动力学是对反应速率的研究。 Study of enzyme kinetics is useful for measuring concentration of an enzyme in a mixture (by its catalytic activity), its purity (specific activity), measurement of the catalytic efficiency and/or the specificity of an enzyme, comparison of different forms of the same enzyme in different tissues or organisms, effects of inhibitors (which can give information about catalytic mechanism, structure of active site, potential治疗剂...)通过Michaelis-Menten方程来描述许多酶的速度对[底物]的依赖性。动力学参数:
a. [S] = K m b. [S] >> K m c. [S] << K m 7. 数据收集和处理 a. Lineweaver-Burk;双倒数;1/v 0 vs. 1/[S] b. Eadie-Hofstee;v 0 vs. v 0 /[S] c. Hanes-Woolf;[S]/v 0 vs. 1/[S] 8. 抑制 a. 不可逆:蛋白质修饰 b. 可逆 A. 竞争性;与底物相同;K m 受 (1 + [ I ]/ KI ) = a 的影响 B. 非竞争性;仅与 ES 结合;K m 和 V max 受到相反的影响 C. 非竞争性;与 E 和 ES 同时结合(混合、不平等结合);V max 受到影响 D. 如果 I 与 E 的结合方式与与 ES 的结合方式不同,则为混合抑制
引言人们早已认识到肿瘤具有免疫抑制作用,这解释了为什么肿瘤和肿瘤反应性免疫细胞可以在同一癌症患者体内和平共处(Hellstrom 悖论),也解释了为什么只有少数癌症免疫治疗患者能观察到持久反应(1、2)。受这一悖论的启发,我们小组的研究致力于解决这一重大问题,从而发现了一种基本的生化免疫抑制机制,该机制可保护重要器官免受抗病原体免疫反应的附带损害(3),并保护癌组织免受抗肿瘤免疫反应的损害(4)。在本综述中,我们总结了我们对缺氧/A2-腺苷酸免疫抑制的研究,这些研究已被其他几个小组证实和扩展,从而促成了目前对癌症抗缺氧/A2-腺苷酸免疫疗法的临床试验。这些试验通过防止抑制内源性发育或免疫疗法激活的肿瘤反应性免疫细胞,显示出了良好的结果(5、6)。为了进一步改善癌症免疫治疗,我们强调了氧合剂和呼吸性高氧相结合的优势
这是有关酶和酶抑制剂及其在医学和诊断中的应用的第一期的第一部分。第一篇论文着重于在需要长时间存储蛋白质的情况下维持MBCOMT的稳定性。膜结合的儿茶酚 - 甲基转移酶(MBCOMT)负责儿茶酚神经素 - 米特脱位的主要途径。该酶与几种类型的人类痴呆有关,新的,有效的无毒抑制剂已开发用于帕金森氏病治疗。,这种酶的不稳定性代表了新药开发的主要障碍,因为它倾向于迅速失去其生物学活性。离子液体可以帮助保持蛋白质稳定性和折叠,并由于其多种离子组合而预防蛋白质聚集。在酶缓冲液中添加添加剂,例如半胱氨酸,甘油和海藻糖,在最小化MBCOMT损伤并增强其稳定性方面显示出令人鼓舞的结果。结果表明,作者使用的缓冲液不仅导致HMBComt活性维持高达32.4 h,因此可以在-80℃下储存,而且与原始水平相比,生物学活性在-80℃下的储存量最高约40%[1]。第二篇论文的目的是在需要长时间存储蛋白质的情况下评估HMBCOMT的稳定性。作者测试了几个健康对照样品以验证测定法,然后研究了诊断出患有白内障,青光眼,过敏,干眼和叶博天腺功能障碍的患者的20个撕裂样本。获得的结果证实了ABMAS检验的可靠性,以量化人撕裂样品中MMP-9浓度的定量。因此,作者得出的结论是,生物标志物检测技术的使用对于评估预后和使眼科医生的工作更加容易,从而使患者健康的改善更大[2]也是有利的[2]。第三篇论文探讨了mpelanin浓度的激素1(MCHR1)拮抗剂的发展,这对于治疗肥胖症很有用。考虑到其结合位点类似于人类(HERG)通道的事实,并且由于HERG引起的心脏毒性,基于机器学习的预测模型在临床发育中开发的大多数药物在临床发展中失败了,这对于克服这些困难而言是有用的。考虑到这一点,作者试图使用基于DNN的机器学习模型发现新的MCHR1拮抗剂,而没有心脏毒性,并通过分析基因表达来识别新的适应症。结果,作者确定了具有心脏毒性的KRX-104130 MCHR1拮抗剂。此外,发现通过使用基于转录组的药物重新定位方法,可以识别该拮抗剂的新指示。因此,作者表明KRX-104130增加了低密度脂蛋白受体(LDLR)的表达,这是胆固醇水平降低的原因。此外,有人提到,这种拮抗剂通过降低肝脂质积累的程度,肝脏
恒温扩增核酸检测技术因其耗时短、对扩增 设备要求低和引物探针商品化合成稳定等优势 , 在 病原快速检测技术中脱颖而出。 Piepenburg 等 [ 13 ] 参 照 T4 噬菌体 DNA 复制系统于 2006 年创建了一种新 型等温扩增技术 , 使用酶来打开双链 DNA, 该技术 称为重组酶聚合酶扩增 (Recombinase polymerase am- plification, RPA) 。随后发明的重组酶介导链置换 核酸扩增技术 (Recombinase-aid amplification, RAA) 技术原理与 RPA 类似 , 不同之处在于 RAA 的重组酶 来源于细菌或真菌 , 而 RPA 的重组酶来自 T4 噬菌 体。 2017 年 [ 14 ] 结合以上重组酶 , SHERLOCK (Specifi- chigh-sensitivity enzymatic reporter unlocking) 检测 方案问世 , 并应用于新冠病毒的检测技术开发 [ 15 ] , 该技术通过改造规律间隔成簇短回文重复序列及 其关联蛋白 (Clustered regularly interspaced short pa- lindromic repeats/CRISPR-associated proteins system, CRISPR/Cas) 系统 , 使其能够识别特定的严重急性 呼吸综合征冠状病毒 2 (Severe acute respiratory syn- drome coronavirus 2, SARS-Cov-2) 基因组片段 , 1h 就能确定检测结果 , 检测限可低至 2 amol/L 。 SHER- LOCK 技术特异和简便 , 将 SHERLOCK 与 RAA 整合 集成 , 能够凸显两者的优势 , 不仅可以实现靶标核 酸的快速扩增 ( 保留等温扩增技术的优势 ), 还增强 了检测特异性。