; 3：PS14-S72。Verdonk FL的Van，Plant TS，Hoischen A，Smeekens SP，Joosten Lab，Gilissen C和Al。STAT1自加体慢性癌症中的突变。 n Engel J Med。 2011; 34：54：-6 3。 K，St.S，Rombold S，Seidl H，Birth H，Hope H等。 患有更多念珠菌病的患者支持IL-17和IL-2的产生 J投资者Dermatol。 2008; 128：260--5 4。 van到5月JWM，Kullberg bj的CAA，MG的游泳，IPH，您的RH Morsche。 候选特定的干扰和candisis的TOL样接收器多态性。 neth J Med。 2003; 61：365--9 5。 Toubana J，Okada S，Hiller J，Oleastro ML，MCA的Bederra和Al。 杂合STAT1无功能突变是意外的PhonType临床肉汤。 血。 2016; 127：3154--64。 6。 ch 慢性更多候选人。 dis J. 感染儿科 2001; 20：197--206。 7。 egri n，街头A，Deyon-Martine A，IO，Vlagea A，Garci AP和Al。 摘要原发性和慢性慢性病念珠菌病：病原体，真实和治疗学。 免疫疾病神秘（制造）。 2021; 49：118--2 8。STAT1自加体慢性癌症中的突变。n Engel J Med。2011; 34：54：-63。K，St.S，Rombold S，Seidl H，Birth H，Hope H等。患有更多念珠菌病的患者支持IL-17和IL-2的产生J投资者Dermatol。2008; 128：260--5 4。 van到5月JWM，Kullberg bj的CAA，MG的游泳，IPH，您的RH Morsche。 候选特定的干扰和candisis的TOL样接收器多态性。 neth J Med。 2003; 61：365--9 5。 Toubana J，Okada S，Hiller J，Oleastro ML，MCA的Bederra和Al。 杂合STAT1无功能突变是意外的PhonType临床肉汤。 血。 2016; 127：3154--64。 6。 ch 慢性更多候选人。 dis J. 感染儿科 2001; 20：197--206。 7。 egri n，街头A，Deyon-Martine A，IO，Vlagea A，Garci AP和Al。 摘要原发性和慢性慢性病念珠菌病：病原体，真实和治疗学。 免疫疾病神秘（制造）。 2021; 49：118--2 8。2008; 128：260--54。van到5月JWM，Kullberg bj的CAA，MG的游泳，IPH，您的RH Morsche。候选特定的干扰和candisis的TOL样接收器多态性。neth J Med。2003; 61：365--9 5。 Toubana J，Okada S，Hiller J，Oleastro ML，MCA的Bederra和Al。 杂合STAT1无功能突变是意外的PhonType临床肉汤。 血。 2016; 127：3154--64。 6。 ch 慢性更多候选人。 dis J. 感染儿科 2001; 20：197--206。 7。 egri n，街头A，Deyon-Martine A，IO，Vlagea A，Garci AP和Al。 摘要原发性和慢性慢性病念珠菌病：病原体，真实和治疗学。 免疫疾病神秘（制造）。 2021; 49：118--2 8。2003; 61：365--95。Toubana J，Okada S，Hiller J，Oleastro ML，MCA的Bederra和Al。 杂合STAT1无功能突变是意外的PhonType临床肉汤。 血。 2016; 127：3154--64。 6。 ch 慢性更多候选人。 dis J. 感染儿科 2001; 20：197--206。 