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通过对日本稻核孔蛋白基因 OsCPR5.1 进行基因组编辑，而非对 OsCPR5.2 进行基因组编辑，实现对水稻黄斑驳病毒的抗性
水稻黄斑驳病毒 (RYMV) 是导致非洲最严重的水稻疾病之一。RYMV 的管理具有挑战性。遗传抗性是最有效且环境友好的控制方法。隐性抗性基因座 rymv2 (OsCPR5.1) 已在非洲水稻 (O. glaberrima) 中被鉴定，然而，由于跨越障碍，将其渗入 O. sativa ssp. japonica 和 indica 仍然具有挑战性。在这里，我们评估了是否可以使用 CRISPR/Cas9 基因组编辑两个水稻核孔蛋白同源物 OsCPR5.1 (RYMV2) 和 OsCPR5.2 来将 RYMV 抗性引入粳稻品种 Kitaake。这两个同源物已被证明可以补充拟南芥 atcpr5 突变体的缺陷，表明存在部分冗余。尽管这两个旁系同源物在序列和结构上具有惊人的相似性，但只有 o scpr5.1 功能丧失突变体具有完全抗性，而 oscpr5.2 功能丧失突变体仍然易感，这表明 OsCPR5.1 在 RYMV 易感性中起着特殊作用。值得注意的是，在 OsCPR5.1 的 N 端结构域（预计为非结构化）中存在短的框内缺失或替换的编辑系对 RYMV 高度敏感。与导致植物严重矮化的单个拟南芥 AtCPR5 基因突变相比，oscpr5.1 和 oscpr5.2 单敲除突变体既没有表现出显著的生长缺陷，也没有表明程序性细胞死亡的症状，这可能反映了同工型在其他重要功能方面的功能冗余。对 OsCPR5.1 进行特定编辑，同时保持 OsCPR5.2 活性，为在优良稻种系中产生 RYMV 抗性以及与其他 RYMV 抗性基因或其他性状有效叠加提供了一种有前途的策略。
利用 CRISPR 干扰技术高效、快速地灭活核梭杆菌的基因
摘要 通过在具核梭杆菌中创建框内缺失突变来使基因失活非常耗时，并且大多数具核梭杆菌菌株在遗传上是难以处理的。为了解决这些问题，我们引入了一种基于核糖开关的可诱导 CRISPR 干扰 (CRISPRi) 系统。该系统采用核酸酶失活的化脓性链球菌 Cas9 蛋白 (dCas9)，通过持续表达的单向导 RNA (sgRNA) 特异性地引导至目的基因。从机制上讲，这种 dCas9-sgRNA 复合物成为 RNA 聚合酶难以逾越的障碍，从而抑制了目标基因的转录。利用这个系统，我们首先研究了两个非必需基因 ftsX 和 radD，它们对于具核梭杆菌的胞质分裂和共聚集至关重要。添加诱导剂茶碱后，ftsX 抑制导致类似于染色体 ftsX 缺失的丝状细胞形成，而靶向 radD 则显著降低 RadD 蛋白水平，消除 RadD 介导的共聚集。随后将该系统扩展到探测必需基因 bamA 和 ftsZ，这两个基因对于外膜生物合成和细胞分裂至关重要。令人印象深刻的是，bamA 抑制破坏了膜完整性和细菌分离，阻碍了生长，而 ftsZ 靶向会在肉汤中产生细长的细胞，并且琼脂生长受到损害。对 F. nucleatum 临床菌株 CTI-2 和 Fusobacterium periodonticum 的进一步研究表明，靶向 tnaA 时吲哚合成减少。此外，沉默 F. periodonticum 中的 clpB 会降低 ClpB，从而增加热敏感性。总之，我们的 CRISPRi 系统简化了各种梭杆菌菌株的基因失活。
DCF 250 家庭儿童保育中心许可规则...
