使用 dpy-10 Co-CRISPR 筛选标记和组装的核糖核蛋白复合物对 C. elegans rbm-3.2 基因进行 CRISPR/Cas9 编辑。
双歧杆菌的属脱颖而出,因为它是食品应用中最常用的益生菌之一。对双歧杆菌物种的鉴定仍然难以捉摸,现在使用特异性PCR引物的生化测试来鉴定双歧杆菌菌株的菌株。The aim of this study is to identify of some Bifidobacteria strains by chemical tests non the method of PCR, in this study it's found the ability of four strains of Bifidobacteria ( Bifidobacterium longum ATCC 15707 , Bifidobacterium bifidum LMGD 10645 , Bifidobacterium animalis and Bifidobacterium angulotum ).由葡萄糖,半乳糖,果糖,淀粉,乳糖,蔗糖,核糖和甘露醇发酵。在基底液体培养基(BLM)中进行碳水化合物发酵测试。 孵育后黄色的发展被认为是阳性结果。 此搜索中的所有菌株均发酵所有糖,我们发现B. bifidum和B. lotum可以发酵核糖,半乳糖和甘露醇或不能发酵。在基底液体培养基(BLM)中进行碳水化合物发酵测试。孵育后黄色的发展被认为是阳性结果。此搜索中的所有菌株均发酵所有糖,我们发现B. bifidum和B. lotum可以发酵核糖,半乳糖和甘露醇或不能发酵。
核糖核苷酸的生物起源前合成可能伴随着非规范核苷酸的合成,包括 TNA 的苏核苷酸构件。在这里,我们研究了活化苏核苷酸参与非酶模板指导聚合的能力。我们发现,与核糖核苷酸相比,多个连续苏核苷酸单体的引物延伸非常不利。动力学、核磁共振和晶体学研究表明,这部分是由于引物延伸过程中咪唑桥接 TNA 二核苷酸中间体的形成速度较慢,部分是由于攻击 RNA 引物 3'-羟基与进入的苏核苷酸中间体的磷酸盐之间的距离较大。在存在活化下游 RNA 寡核苷酸的情况下,即使是单个活化苏核苷酸,添加到引物中的速度也比活化核糖核苷酸慢 10 倍。相反,RNA 引物末端或 RNA 模板中单个活化的苏核苷酸仅导致引物延伸率略有下降,这与晶体结构所揭示的微小和局部结构扭曲相一致。我们的结果与异质原始寡核苷酸通过复制循环产生越来越同质的 RNA 链的模型相一致。
2 赫尔辛基大学医学院内科系,赫尔辛基,芬兰;3 赫尔辛基大学医学院系统肿瘤学研究项目,赫尔辛基,芬兰;4 美国马萨诸塞州查尔斯顿麻省总医院癌症中心;5 美国马萨诸塞州波士顿哈佛医学院;6 美国马萨诸塞州波士顿丹娜法伯癌症研究所肿瘤内科系;7 挪威卑尔根豪克兰大学医院血液科医学系;8 卑尔根大学临床科学系癌症生物标志物中心,卑尔根,挪威;9 赫尔辛基大学医院综合癌症中心血液学系,赫尔辛基,芬兰;10 芬兰癌症研究所基金会,赫尔辛基,芬兰
摘要:木质素是一种具有许多有希望的特性,对聚合物混合物有益。这项工作的主要目的是研究木质素与聚乳酸(乳酸)混合的加工性,兼容性和可回收性。将两种不同的商业牛皮木质蛋白和一个酚类有机溶胶木质素与聚(乳酸)以各种重量百分比混合,靶向高木质素含量(30、50和70 wt%)。获得的混合物通过融合沉积建模用于增材制造。所有获得的材料均通过拉伸试验,热重分析,不同的扫描量热法和31 p NMR的透度表征。通过重新排列多达四次,评估了聚合物混合材料的可回收性,并评估了它们的可打印性。结果表明,该材料在多达三个周期中保留了其机械性能,其拉伸强度降低了30%。酚类有机溶质木质素在更广泛的木质素含量上表现出更好的可打印性,同时保持相似的热和机械性能。关键词:基于生物的材料,回收,聚(乳酸),木质素,混合■简介
nclisiran 是一种寡核苷酸,与三天线 N-乙酰半乳糖胺碳水化合物结合,有助于药物与肝脏肝细胞上表达的脱唾液酸辅蛋白受体结合。当 inclisiran 被肝细胞吸收后,inclisiran 会与 RNA 诱导沉默复合物 (RISC) 结合,这是一种核糖核蛋白复合物,主要在基因沉默和调控中发挥作用。单链 RNA 可作为 RISC 的模板,以确定适当的信使 RNA 补体。RISC 还可以激活核糖核酸酶 (RNase) 并切割目标 mRNA。2 将 inclisiran 掺入 RISC 会通过靶向切割 PCSK9 特异性 mRNA 来破坏 PCSK9 翻译。这种切割导致肝脏 PCSK9 产生减少,从而导致 LDL 受体增加