7。 egri n，街头A，Deyon-Martine A，IO，Vlagea A，Garci AP和Al。 摘要原发性和慢性慢性病念珠菌病：病原体，真实和治疗学。 免疫疾病神秘（制造）。 2021; 49：118--2 8。Toubana J，Okada S，Hiller J，Oleastro ML，MCA的Bederra和Al。杂合STAT1无功能突变是意外的PhonType临床肉汤。血。2016; 127：3154--64。6。ch慢性更多候选人。dis J. 感染儿科2001; 20：197--206。 7。 egri n，街头A，Deyon-Martine A，IO，Vlagea A，Garci AP和Al。 摘要原发性和慢性慢性病念珠菌病：病原体，真实和治疗学。 免疫疾病神秘（制造）。 2021; 49：118--2 8。2001; 20：197--206。7。egri n，街头A，Deyon-Martine A，IO，Vlagea A，Garci AP和Al。摘要原发性和慢性慢性病念珠菌病：病原体，真实和治疗学。免疫疾病神秘（制造）。2021; 49：118--28。van de veerdonk fl，Netea Mg。慢性粘膜念珠菌病的治疗选择。J感染。2016; 5：56 --- 60。 9。 Higgins E，Shehri TA，McAleer MA，Conlon N，Feighery C，Lilic D等。 使用鲁唑替尼成功治疗慢性粘膜2016; 5：56 --- 60。9。Higgins E，Shehri TA，McAleer MA，Conlon N，Feighery C，Lilic D等。使用鲁唑替尼成功治疗慢性粘膜
马尔贝克葡萄品种的二倍体基因组组装使得能够对克隆表型变异背后的转录组差异进行单倍型感知分析
为了保留其品种属性，已建立的葡萄品种（Vitis vinifera L. ssp. vinifera）必须进行克隆繁殖，因为它们的基因组是高度杂合的。马尔贝克是一种源自法国的品种，因生产高品质的葡萄酒而受到赞赏，是品种 Prunelard 和 Magdeleine Noire des Charentes 的后代。在这里，我们将 PacBio 长读段三重合并到从父母遗传的两个单倍体补体中，构建了马尔贝克的二倍体基因组组装。经过单倍型感知的重复数据删除和校正后，获得了两个单倍相的完整组装，且单倍型转换错误率非常低（< 0.025）。单倍相比对确定了 > 25% 的多态性区域。基因注释（包括 RNA-seq 转录组组装和从头算预测证据）导致两个单倍相的基因模型数量相似。利用注释的二倍体组装体对四个表现出浆果组成特征差异的马尔贝克克隆种质进行转录组比较。使用任一单倍体作为参考对成熟果皮转录组进行分析，得到了相似的结果，尽管观察到了一些差异。特别是，在仅以 Magdeleine 遗传单倍型为参考鉴定的差异表达基因中，我们观察到假设的半合子基因的过度表达。克隆种质 595 的浆果花青素含量较高，与脱落酸反应增加有关，可能导致观察到的苯丙烷代谢基因的过度表达和与非生物应激反应相关的基因的失调。总体而言，结果强调了生产二倍体组装体的重要性，以充分代表高度杂合的木本作物品种的基因组多样性并揭示克隆表型变异的分子基础。
携带神经发育疾病相关 GluN2B(L825V) 变异的小鼠的表征
N-甲基-D-天冬氨酸受体 (NMDAR) 由 GRIN 基因编码，是一种离子型谷氨酸受体，在突触传递、可塑性和突触发育中起着关键作用。基因组序列分析已确定神经发育障碍患者的 GRIN 基因存在变异，但其潜在发病机制尚不明确。在此，我们创建并评估了一种携带错义变体 Grin2b L825V 的转基因小鼠系，该小鼠系对应于在智力障碍 (ID) 和自闭症谱系障碍 (ASD) 患者中发现的编码 GluN2B(L825V) 的新生 GRIN2B 变体。我们使用表达重组受体的 HEK293T 细胞和由杂合 Grin2b L825V/+ (L825V/+) 和野生型 (WT) Grin2b +/+ (+/+) 雄性和雌性小鼠制备的原代海马神经元来评估该变异的功能影响。