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双 sgRNA 定向 CRISPR/Cas9 构建体，用于编辑有色柑橘类水果中果实特异性的 β -环化酶 2 基因
CRISPR/Cas9 基因组编辑是一种现代生物技术方法，用于改良植物品种，仅改变特定品种的一个或几个性状。然而，由于缺乏对关键基因的了解、幼苗期较长以及特定品种的整株植物难以再生，这种技术不能轻易用于改良柑橘果实的品质性状。在这里，我们介绍了一种基因组编辑方法，目的是生产果实中同时含有番茄红素和花青素的柑橘幼苗。我们的方法采用双单向导 RNA (sgRNA) 定向基因组编辑方法来敲除果实特异性的 β-环化酶 2 基因，该基因负责将番茄红素转化为 β-胡萝卜素。两个 sgRNA 同时靶向该基因以产生大量缺失，并在两个 sgRNA 靶标中诱导点突变。农杆菌 EHA105 菌株用于转化五种不同的花青素甜橙（属于 Tarocco 和 Sanguigno 品种组）和“Carrizo”枳橙（一种柑橘砧木）作为柑橘转化的模型。在目标区域测序的 58 个小植株中，86% 成功编辑。最常见的突变是缺失（从 -1 到 -74 个核苷酸）和插入（+1 个核苷酸）。此外，在六个小植株中发现了一个新事件，包括两个 sgRNA 之间区域的倒置。对于发生单个突变的 20 个小植株，我们排除了嵌合事件。小植株在营养组织中没有表现出改变的表型。据我们所知，这项工作是使用基因组编辑方法潜在改善柑橘水果品质性状的第一个例子。
CRISPR 技术用于多年生和半多年生作物柑橘、咖啡和甘蔗的基因组编辑
1 柑橘研究中心“Sylvio Moreira” - 农学研究所 (IAC)，Cordeiro ´ polis，巴西，2 生物研究所，坎皮纳斯州立大学 (Unicamp)，坎皮纳斯，巴西，3 甘蔗研究中心 - 农学研究所 (IAC)，里贝朗普雷图，巴西，4 里贝朗普雷图医学院，圣保罗大学 (USP)，里贝朗普雷图，巴西，5 坎皮纳斯农学研究所 (IAC) 咖啡中心，坎皮纳斯，巴西，6 Embrapa 咖啡，巴西农业研究公司，巴西利亚，联邦区，巴西，7 生物学系，哲学、科学与文学学院，圣保罗大学 (USP)，里贝朗普雷图，巴西，8 遗传学系，路易斯·德·凯罗斯农业学院 (ESALQ)，圣保罗大学 (USP)，皮拉西卡巴，巴西
LbCas12a-D156R 有效编辑 LOB1 效应结合元件，以产生抗溃疡病的柑橘植物
摘要：由柑橘黄单胞菌（Xcc）引起的柑橘溃疡病是全球大多数柑橘产区的重要经济病害。Xcc 分泌一种转录激活因子样效应物 (TALE) PthA4，与溃疡病易感基因 LOB1 启动子区的效应物结合元件 (EBE) 结合，激活其表达，从而引起溃疡症状。利用 Cas9/gRNA 编辑 EBE 区域已用于生成抗溃疡病的柑橘植株。然而，生成的大多数 EBE 编辑株系含有 1–2 bp 的插入/缺失，这更有可能通过 PthA4 适应来克服。TALE 的适应能力与与 EBE 的错配数量呈负相关。已知 LbCas12a/crRNA 产生的缺失比 Cas9 更长。在本研究中，我们使用了一种耐高温且更高效的 LbCas12a 变体 (ttLbCas12a)，该变体含有单个替换 D156R，用于修改 LOB1 的 EBE 区域。我们首先构建了 GFP-p1380N-ttLbCas12a:LOBP，经证实，该变体在柚子 (Citrus maxima) 叶片中通过 Xcc 促进的农杆菌渗滤而发挥功能。随后，我们在柚子中稳定表达了 ttLbCas12a:LOBP。生成了八个转基因株系，其中七个株系显示 EBE 的 100% 突变，其中一个株系是纯合的。EBE 编辑株系具有高达 10 bp 的 ttLbCas12a 介导的缺失。重要的是，这七个株系具有抗溃疡病性，并且未检测到脱靶。综上所述，ttLbCas12a 可有效利用来生成具有短缺失的双等位基因/纯合柑橘突变系，从而为柑橘的功能研究和育种提供有用的工具。
标准化天然柑橘提取物对生长，肠道健康，尸体质量和肉鸡福利的影响