注册日期：2024 年 8 月 编号：威斯康星州法规第 824 条第 48.65 节规定，经营儿童保育中心的人员必须获得儿童和家庭部的许可，这些中心每天为 4 名或以上 7 岁以下儿童提供不到 24 小时的照顾和监督。该法规还要求该部门制定规则，这些规则必须符合才能获得许可，并保护和促进儿童保育中心儿童的健康、安全和福利。DCF 250 章是管理每天为 4-8 名儿童提供不到 24 小时照顾和监督的家庭儿童保育中心的行政法规。尽管 DCF 250 家庭儿童保育规则（带注释）主要作为许可专家的工具而编写，但它的目的是帮助 DCF 250 的所有用户了解规则的意图和应用。已尝试对那些经验表明澄清会有所帮助的规则提供评论。但是，评论不可能涵盖遇到的所有情况。需要更多信息的提供商应联系其区域许可专家。本出版物中编号并以常规印刷形式印刷的部分是行政代码 DCF 250。本出版物中方框内和斜体印刷的部分是早期护理监管局工作人员准备的评论。每页都有一个标题，其中包含从该页开始的规则部分的规则引用。还包括目录和索引，以及包含与儿童保育规则相关的主要法规的附录、DCF 13（管理儿童保育背景调查的行政规则）的副本以及规则中引用的其他附录。本出版物可复印，也可在该部门的网站上找到：https://dcf.wisconsin.gov/cclicensing/rules 儿童和家庭部是一个提供平等机会的雇主和服务提供商。如果您有残疾，需要获得服务、以其他格式接收信息或需要将信息翻译成其他语言，请联系早期护理监管局，邮箱地址为 dcfcclicreg@wisconsin.gov，电话为 (608) 421-7550。聋人、听力障碍者、聋盲人或言语障碍者可以使用免费的威斯康星中继服务 (WRS) - 711 联系该部门。如有民权问题，请致电 608-422-6889（一般）或威斯康星中继服务 (WRS) 711。DCF 是雇主和平等机会提供者。如果您有残障并需要其他格式的信息，或者希望将其翻译成其他语言，请通过 dcfcclicreg@wisconsin.gov、608-421-7550（常规）或威斯康星中继服务 (WRS) 711 联系 BECR。对于民权问题，请致电 608-422-6889（一般），或威斯康星州中继服务 (WRS) 711。DCF 是提供平等机会的雇主和服务提供商。如果您有残障并需要以其他格式访问此信息，或者需要其他语言的翻译，请通过 dcfcclicreg@wisconsin.gov、608-421-7550（通用）或威斯康星中继服务 (WRS) 711 联系 BECR。如需了解民事事宜，请致电 608-422-6889（通用）或威斯康星州中继服务 (WRS) 711。
使用配对的Prime编辑
1 Precise genomic deletions using paired prime editing 2 3 Junhong Choi 1,2*# , Wei Chen 1,3* , Chase C. Suiter 1,4 , Choli Lee 1 , Florence M. Chardon 1 , Wei Yang 1 , Anh 4 Leith 1 , Riza M. Daza 1 , Beth Martin 1 , and Jay Shendure 1,2,5,6# 5 6 1 Department of Genome Sciences, University美国西雅图，华盛顿州华盛顿州98195，美国7 2霍华德·休斯医学研究所，西雅图，西雅图，华盛顿州98195，美国8 3分子工程与科学研究所，华盛顿大学西雅图大学，华盛顿大学98195，美国9 4分子和细胞生物学计划98195，美国11 6 Allen Discovery Cell Lineage Tracing中心，华盛顿大学西雅图，华盛顿州98195，美国12 13 *这些作者同样贡献了14＃对应关系：junhongc@uw.edu（J.C.）15 16 17摘要18 19精确地删除基因组序列的技术可用于研究20功能，并有可能用于基因治疗。针对编程的21删除的领先当代方法使用CRISPR/CAS9和成对的指南RNA（GRNA）产生附近的两个双链22间断，然后通常在DNA修复过程中删除中间序列。但是，23这种方法可能是效率低下和不精确的，其中包括两个目标站点24的小indels，以及意外的大删除和更复杂的重排。我们证明，与CRISPR/CAS9和GRNA Pairs相比，Prime-Del在编程缺失中的精度明显高28。44 45在这里，我们描述了一种基于Prime-Del的基于25个编辑的方法，该方法使用一对原始编辑的26个GRNA（PEGRNA）诱导删除，该方法靶向相反的DNA链，有效地编程了27个站点，还可以对其进行修复的结果进行编程。我们还表明，29个Prime-Del可用于将基因组删除与短插入相结合，从而使30个连接的缺失不落在原始的Adjacent-Adjacent基序（PAM）位点。最后，我们证明了延长31素数编辑组件的表达时间窗口可以大大提高效率32，而不会损害精度。我们预计，Prime-Del将在启用33个精确，灵活的基因组缺失编程（包括框内删除）以及epiTope 34标记以及可能用于编程重排的基因组删除方面非常有用。35 36简介37 38精确操纵基因组的能力可以严格地研究39个特定基因组序列的功能，包括基因和调节元件。在过去的十年中，基于CRISPR/CAS9的40个技术在这方面已被证明具有变革性，从而可以将41个基因组基因座的精确靶向，并迅速扩大了编辑或扰动方式的曲目1。在42中，特定基因组序列的精确和不受限制的缺失尤为重要，功能性基因组学和基因治疗中有43例关键用例。