与 +/+ 小鼠相比，L825V/+ 神经元的全细胞 NMDAR 电流降低。NMDAR 介导的诱发兴奋性突触后电流 (NMDAR-eEPSC) 的峰值幅度保持不变，但 L825V/+ 神经元中的 NMDAR-eEPSC 与 +/+ 神经元相比失活速度更快，并且对 GluN2B 选择性拮抗剂艾芬地尔的敏感性较低。总之，这些结果表明 GluN2B 亚基对 L825V/+ 小鼠海马神经元突触 NMDAR 电流的功能贡献降低。对 GluN2B(L825V) 亚基表面表达和突触定位的分析表明，与 WT GluN2B 相比，没有差异。对两种性别小鼠的行为测试表明，L825V/+ 品系小鼠表现出活动减少、焦虑和感觉运动门控受损，尤其是雄性小鼠，以及认知症状。杂合 L825V/+ 小鼠提供了 GRIN2B 相关 ID/ASD 的临床相关模型，我们的结果表明突触水平的功能变化可能导致神经发育病理学。
Microsoft Word - OSAC 2021-S-0003 确定分析和随机阈值的标准版本 2.1.docx
本文件定义了确定和验证分析阈值和随机阈值的各自最低要求。此类阈值有助于确保所获数据的可靠性，同时清楚地传达在下游解释过程中评估数据的假设。实验室的目标是始终如一地生成可靠且可重复的等位基因数据名称，并通过内部验证数据和实验室协议确定何时可能发生等位基因丢失。如果实验室在其数据分析方法中对案件中是否检测到峰值做出二元判定，则分析阈值是必需的。同样，如果实验室在其数据分析方法中对案件中等位基因丢失的可能性做出二元判定，则随机阈值也是必需的。每当应用阈值时，都有可能发生分类错误。任何分析阈值的内在预期是，不可重复的噪声会产生一些峰值，这些峰值由于超出阈值而被错误地归类为等位基因，并且一些真正的等位基因将无法检测到，因为它们产生的峰值低于阈值。任何随机阈值的内在预期是，在确定是否可能发生等位基因丢失时会发生一些错误。当姊妹等位基因峰丢失并且第二个峰高于随机阈值时，一些杂合基因型将被错误地归类为纯合。相反，一些纯合基因型将被错误地归类为潜在杂合，因为单个峰低于随机阈值。根据相关经验数据的统计分析确定阈值的优势在于，可以估算出给定阈值水平下这些可能错误的相对风险。在设定阈值时，实验室必须采用基于统计的方法来确定这些事件中有多少比例可用于法医案件的分析。该标准的草案由法医科学领域委员会组织的人类法医生物学小组委员会制定。关键词：分析阈值、随机阈值、DNA、验证、信号、伪影、噪音
修补生殖基因和无融合生殖
摘要：马铃薯是世界上最重要的非谷类作物，然而，马铃薯的遗传增益传统上一直受到作物生物学的延迟，主要是自交四倍体品种的遗传杂合性和生殖系统的复杂性。新型定点基因改造技术为设计气候智能型品种提供了机会，但它们也为马铃薯育种带来了新的可能性（和挑战）。由于马铃薯品种表现出显著的生殖多样性，并且它们的胚珠倾向于发展出类似无融合生殖的表型，因此对马铃薯生殖基因进行修改正在开辟马铃薯育种的新领域。开发二倍体品种而不是四倍体品种已被提议作为填补遗传增益空白的替代方法，这是通过使用基因编辑的自交亲和基因型和自交系来利用杂交种子技术来实现的。类似地，调节二倍体或四倍体马铃薯中未减数配子的形成和合成无融合生殖可能有助于加强向二倍体杂交作物的过渡或增强基因渗入方案并固定四倍体品种中高度杂合的基因型。无论如何，诱导无融合生殖样表型将缩短开发新品种的时间和成本，因为这样可以通过真种子进行多代繁殖。在这篇评论中，我们总结了目前关于马铃薯生殖表型和潜在基因的知识，讨论了利用马铃薯的自然变异性调节种子形成过程中的生殖步骤的优缺点，并考虑了合成无融合生殖的策略。然而，在我们能够完全调节生殖表型之前，我们需要了解这种多样性的遗传基础。最后，我们设想基因库在这一努力中发挥积极、核心的作用，通过对正确基因型的基因库种质和新引进品种进行表型分析，为科学家和育种者提供可靠的数据和资源，以开发创新，利用市场机会。