1联合实验室ANR FeedIntech（fit：Sonas/Nor-Feed），法国Beaucouzé49070； Amine.benarbia@norfeed.net 2 Norefeed Sas，3 RueamémédéoAavogadro，49070Beaucouzé，法国3，法国3动物环境生物学系动物科学研究所，华沙生命科学大学（SGGW），Ciszewskiego 8，02--786 Wardand，warsewskiego Arkadiusz_matuszewski@sggw.edu.pl 4动物营养部，动物科学研究所，华沙生命科学大学，西斯基斯基伊戈，波兰，澳洲人8，02-786； damian_bien@sggw.edu.pl 5 Warsaw Life Sciences生物学研究所动物育种系，西斯基斯基戈（Ciszewskiego）8，02-786波兰华沙； patrycja_ciborowska@sggw.edu.pl（p.c.）; anna_zalewska1@sggw.edu.pl（a.z.）; jakub_urban@sggw.edu.pl（J.U.）; monika_michalczuk@sggw.edu.pl（M.M.）6兽医学和毒理学系，兽医学院，兽医学院，西塞维斯基哥哥8，02-786波兰华沙； marta_mendel@sggw.edu.pl（M.M.）; urszula_latek@sggw.edu.pl（U.L.）; joanna_polak@sggw.edu.pl（J.P.）7病理学和兽医诊断系，兽医学院，华沙生命科学大学，Nowoursynowska 159C，02-776，波兰华沙； malgorzata_sobczak_filipiak@sggw.edu.pl 8 Kielanowski动物生理与营养学院波兰科学学院，Instytucka 3，05-110Jabłonna，波兰，波兰； pawel.konieczka@uwm.edu.pl 9家禽科学与养主系，沃尔西亚大学和马祖里大学，oczapowskiego 5，10-719 Olsztyn，波兰 *通信 *通信：Sekhou.cisse@norfeed.net.net.net.net.net.net;电话。： +33-0-241-937-456
一种有效的方法，用于提取和定量确定受HLB影响和健康的柑橘>
callose是一种1,3- B葡聚糖，负责植物学中的几个过程，例如细胞分裂，成熟花粉母细胞，维持质量肿瘤的开口，并为筛子提供结构。除了生理角色外，在病原体攻击期间还沉积了callose，形成乳头状以防止病原体进入组织或堵塞筛子以限制韧皮部病原体的扩散。念珠菌亚洲（c las）是huanglongbing（HLB）的因果因素（HLB），是一种韧皮部限制性病原体，其感染导致在韧皮部中产生Callose。表征HLB期间callo的动力学的动力学对于理解疾病很重要，但是没有公开的方案可用于提取和定量在柑橘树中的提取和定量，并且定量数据受到限制。通过显微镜检测Callose是耗时且昂贵的，并且没有提供有关在整个工厂中分布的信息。在这里，我们提出了一个简短的方案，用于从柑橘植物中对总callose的有效提取和定量。我们比较了来自健康和c感染的植物的不同组织，并确定了中桥，茎和受感染植物的水果花梗中的callo糖水平的增加。与茎，根和水果花梗相比，叶子中的callose水平最高，尤其是中径。该方法可以应用于其他木本植物物种。
战略 - 2023-2027 年计划
• 通过适当的政策、培训和支持，不断发展公司文化，采取合乎道德和负责任的行动，履行法定和法律要求并管理风险 • 通过培训和技能提升为管理层和员工提供个人和专业发展 • 通过维护适合目的和足够资源的公司结构，支持员工履行职责 • 澳大利亚柑橘公司的董事会和员工拥有适当的技能和经验，能够以专业和灵活的方式解决复杂问题，采取合乎道德和负责任的行动，增加价值并做出及时和平衡的决策 • 澳大利亚柑橘公司是首选雇主，员工流动率极低，战略性地招聘以发展区域影响力，提升员工技能以确保继任 • 澳大利亚柑橘公司制定并实施一项战略，以增加寻求行业中技术和半技术职位的学生和工人
通过 Cas12a/CBE 共编辑在 T0 代中产生无转基因抗溃疡病 Citrus sinensis cv. Hamlin
