核心功能

酵母 Pah1 磷脂酸磷酸酶的催化​​核心功能揭示了其膜定位和活性控制的结构见解

PAH1 编码的磷脂酸 (PA) 磷酸酶是生产储存脂质三酰甘油的主要二酰甘油来源，也是酿酒酵母中从头合成磷脂的关键调节剂。Pah1 的催化功能取决于其膜定位，这是通过多种蛋白激酶的磷酸化和 Nem1-Spo7 蛋白磷酸酶复合物的去磷酸化来介导的。全长 Pah1 由催化核心（N-LIP 和 HAD 样结构域、两亲螺旋和 WRDPLVDID 结构域）和非催化调节序列（内在无序区域、RP 结构域和酸性尾部）组成，用于磷酸化和与 Nem1-Spo7 相互作用。催化核心如何调节 Pah1 定位和细胞功能尚不清楚。在本研究中，我们分析了 Pah1 的一种变体（即 Pah1-CC（催化核心）），它仅由催化核心组成。在低拷贝质粒上表达的 Pah1-CC 无需 Nem1-Spo7 即可补充 pah1 Δ 突变体表型（例如核/ER 膜扩张、三酰甘油水平降低和脂滴形成）。Pah1-CC 的细胞功能由其与膜部分主要相关的 PA 磷酸酶活性支持。尽管 Pah1-CC 具有功能性，但它在蛋白质和酶学特性方面与 Pah1 不同，包括过表达毒性、与热休克蛋白的关联以及 V max 值的显著降低。这些关于 Pah1 催化核心的发现增强了对其膜定位和活性控制结构要求的理解。