摘要 Cre1 是一种重要的转录因子,可调节碳分解代谢抑制 (CCR),在真菌中广泛保守。cre1 基因已在几种子囊菌中得到广泛研究,而其在担子菌物种中基因表达调控的作用仍不太清楚。在这里,我们鉴定了 Coprinopsis cinerea 并研究了 cre1 的作用,Coprinopsis cinerea 是一种可以有效降解木质纤维素植物废物的担子菌模型蘑菇。我们使用一种基于 PCR 扩增的分裂标记 DNA 盒以及体外组装的 Cas9 引导 RNA 核糖核蛋白 (Cas9 RNPs) 的快速有效的基因缺失方法来生成 C. cinerea cre1 基因缺失菌株。两个独立的 C. cinerea cre1 突变体的基因表达谱显示碳水化合物代谢、植物细胞壁降解酶 (PCWDE)、质膜转运蛋白相关基因和几种转录因子编码基因等显著失调。我们的研究结果支持以下观点:与子囊菌中的报告一样,C. cinerea 的 Cre1 通过多种基因的联合调节来协调 CCR,包括 PCWDE、正向调节 PCWDE 的转录因子和可以导入可诱导 PWCDE 表达的单糖的膜转运蛋白。有些矛盾的是,虽然与其他伞菌一致,但与木质素降解相关的基因在 cre1 突变体中大多下调,表明它们受到的调节与其他 PCWDE 不同。基因缺失方法和此处提供的数据将扩展我们对担子菌中 CCR 的了解,并为与植物生物质降解相关的基因提供功能假设。
成簇的规律间隔短回文重复序列 (CRISPR)/CRISPR 相关蛋白 9 (Cas9) 系统已成为修改多种细胞类型基因表达的重要工具,在肿瘤治疗中显示出前所未有的潜力 (2)。许多研究已将 CRISPR/Cas9 应用于治疗相关的体外和体内实验 (3)。然而,由于 Cas9 蛋白的尺寸较大 (160 kDa),CRISPR/Cas9 的应用受到限制。迫切需要高效、安全地将 CRISPR/Cas9 递送到 AML 细胞中以探索新的治疗靶点。近年来,CRISPR/Cas9 核糖核蛋白 (RNP) 复合物已通过电穿孔直接递送到肿瘤细胞中,由于 RNP 复合物的寿命短,脱靶效应减少 (4-9)。
摘要:在临床癌症病例中,使用基于下一代测序的癌症基因小组分析在临床癌症病例中检测到了许多不确定意义(VU)的变体。阐明VUS的一种策略是使用基因组编辑具有靶向基因变异的培养癌细胞系的功能分析。基因组编辑是在培养的癌细胞系中创建所需基因改变的强大工具。然而,基因组编辑的效率在感兴趣的细胞线之间有很大变化。我们进行了比较研究,以确定人胶质母细胞瘤(GBM)细胞系中血小板衍生生长因子受体α(PDGFRA)变体的最佳编辑条件。在监测PDGFRA的拷贝数和PDGFRα蛋白的表达水平后,选择了四个GBM细胞系(U-251 mg,KNS-42,SF126和YKG-1细胞)。要比较这些GBM细胞系中的编辑效率,定期插入的簇的模式是定期间隔短的短腔重复(CRISPR)相关蛋白9(CAS9)递送(质粒与核糖核蛋白(RNP)),转移方法(Lipoffection vs. Electortoration and Electolation),以及有用的,有用。在此,我们证明了用单靶RNA(Cas9 RNP复合物)将CAS9转移的转移可以充分地编辑目标核苷酸取代,而不论细胞分类如何。作为CAS9 RNP复杂方法比CAS9质粒唇彩方法显示出更高的编辑效率,因此在我们的实验条件下,它是人类GBM细胞系中单核苷酸编辑的最佳方法。
摘要:珊瑚礁是所有海洋生态系统中生物多样性最丰富的;然而,人们对这些系统中的原核生物多样性知之甚少。为了解决这个问题,我们对巴拿马和百慕大的 3 种大型珊瑚(Montastraea franksi、Diploria strigosa 和 Porites astreoides)的 1000 多个细菌 16S rDNA 进行了测序。仅对 14 个珊瑚样本的分析就产生了 430 种不同的细菌核糖体型。统计分析表明,额外的测序将产生总共 6000 种细菌核糖体型。其中半数序列与之前发表的 16S 序列的同一性不到 93%,因此可能代表新的细菌属和物种;这种新颖性程度远远高于其他海洋样本的新颖性。来自巴拿马珊瑚的样本比来自百慕大的样本更具多样性,与后生动物的多样性梯度相似。珊瑚-细菌关联是非随机的。不同的珊瑚物种拥有不同的细菌群落,即使它们在物理上相邻,而同一珊瑚物种在时间(约 1 年)或空间(3000 公里)上相隔的细菌群落则相似。对分枝珊瑚 Porites furcata 的分析表明,细菌核糖体型也可以在群落内按空间结构排列。因此,珊瑚和礁石代表了多样化、生态结构化的原核生物群落景观。