柑橘溃疡病影响柑橘生产。该病由柑橘黄单胞菌（Xcc）引起。先前的研究证实，在 Xcc 感染期间，转录激活因子样效应物 (TALE) PthA4 会从病原体转移到宿主植物细胞中。PthA4 与溃疡病易感基因 LOB1（EBE PthA4 -LOBP）启动子区中的效应物结合元件 (EBE) 结合，激活其表达，随后引起溃疡症状。之前，采用 Cas12a/CBE 共编辑方法破坏高度纯合的柚子的 EBE PthA4 -LOBP。然而，大多数商业柑橘品种都是杂合杂交种，更难产生纯合/双等位基因突变体。在这里，我们采用 Cas12a/CBE 共编辑方法来编辑 Hamlin（Citrus sinensis）的 EBE PthA4 -LOBP，这是一种在世界范围内种植的商业杂合柑橘品种。构建了二元载体 GFP- p1380N-ttLbCas12a:LOBP1-mPBE:ALS2:ALS1，并证明其可通过 Xcc 促进的农杆菌素过滤在 Hamlin 叶片中发挥作用。该构建体允许通过 GFP 选择无转基因再生体，编辑 ALS 以生成抗氯磺隆再生体作为基因组编辑的选择标记，这是通过 nCas9-mPBE:ALS2:ALS1 瞬时表达 T-DNA 的结果，并通过 ttLbCas12a 编辑感兴趣的基因（即本研究中的 EBE PthA4 -LOBP），从而产生无转基因柑橘。共产生了 77 株幼苗。其中 8 株幼苗为转基因植株（#Ham GFP 1 - #Ham GFP 8），4 株幼苗为非转基因植株（#Ham NoGFP 1 - #Ham NoGFP 4），其余为野生型。在 4 株非转基因幼苗中，三个品系（#Ham NoGFP 1、#Ham NoGFP 2 和 #Ham NoGFP 3）含有 EBE pthA4 的双等位基因突变，一个品系（#Ham NoGFP 4）含有 EBE pthA4 的纯合突变。我们在 C. sinensis cv. Hamlin 中实现了 EBE PthA4 – LOBP 的 5.2% 非转基因纯合/双等位基因突变效率，而之前研究中柚子的突变效率为 1.9%。重要的是，存活下来的 4 株无转基因植株和 3 株转基因植株均能抵抗柑橘
使用Musa paradisiaca和柑橘Sinensis epeel提取物对生物合成的纳米层的抗菌活性
这项研究的目的是评估从香蕉（Musa paradisiaca L.）和甜橙（柑橘Sinensis l.）果皮中的水提取物中生物合成的银纳米颗粒（AGNPS）生物合成的抗菌活性。使用特定量的香蕉和橙皮提取物以及Agno 3作为前体，成功地将Agnps成功地生物合成。AGNP溶液中明显的颜色变化，在24小时后从黄色转移到深棕色，是AGNP形成的初始指标。uv-vis分光光度计和粉末XRD吸收光谱均用于香蕉皮 - agnps（bpagnps）和橙皮 - agnps（opagnps）均表现出明显的峰，证实了AGNP的存在。此外，FTIR光谱表明存在有助于AGNP合成的酚类化合物。sem和DLS分析表明，两种类型的AGNP的球形均为球形，平均粒径小于100 nm。此外，发现在这项研究中检查的香蕉，橙色和木瓜的果实样品被塞里芽孢杆菌，金黄色葡萄球菌，大肠杆菌和烟曲霉污染，它们使用MALDI-TOF MS进行了分离和鉴定。这项研究还确定了尼日尔，A。Alterata，P。digitatum和F. oxysporum的感染是该地区水果变质的主要因素。均表现出显着的抗菌活性，尤其是针对土壤传播的病原体。A。faecalis和M. morganii（以30 µg/ml的抗氯霉素抗性），以及某些水果变质真菌，例如digitatum和F. oxysporum和F. oxysporum（对2％酮酮的抵抗），以前曾经在研究过，以前曾经研究过，以前曾经在研究过。均表现出显着的抗菌活性，尤其是针对土壤传播的病原体。A。faecalis和M. morganii（以30 µg/ml的抗氯霉素抗性），以及某些水果变质真菌，例如digitatum和F. oxysporum和F. oxysporum（对2％酮酮的抵抗），以前曾经在研究过，以前曾经研究过，以前曾经在研究过。因此，生物型AGNP显示出有效的抗菌剂在医疗环境中应用以及保存食品质量和安全性。